5-羟甲基糠醛(5-HMF)的检测方法

羟甲基糠醛的检测方法

（IFU）

1 适用范围

本标准适用于果汁加工中半成品、成品的羟甲基糠醛的测定。

2 仪器及试剂

2.1仪器

2.1.1 722S分光光度计：检测波长550nm；

2.1.2 比色管：10ml带有塞子的比色管。

2.2试剂

2.2.1 巴比妥酸溶液：500mg巴比妥酸在温水浴中溶解，冷却后在容量瓶中定容至100ml。最好在冰箱中保存，保存期为一个月。

2.2.2 对甲苯胺溶液：10.0g的对甲苯胺用10.0ml的冰醋酸溶解，转移至100ml 装有50ml异丙醇的容量瓶中，最后用异丙醇定容至刻度。最好在冰箱中用棕色瓶保存，保存期为一个月。

3. 检测步骤

3.1浓缩苹果清汁稀释至11.5°Brix，两根25ml比色管中各移取2ml，用新制备的蒸馏水定容至10ml并充分的混合。在定容后的溶液中加入5ml对甲苯胺，摇匀。其中一根加入1.0ml的水（空白），另一根试管中加入1.0ml的巴比妥酸溶液，摇匀。

3.2 以空白作为对照，用分光光度计在550nm下用1cm比色皿检测并读取吸光度值。巴比妥酸添加以后，吸光度通常很快的下降，反应在3-4分钟达到最大值，用最大值计算。

3.3 实验的准备

空白检测

果汁（11.5°Brix） 2.0ml 2.0ml

对甲苯胺 5.0ml 5.0ml

巴比妥酸 - 1.0ml

水 1.0ml -

4.计算

HMF= （ P*V）/（ v*E）

P标准曲线上读取的HMFmg/L

V原被稀释溶液的体积

v被用于显色反应检测的稀释部分的体积

E原始果汁的体积

参考文献：本标准依据IFU检测HMF的方法编制

棒曲霉素、羟甲基糠醛含量的检测方法

(液相色谱法)

1. 适用范围

本标准适用于果汁加工中半成品、成品的棒曲霉素、羟甲基糠醛的测定。

2. 仪器及试剂

除另有规定外,试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。所用流动相需用0.45μm 水系滤膜过滤。

2.1试剂

2.1.1冰醋酸（分析纯）；

2.1.2乙酸乙酯（分析纯）;

2.1.3乙腈：色谱纯一级品含量>99.9%；

2.1.4棒曲霉素标准品：纯度>99%；

2.1.5醋酸溶液：c（CH3COOH）= 0.2mol/L；

2.1.6醋酸钠溶液：c（CH3COONa）= 0.2mol/L；

2.1.7醋酸盐缓冲溶液（pH=4.00）：醋酸水溶液:醋酸钠水溶液=164:36（v/v）；

2.1.8无水碳酸钠溶液：c（Na

2CO

3

）=14g/L ；

2.1.9流动相: 乙腈：水=10：90（v/v）；

2.2仪器

2.2.1高效液相色谱仪：型号LC2010A、配有紫外检测器；

2.2.2色谱柱：250mm×4.6mm（id）ODS反相不锈钢柱；

2.2.3旋转蒸发器：型号RE52－A

2.2.4 分析检测条件：

流动相：乙腈：水=10：90（v/v）；

流速： 1.0ml/min；

柱温：35℃；

检测波长： 276nm；

进样体积： 10μl；保留时间：羟甲基糠醛5.7min；棒曲霉素7.2min。上述操作参数是典型的，可根据仪器情况对给定的参数作适当的调整，以期获得最佳效果。

3. 检验步骤

3.1试样溶液的制备

称取试样（4.80―5.20）g，精确至0.01g，置于125ml的心形瓶中，用约25ml蒸溜水稀释,然后加入30ml乙酸乙酯振荡5min，静置分层。将水层放入另一个心形瓶中，用30ml乙酸乙酯重复萃取两次,弃去水层，合并三次乙酸乙酯萃取液于另一心形瓶中，再加入10ml碳酸钠水溶液(2.1.8)立即振荡，静置分层(此净化操作应在2min内完成)。再用20ml乙酸乙酯提取碳酸钠水层一次。弃去碳酸钠水层，合并乙酸乙酯提取液，并加入9滴冰醋酸(2.1.1) ，全部转移至旋转蒸发器内,于（40―45）℃下，蒸至剩余溶液约为（1―2）ml时，卸下心形瓶，在40℃下用氮气吹干，用1ml醋酸盐缓冲溶液(2.1.7)溶解残留物，用带有0.45μm水系滤膜的针头式过滤器滤入样品瓶，作为试样溶液。如果试样溶液不能及时测试时，应先存放在冰箱中冷藏，但不得超过48小时。

3.2 测定

在上述色谱操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标准溶液，计算各针响应值，待相邻两针的相对响应值变化小于3%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

3.3空白试验

除不加样品外,按上述测定步骤进行平行操作。

1.数据分析

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中的棒曲霉素的峰面积之比进行平均。按式（1）计算样品中棒曲霉素含量：

(1)

A—样品中棒曲霉素峰面积平均值；

A

S

—标准工作液中棒曲霉素峰面积平均值；

C—标准工作液中棒曲霉素的浓度, mg/L;

V—样液最终定容体积,

m—所用样品重量,g

注：计算结果应扣除空白值。

以上结果为浓汁棒曲霉素含量,结果报告形式为μg/Kg(11.50Brix),可通过下面公式进行换算

X------浓汁中棒曲霉素含量，mg/ Kg；X1-------清汁中棒曲霉素含量，μg/Kg；

B-------样品的糖度

(0Brix)

此方法的检测下限为10ppb。

参考文献: SN 0589-1996

附件

1、标样溶液的配制：

标准储备液（大约10mg/L）：准确称量10mg的棒曲霉素标样于100ml的容量瓶中，用醋酸盐缓冲液溶解，然后用醋酸盐缓冲液定容。用醋酸盐缓冲液将25ml 棒曲霉素储备液稀释至250毫升。当新配置储备液和每次使用时（配好的储备液