实验三、多糖含量的测定

实验三多糖含量的测定

1、分光光度法测多糖的原理和方法

2、用Office excel作标准曲线

二、仪器与试剂

1、仪器：7200分光光度计、水浴锅、电子天平

2、试剂：1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓H2SO4、dH2O

3、器皿：50ml容量瓶、10ml量筒、玻璃棒、洗耳球、烧杯、试管、试管架

三、步骤

1、标准曲线的绘制

①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶，加入dH2O溶解并小心稀释至刻度，再取5ml于50ml 容量瓶中，加dH2O稀释，即1.0mg/ml；

②分别量取0.25ml，0.5ml，1.0ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml分别置于已编号的50ml容量瓶中，加dH2O定容；

③分别吸取上述溶液各2.0ml，再加入5%苯酚1ml，摇匀后迅速加入5ml浓H2SO4，摇匀后，室温放置5min，然后置于90o C水浴15min，冷却至室温；

空白对照：同样取2ml dH2O +1ml 5%苯酚+ 5ml浓H2SO4，摇匀后，室温放置5min，然后置于90o C水浴15min，冷却至室温；

吸光度A 得，浓度C与吸光度的线性方程y=ax+b

2、准确量取多糖溶液（待测）2.0ml于50ml容量瓶中，加dH2O定容，方法同上述③。

四、实验结果

①实验主要步骤（记录）

②用Excel作图，并选择性粘帖至Word到PDF

③计算浓度（待测液）

五、实验注意

1、高毒——苯酚（强腐蚀）！

2、高腐蚀——浓硫酸！

一实验步骤

标准曲线的绘制

①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶，加入dH2O溶解并小心稀释至刻度，再取5ml于

50ml容量瓶中，加dH2O稀释，即1.0mg/ml；待测溶液也用同法，空白对照组同法

②分别量取0.25ml，0.5ml，1.0ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml分别置于已编号的50ml容量瓶

中，定容；取待测2.0ml于50ml容量瓶中，定容，空白对照组用2ml蒸馏水。

（图为定容好以后的，0.25ml，0.5ml，1.0ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml葡萄糖溶液）

③分别吸取上述溶液各2.0ml，再加入5%苯酚1ml，摇匀后迅速加入5ml浓H2SO4，摇匀

后，室温放置5min，然后置于90o C水浴15min，冷却至室温；

（加入苯酚，试管颜色仍为透明无色，

加入浓硫酸以后，试管变热，反应激烈，立马有细小气泡产生，且颜色变黄，葡萄糖溶液浓度越高，黄色越深）

（全部试管滴加完浓硫酸以后的试管颜色按浓度由高到低摆放，最左边的是待测溶液，颜色为浅黄色）

5测量吸光度A

二实验数据的记录与作图

X轴为浓度Y轴为吸光度

三计算浓度

待测溶液的吸光度为0.013 由此推算出待测液浓度为0.004925