链格孢菌产毒菌株及产毒培养基的筛选

第19卷第3期湖北民族学院学报(自然科学版)V ol.19　N o.3 2001年8月 Journal of Hubei Institute for Nationalities(Nat.Sci.) Aug.2001

文章编号:1008-8423(2001)03-0007-04

链格孢菌产毒菌株及产毒培养基的筛选

万佐玺1,周光来2,强　胜1

(1.南京农业大学植物科学系,江苏南京210095;

2.湖北民族学院园艺系,湖北恩施445000)

摘要:对紫茎泽兰(Eupatoriun adenophorum Spreng.)的自然致病菌-链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.)

K eissler)的6个菌株501、402、503、LS、Y N、AW的产毒能力进行了比较研究,选出501菌株产毒能力最

强;同时对501菌株的产毒培养条件进行了研究.结果表明:小麦培养基(水的质量分数40%)和PSK培

养基分别可以作为产毒的固体和液体培养基.

关键词:链格孢菌;产毒能力;产毒培养基;筛选

中图分类号:S497 文献标识码:A

紫茎泽兰(Eupatoriun adenophorum S preng.)是一种世界性恶性杂草,现已危害世界30多个国家和地区,寻求防除紫茎泽兰的有效措施成为世界范围关注的问题[1,2].由于紫茎泽兰是一种环境性杂草,生境十分复杂,难以用人工和化学的方法加以控制,生物防除成为理想的选择[3-5].链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.) K eissler)是紫茎泽兰的自然致病菌,有潜力发展成为防除紫茎泽兰的真菌除草剂[6].链格孢菌引起紫茎泽兰致病与其产生的毒素有关[7].因此,筛选产毒能力强的菌株作为生防真菌是非常重要的.另外,菌株的产毒能力与其培养条件关系很大,尤其是培养基的选择[8,9].为此,作者对链格孢菌的6个菌株501、402、503、LS、Y N、AW的产毒能力进行了比较分析,并对产毒培养条件进行了研究.

1　材料与方法

1.1　材料

供试菌株:501、402、LS、Y N、503、AW.

供试植物:紫茎泽兰种子采自云南省昆明市;紫茎泽兰幼苗为培养2周的子叶期幼苗;紫茎泽兰成株为培养5个月的突生菌.

1.2　方法

1.2.1　菌株培养方法、无菌滤液的制备、无菌滤液和粗毒素的生测方法参见文献[10].

1.2.2　产毒菌株的筛选

对501、402、503、LS、Y N、AW等6个菌株按1.2.1方法培养后,用4层纱布过滤,将菌丝洗净,于80℃下烘干,称重;以滤液制备无菌滤液,用种子萌发抑制法、幼苗浸渍法、离体叶片针刺法进行生测,对6个菌株的产毒能力分析比较.CK0用无菌水,CK1用无菌处理的PSK,重复3次.

1.2.3　产毒培养条件的设置

1.2.3.1　固体培养基的筛选

以大米、小麦、玉米、大豆等材料作培养基,培养501菌株,然后制备粗毒素,比较产毒差异.具体方法是:将上述4种材料各称取100g,装入500ml的三角瓶中,用清水淘净后,再浸泡10h,除去多余水分,置于灭菌锅中灭菌30min(121℃),冷却后接种501菌株,于25℃、12h L(光照)/12hD(黑暗)的条件下培养,每天摇动1 -2次三角瓶,避免结块,3周后取出培养物,80℃下烘干、粉碎,然后用乙酸乙酯萃取3次,合并乙酸乙脂相,

收稿日期:2001-03-06.

基金项目:农业部九五高技术和基础研究项目(960205);国家教委博士点基金资助(02-03-031).

作者简介:万佐玺(1968-),男(土家族),湖北建始人,硕士,讲师,主要从事生物防治研究,现在湖北民族学院园艺系任教.

常压蒸馏回收乙酸乙酯,获得粗毒素.将粗毒素配制成相当于0.5g 培养物的毒素/ml 的质量浓度,用针刺法进行生测.CK 用同样质量浓度(相当于0.5g 培养基的抽提物/ml )的培养基抽提物,重复3次.

1.2.3.2　小麦培养基水的质量分数的确定

取小麦100g ,分别加水20、30、40、50、60g ,培养、粗毒素制备、生测等方法同1.2.3.1,重复3次.

1.2.3.3　液体培养基的筛选

PSK 培养基:200g 土豆,30g 蔗糖,1g K 2HPO 4,加水至1L ;

SCSC 培养基(改良):15g 玉米粉+15g 黄豆粉于80℃下水浴6h ,用4层纱布过滤,取滤液,30g 蔗糖,3g CaC O 3,加水至1L ;

紫茎泽兰叶汁培养基:200g 紫茎泽兰叶,30g 蔗糖,1gK 2HPO 4,加水至1L.

用以上3种液体培养基培养501菌株后,制备无菌滤液,用离体叶片针刺法生测比较产毒差异.CK 用无菌水,其他对照用各自的培养基,各重复3次.

2　结果与分析

2.1　链格孢菌不同菌株产毒能力的差异

501、402、503、Y N 、LS 、AW 等6个菌株均是从自然发病的紫茎泽兰叶病斑上分离筛选出来的,对紫茎泽兰均有一定程度的致病性.6个菌株的无菌滤液对紫茎泽兰的种子萌发没有明显的抑制作用,6个菌株的无菌滤液与CK 0(无菌水)相比,差异不显著;但与CK 1(PSK )相比,差异极显著,CK 0与CK 1的差异也是极显著,这个结果表明,6个菌株的代谢产物对紫茎泽兰种子的萌发没有明显影响,而PSK 对紫茎泽兰种子的萌发有明显的促进作用(图1)

.

6个菌株的无菌滤液对紫茎泽兰子叶期幼苗都有致萎作用,而且差异较大.处理后的第5d ,501菌株的致萎率达到100%,与其他菌株相比,差异显著,CK 1和CK 0对幼苗没有影响(图2).从6个菌株的无菌滤液对紫茎泽兰叶片的致病能力来看,501菌株的致病能力最强,与其他5个菌株相比,差异达到极显著水平(P <0.01)(图3)

.

经过上述分析,可以认定501菌株的产毒能力最强,此结果与强胜的研究结果与文献[6]相吻合,说明毒素在链格孢菌的致病过程中有重要作用.

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