临床血液学检验造血检验基本方法细胞化学染色检验[可修改版ppt]

缺铁
缺铁性贫血早期 缺铁性贫血
铁转运或利用异常 继发性贫血
铁负荷 铁粒幼细胞贫血 巨幼细胞贫血 再障
MDS 红白血病
图 贫血时铁染色常见的四种情形
（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP染色） 1. 染色原理及方法：Kaplow偶氮偶联法
成熟中性粒细胞 胞质中
α-磷酸萘酚钠＋H2O
碱性磷酸酶 pH9.6
图 NAP染色（慢粒血片）
图 NAP染色（类白血片）
（三）急性白血病形态学分型的细胞化学染色 『急性白血病细胞分型的常规细胞化学染色』
① 过氧化物酶（POX）染色/苏丹黑B（SBB）染色 ② 特异性酯酶（NAS-DCE）染色 ③ 非特异性酯酶（α-NAE/ α-NBE/ NAS-DAE / ANAE等）
3. 参考值：阳性率＜40％，阳性积分14～113。各实验室之 间可有较大差异，应建立各实验室的参考值
4. 临床应用 ① NAP染色主要用于骨髓增生性肿瘤（MPN）的诊断 与鉴别诊断。NAP是怀疑骨髓增生性肿瘤时应作的常 规细胞化学染色
慢粒NAP显著减低，甚至为0，其他MPN为正常 或增高
慢粒NAP显著减低，甚至为0，类白NAP显著增高 ② 鉴别其他疾病
• 铁粒红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的红细胞 • 环形铁粒幼红细胞：病幼理红情细况胞胞质中蓝色颗粒6颗
以上，围绕核周1/2以上者
细胞外铁（＋＋＋＋） 细胞外铁（＋＋＋）
细胞外铁（＋＋）
细胞外铁（＋＋＋）
细胞外铁（＋）
细胞外铁（－）
环形铁粒幼细胞、铁粒红细胞
铁粒幼细胞
铁粒幼细胞
幼红细胞
3. 参考值
非缺铁性贫 血
RA-RS RCMD-RS
常增高
溶贫、巨幼贫、再障等 正常或增 高
感染、肝硬化、慢性肾
炎、尿毒症等
增高
增高 环形铁粒幼细胞（ ≥15％ ） 增高 环形铁粒幼细胞≥15％
正常或增高
减低
细细 胞胞 外内 铁铁
细
胞 细内 胞铁 外
铁
细
细 胞
胞 外 铁
细 胞 内
内
铁
铁
细细 胞胞 外内 铁铁
隐性缺铁
1 2 3
骨髓片 作用液30min
作用液需要新鲜配制： 浓盐酸0.25ml＋1.25ml 20%亚铁 氰化钾溶液（两者比例为1∶5） 2
流水冲洗5min， 待干
1％藏红花染1min， 水洗待干
4
2. 正常血细胞的染色结果 ① 细胞外铁：位于骨髓小粒内或巨噬细胞胞质内（即幼 红细胞外） ② 细胞内铁：位于幼红细胞胞质内的铁 • 铁粒幼红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细 胞。计数100个中幼红和晚幼红细胞中铁粒幼红细 胞的百分比即为细胞内铁阳性率
MDS（RAEB） 骨髓中原始细胞5～20％
4. 如何鉴别原粒、原淋及原单？
细胞化学染色 （一组）
1. 取材：新鲜骨髓片或血片 2. 制片 3. 染色：固定、有色沉淀反应（显色）、复染 4. 显微镜检查：观察染色是否成功，观察目标细胞的染色结果 5. 填写报告单：定性（阳性/阴性）、半定量（阳性率/阳性积分/阳
性程度） 6. 登记及存档
干燥固定
固
蒸汽固定
物理法
化学法
火焰固定
定
液体固定
显色
金属 沉淀 法
雪夫 反应
偶氮 偶联 法
普鲁 士蓝 反应
联苯 胺法
复染
复染的目的在于使各种细胞能显示出来以便 于观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜 色有明显的对比度，即能使细胞结构显示又能 清楚地看出细胞化学染色结果
（一）用于贫血的细胞化学染色（铁染色）
『用于贫血的常规细胞化学染色』 外周血网织红细胞计数（Ret/Retic/RC） 骨髓铁染色
① 骨髓细胞外铁：（+）~（++），约2/3人为（++）， 1/3人为（+）
② 骨髓细胞内铁：铁粒幼红细胞的阳性率为19%~44%， 以I型为主，少数为II型
4. 临床应用：用于贫血的诊断及鉴别诊断
贫血
细胞外铁
细胞内铁
缺铁性贫血
阴性
明显减低或为0
铁粒幼细胞性贫血
明显增多
骨髓增生异 常综合征 （MDS）
临床血液学检验造血检验基本方法细胞化 学染色检验
1
【细胞化学染色概述】 一． 细胞化学染色的wenku.baidu.com念
细胞形态学
细胞化学染色
酶类、脂类、糖类、 铁、蛋白、核酸等
化学 （化学反应）
二． 细胞化学染色的临床应用
1. 帮助识别细胞 2. 了解细胞的生理状态及功能 3. 辅助诊断及鉴别诊断血液系统疾病
三． 细胞化学染色的基本步骤
【复习：外周血网织红细胞计数（Ret/Retic/RC）】
『问题』 ① 在瑞氏染色下，能不表否能现较，为准未嗜完多确全色地成红区熟细的胞别红成细熟胞在红瑞细氏胞染色与下未完 全成熟的红细胞（网织红细胞）
② 网织红细胞手计工活数体有染哪色法两和种仪方器法法？在手工操作法中，我 们染色及观察的是哪种化学物质 RNA
α-萘酚＋磷酸钠
＋ 坚牢蓝RR
不溶性棕黑色沉淀
1 2 3
新鲜血片
固定液30s， 水洗待干
作用液5～15min， 水洗，待干
作用液需要新鲜配制： α-磷酸萘酚钠溶液1.5ml，在37℃ 预热5min＋坚牢蓝RR1.5mg 3
1％藏红花3min， 水洗，待干
4
2. 正常血细胞的染色结果
① 阳性反应呈棕黑色颗粒，定位于成熟中性粒细胞胞质 内。其他细胞呈阴性
染色 ④ 过碘酸-雪夫（PAS）染色 ⑤ 酸性磷酸酶（ACP）染色
『问题』 1. 在各系各阶段血细胞中，最难鉴别的细胞是什么细胞
原始细胞
2. 正常和一般疾病病人的骨髓片中可以看到原始细胞吗
原粒细胞＜2％，原红＜1％，其他原始细胞罕见
3. 在什么情况下，骨髓片中能看见大量的原始细胞
急性白血病 骨髓中原始细胞≥20％
③ 网织红细胞计数的参考值是多少？有什么临床意义
0.5％～1.5％
反映骨髓中红系的造血情况，用于贫血 的诊断、鉴别诊断及疗效观察
【骨髓铁染色】 1. 染色原理及方法
贮存铁 铁蛋白 含铁血黄素
酸性
4Fe3+＋3K4［Fe(CN)6］
Fe4［Fe(CN)6］3＋12K+
亚铁氰化钾
亚铁氰化铁 （普鲁士蓝色）
② 油镜下计数100个成熟中性粒细胞，记录其阳性程度 （－）、（＋）、（2＋）、（3＋）、（4＋），分 别记为0、1、2、3、4分。计算阳性细胞总数为阳性 率，阳性细胞的分数总和为阳性积分
NAP（＋＋＋＋） NAP（＋＋＋）
NAP（＋＋）
NAP（＋＋）
NAP（＋）
NAP（＋）
NAP（－） 嗜酸性粒细胞（－）