CpG寡核苷酸对人外周血B淋巴细胞免疫刺激作用
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Abstract: Objective T o inv estig ate the po tential of immuno stimulator y CpG -OD N 2006 and CpG -O DN 2216 t o enhance sur face mo lecules ex pr ession o n human peripher al blo od B lymphocyt e, such as M HC-Ⅰ, M HC-Ⅱ, CD80 and CD86, which is associa ted with antigen pr ocessing. Methods T he PBM Cs w er e incuba ted w ith CpG -OD N 2006 or CpG -OD N 2216 after a 48-ho ur period, t he expr essio n of sur face molecules CD69, M HC-Ⅰ, M HC-Ⅱ, CD 80 and CD86 o n B ly mpho cyte wer e ex -
现代检验医学杂志 2006 年 7 月第 21 卷第 4 期 J M od Lab M ed, Ju ly 2006, V ol . 21, N o. 4
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CpG 寡核苷酸对人外周血 B 淋巴细胞免疫刺激作用X
陈军浩a, 吴 超b , 欧阳建c, 刘 勇a, 耿东进a ( 南京大学医学院附属南京鼓楼医院 a. 医学检验中心; b. 感染科; c. 血液科, 江苏南京 210008)
2 结果 CD3 阳性T 淋巴细胞、CD20 阳性B 淋巴 细胞表面CD69 的表达, 分别反映了 T 、B 淋巴细胞 早 期 活 化 状 况。 实 验 结 果 表 明: CpG 刺 激 PBMHale Waihona Puke BaiduC48h, T 淋巴细 胞 CD69 表达无显著 性差别 ( P > 0. 05) , B 细胞表面 CD69 表达差异显著( P < 0. 05) , 以 CpG-ODN2216 活化 B 细胞的能力更强。 CpG-ODN2006 和 CpG-ODN2216 均能显著提高 B 淋巴细胞表面共刺激分子 CD80、CD86 的表达( P < 0. 05) , 仍以 CpG-ODN2216 的作用较强。CpGODN2006 和 CpG-ODN2216 均能提高 B 淋巴细胞 M HC-Ⅰ( P < 0. 05) 、M HC-Ⅱ( P < 0. 05) 的表达。 详细结果见表 1。
关键词: CpG-ODN; B 淋巴细胞; M HC-Ⅰ; MHC-Ⅱ; CD80; CD86 中图分类号: R392. 12 文献标识码: A 文章编号: 1671-7414( 2006) 04-001-03
The Immunostimulatory Effects of CpG Oligonucleotide on Human Peripheral Blood B Lymphocyte
by CpG -O DN 2216. T here was significa ntly differ ence betw een t he gr oup o f CpG -OD N and the g ro up of co ntr ol ( P < 0. 05) . Conclusion CpG -OD N t rigg er a str ong up-reg ulation of sur face mo lecules a sso ciated w ith ant ig en pro cessing on human B lymphocy te. A ll these surface mo lecules ar e majo r impo r tance fo r pr ofessional A PC function. Keywords: CpG -O DN ; B ly mpho cyte; M HC-Ⅰ; M HC-Ⅱ; CD80; CD 86
摘 要: 目的 观察 CpG -O DN 2006 和 CpG-ODN 2216 对健康 人外周血单个核细胞中 B 淋巴细胞抗原递呈相关 分子 M HCI、M HC-Ⅱ 及共 刺激 分子 CD80、CD86 表达 的影 响, 探讨 CpG -OD N 对 B 淋巴 细胞 抗原 递呈 功能 的作 用。方 法 CpG O DN 2006、CpG -O DN 2216 与健康人 P BM C 共培养 48 h, 用流式细胞技术以 CD 19-Pr eCP“设门”其中 B 淋巴细胞 , 检测其表 面 CD69、M HC-Ⅰ、M HC-Ⅱ、CD80 及 CD 86 的表达状况, 并与未加 CpG -OD N 组进行比较。B 淋巴细胞 M HC-I 、M HC-Ⅱ的 表 达量以 几何平 均荧光 强度表 示( M FI ) ; CD 80、CD 86 的表 达量以 阳性细胞 百分率 表示。结果 CpD -O DN 2006 和 CpG O DN 2216 均显著提高B 淋巴细 胞CD69、M HC-Ⅰ、M HC-Ⅱ、CD80 及CD 86 的表达, 与未加 CpG -O DN 组比较有显著性差异 ( P < 0. 05) 。CpG -O DN 2216 使B 淋巴细胞表面抗原递呈相关分子的增加量更为明显。结论 CpG -O DN 能够提高B 淋巴细 胞表面抗原递呈相关分子和共刺激分子 的表达, 能增强 B 淋巴细胞递呈抗原的能力。
CD69-PE、CD19-PreCP、CD20-FIT C、CD3-Pr eCP 为BD Biosciences 产品。F ACSCalibur 流式细胞仪 为美国 BD 公司产品。 1. 2 检测方法 取 9 例健康献血员外周血 5 ml, 以肝素抗凝。用淋巴细胞分离液( A XIS-SHEL DL ymphoPREP ) 分 离外周血单个 核细胞, 以 10 g/ dlF CS RPM I1640 洗涤细胞一次, 并调整细胞浓度 为2×106/ m l, 加入到24 孔培养板中, 1 ml / 孔。设对 照孔( 不加 CpG-ODN) , 其余分别加入 10 Ll CpGODN2006 或 CpG-ODN 2216 终 浓 度 均 为 1. 0 Lmol/ L , 37 ℃, 5% ( v / v) CO2 条件下培养 48 h。取 出 细胞以 10 g / dl F CS RPM I1640 洗涤一次, 三色 荧光法标记 T 、B 淋巴细 胞表面活化分子 ( CD69PE/ CD20-F IT C/ CD3-P reCP ) 、抗原递呈相关分子 ( MHC-I-PE/ M HC-Ⅱ-F IT C/ CD19-Pr eCP ) 及 共 刺 激分 子( CD80-P E/ CD86-FIT C/ CD19-P reCP ) 。 用流式细胞仪分别“设门”于 CD20、CD3、CD19 阳 性淋巴细胞, 分析 T 、B 淋巴细胞表面 CD69 的表达 及B 淋巴细胞表面M HC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80、CD86 的表达量。CD69、CD80、CD86 的表达以阳性细胞 百分比表示, MHC-Ⅰ、M HC-Ⅱ的表达量以几何平 均荧光强度表示。 1. 3 统计方法 文中数据以均数±标准差( x-±s) 表示。使用SP SS 软件方差分析, P < 0. 05 认为有显 著性差异。
amined by ga tting CD 19 positiv e cells by FA CS a nalysis. T he result s w ere compar ed w ith contr ol g r oup. T he ex pr ession of M HC-Ⅰ and M HC-Ⅱ o n B lymphocyt e w as descr ibed as the mean f luor escence intensity ( M FI ) , and the expr ession of CD80 and CD 86 on B ly mphocyte was descr ibed as the percents in all B ly mpho cyte. Results Ex pr ession o f surface molecules CD69, M HC-Ⅰ, M HC-Ⅱ, CD 80 and CD 86 o n B ly mpho cyte w as up-r egula ted obser v ably by CpG-O DN 2006 o r
CHEN Jun-haoa, W U Chaob , O U Y A N G Jianc, L IU Y ong a, GEN G Dong-jina ( a. Dep ar tment of L aboratory ; b. Dep art ment of I nf ect ious Diseases; c. Dep ar tment of H ematology , A f f i liat ed H osp ital of M edical College of N anj ing Univ ersity , J iangsu N anj ing 210008, China)
活化 的 B 淋巴细 胞能够 作为抗 原递 呈细胞 具有活化 B 淋巴细胞, 增强其抗原递呈相关分子和 ( AP C) 在体外能扩增具有 APC 抗原特异性的 T 淋 共刺激分子表达的作用。 巴细胞, 它能够识别 M HC-Ⅱ限制的抗原 肽[ 1] , 其 1 材料与方法 临床意义在于可用自体活化的 B 淋巴细胞作为高 1. 1 材 料 与 设 备 CpG-ODN2006、CpG-ODN 效AP C, 进行过继免疫治疗肿瘤患者体内微小残留 2216 委托上海生物工程技术服务有限公司合成, 病细胞及慢性乙肝患者残存体内的 HBV 病毒[ 2] 。 全硫代修饰。CpG -O D N 2006 序列为 5' -T CG T CG CpG 基 序 ( mot if ) 或 者 称 为 免 疫 刺 激 序 列 ( im - T T T T GT CGT T T T GT C GT T -3' 。 CpGmuno st imulato ry sequences, ISS) 可以活化免疫细 ODN2216 序 列为 5' -GGG GGA CGA T CG T CG 胞, 激发机体产生 T h1 型为主的免疫应答。目前的 GGG GG-3' 。RPM I1640 购自GIBCO; 胎牛血清购 研 究已 证明: CpG-ODN 能够 活化人类 B 淋巴细 自 HYCL ONE。以 10 g / dl FCS RPM I1640 溶 解 胞, 诱导多种细胞因子和细胞表面免疫相关分子的 CpG-ODN, 制成浓缩液, 浓度为 105 Lmol/ L 。PE表达。本文研究了CpG-ODN2006、CpG-ODN 2216 ant i-human HL A-A, B, C , F IT C-ant i-hum an 对健康人外周 B 淋巴细胞 CD69、M HC-Ⅰ、M HC- HLA -DR, DP, DQ, P E-ant i-human CD80, FIT CⅡ 及 CD80、CD86 表达的影响, 以阐 明 CpG-ODN ant i-human CD86 为 BD Pharmingen 公 司 产 品。
X 基金项目: 南京市社会发展项目 2005019-5; 南京市医学发展项目 ZK M 05043。 作者简介: 陈军浩( 1966- ) , 男, 副主任检验师, 从事造血干细胞移植免疫重建的实验研究。
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现代检验医学杂志 2006 年 7 月第 21 卷第 4 期 J M od Lab M ed, Jul y 2006, V ol. 21, N o. 4
现代检验医学杂志 2006 年 7 月第 21 卷第 4 期 J M od Lab M ed, Ju ly 2006, V ol . 21, N o. 4
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CpG 寡核苷酸对人外周血 B 淋巴细胞免疫刺激作用X
陈军浩a, 吴 超b , 欧阳建c, 刘 勇a, 耿东进a ( 南京大学医学院附属南京鼓楼医院 a. 医学检验中心; b. 感染科; c. 血液科, 江苏南京 210008)
2 结果 CD3 阳性T 淋巴细胞、CD20 阳性B 淋巴 细胞表面CD69 的表达, 分别反映了 T 、B 淋巴细胞 早 期 活 化 状 况。 实 验 结 果 表 明: CpG 刺 激 PBMHale Waihona Puke BaiduC48h, T 淋巴细 胞 CD69 表达无显著 性差别 ( P > 0. 05) , B 细胞表面 CD69 表达差异显著( P < 0. 05) , 以 CpG-ODN2216 活化 B 细胞的能力更强。 CpG-ODN2006 和 CpG-ODN2216 均能显著提高 B 淋巴细胞表面共刺激分子 CD80、CD86 的表达( P < 0. 05) , 仍以 CpG-ODN2216 的作用较强。CpGODN2006 和 CpG-ODN2216 均能提高 B 淋巴细胞 M HC-Ⅰ( P < 0. 05) 、M HC-Ⅱ( P < 0. 05) 的表达。 详细结果见表 1。
关键词: CpG-ODN; B 淋巴细胞; M HC-Ⅰ; MHC-Ⅱ; CD80; CD86 中图分类号: R392. 12 文献标识码: A 文章编号: 1671-7414( 2006) 04-001-03
The Immunostimulatory Effects of CpG Oligonucleotide on Human Peripheral Blood B Lymphocyte
by CpG -O DN 2216. T here was significa ntly differ ence betw een t he gr oup o f CpG -OD N and the g ro up of co ntr ol ( P < 0. 05) . Conclusion CpG -OD N t rigg er a str ong up-reg ulation of sur face mo lecules a sso ciated w ith ant ig en pro cessing on human B lymphocy te. A ll these surface mo lecules ar e majo r impo r tance fo r pr ofessional A PC function. Keywords: CpG -O DN ; B ly mpho cyte; M HC-Ⅰ; M HC-Ⅱ; CD80; CD 86
摘 要: 目的 观察 CpG -O DN 2006 和 CpG-ODN 2216 对健康 人外周血单个核细胞中 B 淋巴细胞抗原递呈相关 分子 M HCI、M HC-Ⅱ 及共 刺激 分子 CD80、CD86 表达 的影 响, 探讨 CpG -OD N 对 B 淋巴 细胞 抗原 递呈 功能 的作 用。方 法 CpG O DN 2006、CpG -O DN 2216 与健康人 P BM C 共培养 48 h, 用流式细胞技术以 CD 19-Pr eCP“设门”其中 B 淋巴细胞 , 检测其表 面 CD69、M HC-Ⅰ、M HC-Ⅱ、CD80 及 CD 86 的表达状况, 并与未加 CpG -OD N 组进行比较。B 淋巴细胞 M HC-I 、M HC-Ⅱ的 表 达量以 几何平 均荧光 强度表 示( M FI ) ; CD 80、CD 86 的表 达量以 阳性细胞 百分率 表示。结果 CpD -O DN 2006 和 CpG O DN 2216 均显著提高B 淋巴细 胞CD69、M HC-Ⅰ、M HC-Ⅱ、CD80 及CD 86 的表达, 与未加 CpG -O DN 组比较有显著性差异 ( P < 0. 05) 。CpG -O DN 2216 使B 淋巴细胞表面抗原递呈相关分子的增加量更为明显。结论 CpG -O DN 能够提高B 淋巴细 胞表面抗原递呈相关分子和共刺激分子 的表达, 能增强 B 淋巴细胞递呈抗原的能力。
CD69-PE、CD19-PreCP、CD20-FIT C、CD3-Pr eCP 为BD Biosciences 产品。F ACSCalibur 流式细胞仪 为美国 BD 公司产品。 1. 2 检测方法 取 9 例健康献血员外周血 5 ml, 以肝素抗凝。用淋巴细胞分离液( A XIS-SHEL DL ymphoPREP ) 分 离外周血单个 核细胞, 以 10 g/ dlF CS RPM I1640 洗涤细胞一次, 并调整细胞浓度 为2×106/ m l, 加入到24 孔培养板中, 1 ml / 孔。设对 照孔( 不加 CpG-ODN) , 其余分别加入 10 Ll CpGODN2006 或 CpG-ODN 2216 终 浓 度 均 为 1. 0 Lmol/ L , 37 ℃, 5% ( v / v) CO2 条件下培养 48 h。取 出 细胞以 10 g / dl F CS RPM I1640 洗涤一次, 三色 荧光法标记 T 、B 淋巴细 胞表面活化分子 ( CD69PE/ CD20-F IT C/ CD3-P reCP ) 、抗原递呈相关分子 ( MHC-I-PE/ M HC-Ⅱ-F IT C/ CD19-Pr eCP ) 及 共 刺 激分 子( CD80-P E/ CD86-FIT C/ CD19-P reCP ) 。 用流式细胞仪分别“设门”于 CD20、CD3、CD19 阳 性淋巴细胞, 分析 T 、B 淋巴细胞表面 CD69 的表达 及B 淋巴细胞表面M HC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80、CD86 的表达量。CD69、CD80、CD86 的表达以阳性细胞 百分比表示, MHC-Ⅰ、M HC-Ⅱ的表达量以几何平 均荧光强度表示。 1. 3 统计方法 文中数据以均数±标准差( x-±s) 表示。使用SP SS 软件方差分析, P < 0. 05 认为有显 著性差异。
amined by ga tting CD 19 positiv e cells by FA CS a nalysis. T he result s w ere compar ed w ith contr ol g r oup. T he ex pr ession of M HC-Ⅰ and M HC-Ⅱ o n B lymphocyt e w as descr ibed as the mean f luor escence intensity ( M FI ) , and the expr ession of CD80 and CD 86 on B ly mphocyte was descr ibed as the percents in all B ly mpho cyte. Results Ex pr ession o f surface molecules CD69, M HC-Ⅰ, M HC-Ⅱ, CD 80 and CD 86 o n B ly mpho cyte w as up-r egula ted obser v ably by CpG-O DN 2006 o r
CHEN Jun-haoa, W U Chaob , O U Y A N G Jianc, L IU Y ong a, GEN G Dong-jina ( a. Dep ar tment of L aboratory ; b. Dep art ment of I nf ect ious Diseases; c. Dep ar tment of H ematology , A f f i liat ed H osp ital of M edical College of N anj ing Univ ersity , J iangsu N anj ing 210008, China)
活化 的 B 淋巴细 胞能够 作为抗 原递 呈细胞 具有活化 B 淋巴细胞, 增强其抗原递呈相关分子和 ( AP C) 在体外能扩增具有 APC 抗原特异性的 T 淋 共刺激分子表达的作用。 巴细胞, 它能够识别 M HC-Ⅱ限制的抗原 肽[ 1] , 其 1 材料与方法 临床意义在于可用自体活化的 B 淋巴细胞作为高 1. 1 材 料 与 设 备 CpG-ODN2006、CpG-ODN 效AP C, 进行过继免疫治疗肿瘤患者体内微小残留 2216 委托上海生物工程技术服务有限公司合成, 病细胞及慢性乙肝患者残存体内的 HBV 病毒[ 2] 。 全硫代修饰。CpG -O D N 2006 序列为 5' -T CG T CG CpG 基 序 ( mot if ) 或 者 称 为 免 疫 刺 激 序 列 ( im - T T T T GT CGT T T T GT C GT T -3' 。 CpGmuno st imulato ry sequences, ISS) 可以活化免疫细 ODN2216 序 列为 5' -GGG GGA CGA T CG T CG 胞, 激发机体产生 T h1 型为主的免疫应答。目前的 GGG GG-3' 。RPM I1640 购自GIBCO; 胎牛血清购 研 究已 证明: CpG-ODN 能够 活化人类 B 淋巴细 自 HYCL ONE。以 10 g / dl FCS RPM I1640 溶 解 胞, 诱导多种细胞因子和细胞表面免疫相关分子的 CpG-ODN, 制成浓缩液, 浓度为 105 Lmol/ L 。PE表达。本文研究了CpG-ODN2006、CpG-ODN 2216 ant i-human HL A-A, B, C , F IT C-ant i-hum an 对健康人外周 B 淋巴细胞 CD69、M HC-Ⅰ、M HC- HLA -DR, DP, DQ, P E-ant i-human CD80, FIT CⅡ 及 CD80、CD86 表达的影响, 以阐 明 CpG-ODN ant i-human CD86 为 BD Pharmingen 公 司 产 品。
X 基金项目: 南京市社会发展项目 2005019-5; 南京市医学发展项目 ZK M 05043。 作者简介: 陈军浩( 1966- ) , 男, 副主任检验师, 从事造血干细胞移植免疫重建的实验研究。
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现代检验医学杂志 2006 年 7 月第 21 卷第 4 期 J M od Lab M ed, Jul y 2006, V ol. 21, N o. 4