盐酸小檗碱前体脂质体的制备及理化性质研究

盐酸小檗碱前体脂质体的制备及理化性质研究目的制备盐酸小檗碱前体脂质体，并对其理化性质进行考察。方法采用

薄膜载体沉积法制备盐酸小檗碱前体脂质体，正交实验优选处方；透射电镜观察形态；马尔文激光粒度仪测定粒径；高效液相色谱法测定包封率。结果电镜下观察脂质体形态多为圆形或椭圆形，平均粒径为741 nm，包封率为（29.93±1.32）%。结论该方法制备工艺简单，易于工业化生产。

[Abstract] Objective To prepare berberine hydrochloride proliposomes and investigate its physicochemical properties. Methods Proliposomes were prepared by film-deposition oncarriers. Orthogonal design was used to select the optimum formulation. The shape and particle size of proliposomes were investigated by transmission electron microscope and laser scatter. The encapsulation efficiency was determined by HPLC. Results The berberine hydrochloride liposome vesicles were globular or elliptic under the electronic microscopy. The average size of the liposomes was 741nm. The encapsulation efficiency was(29.93±1.32)%. Conclusion The preparation method is simple and easily industrialized preparation .

[Key words] Berberine hydrochloride;Proliposomes;Liposomes

小檗碱（berberine）又称黄连素，常用于治疗肠道炎症。现代研究发现它对于心律失常、高血压、高脂血症、糖尿病和肿瘤等也具有较好的治疗作用[1]。但由于盐酸小檗碱口服血药浓度低，维持时间短，难以达到有效的治疗浓度，若长期大剂量给药，又会产生诸多不良反应。1986年，英国学者Payne等[2]首次提出了前体脂质体（proliposomes）这一概念，是指将脂质材料吸附于水溶性载体上，制备成的干燥颗粒或粉末。当口服给药时，与体液接触，脂质溶胀而载体迅速溶解，在水相中形成脂质体，能促进药物的吸收[3]。为解决盐酸小檗碱吸收差及生物利用度低和普通脂质体不稳定等问题，本实验首次探讨了盐酸小檗碱前体脂质体的制备工艺并对其理化性质进行研究。

1仪器与试药

日本岛津高效液相色谱仪（LC-20AT四元泵、CTO-10ASVP柱温箱、SPD-20A 紫外检测器）；752紫外可见分光光度计（上海现科分光仪器有限公司）；RE-2000A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-D（III）循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；pHS-3C精密酸度计（上海伟业仪器厂）；BSl10S 型1/万电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；JEM-1230透射电子显微镜（日本电子公司）；Zetasize Nano ZS纳米粒度仪（英国马尔文）；Olympus CX21 型显微镜（日本）。

盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号

110713-200911）；盐酸小檗碱提取物（四川什邡鸿鸣药物原料有限公司）；

Sephadex G-50 coarse（Pharmacia进口分装）；Lipoid S75天然大豆磷脂（德国Lipoid公司，纯度＞75%）；胆固醇（Amresco分装）；麦芽糖糊精Maltrin M700（Grain Processing Corporation赠样）；乙腈（色谱纯）；其他试剂为分析纯。

2方法与结果

2.1盐酸小檗碱前体脂质体的制备

2.1.1制备方法采用薄膜载体沉淀法制备：称取处方量的磷脂、胆固醇及盐酸小檗碱适量，溶于无水乙醇中，形成澄明溶液。另取适量麦芽糖糊精（载体）置100 mL圆底烧瓶中，于旋转蒸发仪上快速转动30 min（40~50℃）至呈流动态，分次向载体粉末中加入上述澄明溶液适量，旋转蒸发至干。置真空干燥器中干燥过夜，即得盐酸小檗碱前体脂质体，取出密闭于西林瓶中，置冰箱4℃保存，备用。取前体脂质体加适量蒸馏水水合，振摇混合均匀至呈无不溶性颗粒，即得脂质体混悬液。

2.1.2正交设计实验通过大量预实验，初步拟定了盐酸小檗碱前体脂质体的制备工艺。为确定最优处方，以包封率为指标，以磷脂药物比（A）、磷脂胆固醇比（B）、载体磷脂比（C）为考察因素，每个因素选择3个水平，选用L9（34）正交表进行实验。见表1。方差分析结果表明，3个因素对脂质体包封率的影响均不显著。故依据极差分析结果，确定最优水平组合为A2B2C1，即磷脂/药物为8︰1，磷脂/胆固醇为4︰1，载体/磷脂为2︰1。见表2、3。

2.1.3验证试验按筛选的处方和工艺制备前体脂质体，测得其包封率为（29.93±1.32）%。

2.2盐酸小檗碱前体脂质体包封率的测定

2.2.1色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.033 mol/L KH2PO4（35∶65），用H3PO4调至pH

3.2；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：345 nm，进样10 μL。

2.2.2线性关系的考察精密称取盐酸小檗碱对照品10 mg，用甲醇溶解定容于50 mL量瓶中，得0.2 mg/mL对照品储备液，精密量取储备液适量，分别稀释成0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、8.0 μg/mL的标准溶液，按“2.2.1”项下的色谱条件测定。以峰面积（y）对样品浓度（x）进行线性回归，得回归方程为：y=43 728x+382.68，R2=0.999 9，表明盐酸小檗碱在0.2～8.0μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系。

2.2.3精密度试验精密量取盐酸小檗碱对照品储备液适量，用蒸馏水稀释至浓度为2.0μg/mL的标准溶液。重复进样5次，平均峰面积为885 14，RSD为0.41%。结果表明该方法精密度良好，符合要求。

2.2.4回收率试验精密量取9份空白脂质体混悬液0.5 ~ 10 mL量瓶中，分别加入3个浓度的盐酸小檗碱对照品溶液，每个浓度3份，加入体积分数为10% 的