PCR检测转基因小鼠样品处理

PCR鉴定转基因小鼠

一、试剂与仪器：

（1）试剂：

1、制备DNA样品：

Reagents A：500mM EDTA（pH 8.0） 0.02mL in 50mL Milli-Q H2O

100mM NaOH 12.5mL in 50mL Milli-Q H2O

Reagents B：1M Tris-HCl (pH 8.8) 2mL in 50mL Milli-Q H2O

Note:

1．500mM EDTA（pH 8.0）: 称取18.61 g EDTA-Na2溶于80mL Milli-Q H2O中，用NaOH 粉末调节pH 至8.0，将溶液定容至100 mL（量筒即可），灭菌后4℃保存。

2．1M Tris-HCl (pH 8.8): 称取12.11 g Tris于烧杯中，加入80 mL Milli-Q H2O，加入约4.2 mL 浓盐酸调pH至8.0，将溶液定容至100 mL（量筒即可），灭菌后4℃保存。

3．100mM NaOH: 80mL Milli-Q H2O中加入0.4g NaOH，再稀释至100mL。

二、方法

1 取样

1.1准备数管装有100µL Reagents A的 0.5mL离心管、一个装有半杯水的140mL烧杯、卷筒纸和眼科剪刀。

1.2剪取老鼠组织（尾巴3mm左右，耳朵米粒大小，手指或脚趾一根），放入装有Reagents A的小管中，溶液没过组织。每一次取样后需将剪刀刀口在烧杯中震荡几次清洗，然后用干净的卷筒纸擦干表面。（老鼠出生后即可取样鉴定，这时取四肢组织要适量，取样过多老鼠容易致残；三周以上的老鼠有攻击性，取样时须戴帆布手套固定老鼠；老鼠出生一周后，其耳朵长出，手指脚趾已经分开，而且不咬人，这时取样相对合适）

1.3将装有样品的小管插在浮板上，放入97℃水浴中保温1h（水浴温度不宜为100℃，否则水沸腾产生的气泡容易撞开管盖；在煮样品前注意检查样品是否被溶液没过）。

1.4震荡，将煮过的组织分散开。加入100µL Reagents B