第八章 染 色讲解

㈢ 脱甲醛色素 甲醛固定组织时间较长及温度较高情 况下，甲醛易氧化自行分解产生甲酸，导致组织成酸 性，此时可能有甲醛色素产生。此种色素无光泽，不 溶于水，乙醇，二甲苯等。对于这种色素可用下列方 法除去。 1 浓氨水1 ml，75%乙醇200 ml。切片脱蜡后置溶液 中30 ’或较久→流水洗→染色。 2 1%氢氧化钾1 ml，80%乙醇100 ml。切片脱蜡后置 溶液中10 ’ →流水洗5 ’ →80%乙醇5 ’ →蒸馏水洗→ 染色。
三、染色术语的概念
（1）普通染色 在组织制片技术中，常规 制片最广泛应用的是苏木精和伊红染色，又 称为常规染色（HE染色）。 （2）特殊染色 特殊染色就是为了显示特定 的组织结构或其他的特殊成分，是常规染色 的必要补充，也是染色技术中不可缺少的部 分。它在病理诊断中起到辅助作用。
（3）单一染色 选用一种染料进行的染 色，如用铁苏木素染睾丸生精细胞等。 （4）复染色 用两种不同性质的染料进 行染色的方法，如用苏木素和伊红分别 使细胞核及胞质染成两种颜色。 （5）多种染色 选用两种以上的染料的 染色，如Masson三色染色法。
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⑶ 在染色过程中，即要按照书本的方法去进行操 作，又要根据实际情况进行灵活运用。在实践中 ，不断地总结经验和教训，才能熟练掌握染色方 法和提高实际工作能力。 ⑷ 由于染色方法较多，掌握染色种类应多一些， 对不同的组织选用针对性较强的方法进行染色， 才能提高染色质量。
六、染色中的基本原则
一、染色前的处理 ㈠ 脱蜡至水 凡是石蜡切片必须经过二甲苯脱
第八章 染 色
一、染色的目的
任何冰冻切片、石蜡切片等如果不经过 染色，在显微镜下只能看到细胞及其它组 织成分的轮廓，即使由于组织内部各种物 质的折射指数不同，从光线的明暗上能观 察到一些组织结构，但也是极其简单有限 的。远不能满足观察和借以诊断的目的。
染色的目的：将染料配制成溶液，将组织 切片浸入染色剂内，经过一定的时间，使 组织或细胞及其他异常的成分被染上不同 深浅的颜色，产生不同的折射率，便于在 光学显微镜下进行观察。因此，染色在组 织形态学，特别是病理形态诊断、科研和 教学工作中，都具有非常重要的意义和实 用价值。
㈡染色的物理作用
1. 毛细作用及渗透作用 组织有许多 小孔，染料由渗透作用进入组织，它与 组织没有牢固的结合，所以是单纯的物 理作用，不能称为直接染色作用。染色 必需是染料留贮于组织内与组织有较稳 固的结合。
2. 吸收或溶液作用 组织吸收染料，作牢固的 结合，组织的着色与溶液颜色相同，但不是和干 燥染料的颜色相同。如复红溶液为红色，所染组 织也为红色，而干燥的复红带绿色。 3. 吸附作用 吸附作用是固体物理的特性，它能 从周围溶液中吸住一些细小的物质微粒，这些微 粒可能是溶于溶液中的化合物，也可能是只在溶 液中单独存在的离子，如染液中分散的色素粒子 进入被染物质的间隙内，由于分子的引力作用， 色素粒子被吸附而染色。
蜡，各级乙醇至水洗的过程。（切片脱蜡、二甲 苯Ⅰ、Ⅱ各5—10’→95%乙醇ⅠⅡ各5’→75%乙 醇5’→自来洗水冲）二甲苯和各级乙醇必须保持 一定纯度，不能混入其他杂质成分，而使染色受 到影响。
㈡ 除去汞盐沉淀物 对于用升汞固定 或含有升汞混合固定液的切片，切片脱 腊后需脱汞（浸入5%碘酒精10’），脱 碘（5%硫代硫酸钠）→流水洗→染色
二、染色的原理
染色就是染色剂和组织细胞相结
合的过程。有关两者结合的原理，学
说不同，尚未完全清楚，而只一般基
本认为过程是化学反应和物理现象。
㈠染色的化学反应
在组织细胞内，一般有酸性和碱性区别，酸性物质部
分能与溶液中的阳离子结合，碱性物质部分能与溶液中的 阴离子结合。在细胞核中，特别是核内染色质，一般有酸 性物质组成（其中主要有核酸），故与碱性染料的亲和力 很强，易于染色，以氧化苏木素为代表的碱性染料中有染 色作用的是阳离子。在细胞浆中则由碱性物质组成，所以 胞浆与酸性染料有较强的亲和力，以伊红染料为代表的酸 性染料中有染色作用的是阴离子。
五、染色中的注意事项
⑴ 较多的组织切片染色，是经过固定、脱水、 透明、包埋、切片、脱蜡等步骤以后，再进行染 色；有的是直接冰冻切片后即可染色，这些都是 根据不同的目的要求而进行的染色。
⑵ 染色准备工作和染色实验室的设置，都是做好染色工 作的必要条件。各种器皿的清洗要严格，按染色方法中 的细节去做。染色试剂的配制时间长短和存放，一定要 按化学性质与组织的着色能力进行正确掌握使用。实验 室常规设置要合理，有条件时，可应有通风设备。实验 台和实验柜，各种器皿和染色所需物品必须齐全，具有 一定的条理性，是开展染色工作和提高质量的必要条件 。
四、染色与分化剂
在退行性染色中，需用某些特定的溶液 把附着在组织细胞上多余的染色剂脱去，从 而使目的物与周围组织形成鲜明的对比，同 时使目的物本身的色泽也深浅适当。这种选 择地除去多余染色剂的过程，称为分化。 所使用的溶液即为分化剂。分化剂分为三类
⑴ 酸性分化剂 如盐酸、醋酸等，它们能和媒 染剂（金属）相结合形成可溶性盐类，从而打开 了媒染剂和组织细胞的结合，使组织细胞脱色。 ⑵ 氧化分化剂 如苦味酸，铬酸，重铬酸钾和过 锰酸钾等，属于氧化剂。在染色中经过氧化作用 后，使染色剂与组织的某种成分的结合更牢固。 ⑶ 媒染分化剂 媒染剂能促使组织细胞和染色剂 相结合。但是将已经过染色的切片再放到媒染剂 的溶液中，又可使已经和组织相结合的染色剂脱 失，这就是媒染剂的另一种功能，称之为媒染分 化剂。
（6）进行性、退行性染色 进行性染色又称渐进性染 色，将组织成分着色自浅至深，当达到所需要的强度 时，终止染色。此种方法称为进行性染色。一般所采 用的染液溶度较低，染色过程中应该不时在镜下观察 进行控制，这样才能得到染色强度适中的效果。 退行性染色又称退性染色，先将组织浓染过度， 使其超过所需的程度，然后再用某些溶液脱去多余的 染色剂，以达到适当的深度，并使不应着色的组织、 细胞的某些成分脱去色度，这个步骤称为“分化”。 而最终使应该着色部分达到适宜程度。如常规HE染 色中的苏木素染核与盐酸水分化过程就是退行性染色 。