HIV感染的实验室检测解读

抗体检测的目的
• 输血和移植安全（为了接受者的安全） • 监测(为了知晓人群流行状况) • 临床HIV疾病的诊断 (为了知晓个体感染状况）
•
为了达到以上的某个目的的HIV 检测可能不适 合其他目的，比如输血服务的检测不适合临床诊 断HIV感染
HIV抗体检测
• HIV 抗 体 检 测 分 为 筛 查 试 验 （ 包 括 初 筛 和 复 检）和确认试验（WB)。
酶联免疫吸附试验
Enzyme linked immunosorbent assay
• ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及 抗体或抗原的酶标记。结合在固相载体表 面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶 标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性， 又保留酶的活性 。在测定时，受检标本 （测定其中的抗体或抗原）与固相载体表 面的抗原或抗体起反应。
HIV抗体检测原理和方法
石嘴山市疾控中心
艾滋病初筛中心实验室
HIV感染的实验室检测
– 常用HIV病原学检测方法:
– – –
–
病毒分离 抗原检测 核酸检测（ cDNA测定-PCR、 RNA测定-病毒载量）
其他方法：逆转录酶测定、原位杂交
– 常用HIV抗体检测方法:
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– – –
ELISA 快速HIV检测 免疫印记法 （ Western Blot） 其他方法：免疫荧光法（IFA）、放射免疫沉淀实验
• （一）检测试剂
• 筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局 注册批准、批检合格、临床评估质量优良、在 有效期内的试剂。目前常用的筛查试剂有酶联 免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。采供血 机构进行血液筛查应采用 HIV-1/2 混合型酶联 免疫试剂。自采自供血的单位必须进行 HIV 抗 体检测。
Байду номын сангаас
（二）筛查方法
ELISA的类型
• • • • 双抗原夹心法测抗体 双抗体夹心法测抗原 间接法测抗体 竞争法、捕获包被法等
双抗原夹心法测抗体
– 将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。 – 加受检标本，保温反应。标本中的抗体与固相 抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除 去其他未结合物质。 – 加酶标抗原，保温反应。固相免疫复合物上的 抗体与酶标抗原结合，彻底洗涤未结合的酶标 抗原。 – 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产 物。通过比色，测知标本中抗体的量。
ELISA
酶联免疫吸附试验 + ve
HIV 检测的介绍
包被了HIV 抗原的检测 板
患者的抗体
酶
显色剂
- ve
Introduction to HIV Testing 阳性
ELISA 板
? 结果
阴性
质控
Module 1 Sub Module 3 – PPT02
2、快速检测（RT）及其它检测
• 随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展， 及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测（VCT）的迫 切需求，简便、快速的HIV检测方法被广泛应用。常用 的主要有以下几种： • （1）明胶颗粒凝集试验（PA）：PA是HIV血清抗体检 测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载 体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。 当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与 抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集 情况判读结果。PA试剂有两种，HIV-1和HIV-2抗原共 同致敏的PA试剂（AFD HIV-1/2 PA），已经我国食品 药品监督管理局（SFDA）注册批准；HIV-1、HIV-2抗 原分别致敏的PA试剂（SERODIA-HIV-1/2）可初步区分 HIV-1型和HIV-2型，目前我国尚未引进。
ELISA的原理
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原 抗体复合物与液体中的其他物质分开。 再加入酶标记的抗原或抗体，也通过 反应而结合在固相载体上。此时固相 上的酶量与标本中受检物质的量呈一 定的比例。
ELISA的原理
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有 色产物，产物的量与标本中受检物质的量 直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性 或定量分析。由于酶的催化效率很高，间 接地放大了免疫反应的结果，使测定方法 达到很高的敏感度。
抗原检测的目的
（一）检测早期感染，缩短窗 口期 （可提前1-2周）
HIV-P24抗原阳性仅作为HIV 感染窗口期的辅助诊断依据， 不能据此确诊
（二）新生儿的感染
• 婴幼儿HIV抗体阳性不能用于诊断感染HIV • 婴幼儿体内从母亲得到的HIV抗体持续存在 时间最长不超过18个月。 • 在18月龄以前可以用多种不同的非抗体依 赖性的检验方法对新生儿HIV感染进行辅助 诊断，包括：HIV P24抗原检测、病毒分离 培养、RNA或DNA测定。 • 18月龄以前婴幼儿感染HIV诊断要结合临 床表现和实验室综合诊断。
• 1. 常用的筛查方法是酶联免疫试验（ELISA） 目前国内外主要使用第三代（双抗原夹心法） 试剂，少数使用第二代试剂。血源筛查仍以第 三代ELISA为主，国际上有些国家和地区已将 线性免疫酶测定（第四代ELISA试剂）用于血 源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的 HIV抗原抗体联合测定试剂，可同时检测P24抗 原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂 相比，检出时间提前了4-9.1d。其优点在于能 同时检测抗原抗体，降低血源筛查的残余危险 度。
• 金标纸条采用双抗原夹心法免疫测定原理，选择 经纯化的基因工程制备的gp36、gp41、p24抗原作 为包被抗原和gp41、gp36基因工程抗原和p24合成 肽作为胶体金结合抗原。当待检标本中含有HIV抗 体时，先和金标记抗原结合，由于层析作用反应 复合物沿硝酸纤维膜向前移动，当遇到包被抗原 时，形成Ag-Ab-Ag-Au复合物而富集在包被线上， 形成红色沉淀线。同时在包被膜上还有一条质控 线对照，故当有两条红线时判为阳性，只有一条 红线时，判为阴性。
PA原理示意图
（PA）检测结果的判定
（2）斑点EIA或称斑点ELISA（dot-EIA）：
• 以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状， 即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时 间在10 min以内，使用抗原量少。
（3）斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速 试验