生物化学:第十章 生化分离技术与应用-习题

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第十章生化分离技术和应用
一、选择题
⒈下列哪种方法可用于测定蛋白质的分子量()
A、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法;
B、280/260nm紫外吸收比值;
C、凯氏定氮法;
D、荧光分光
光度法;E、Folin酚试剂法
⒉氨基酸和蛋白质共有的理化性质为()
A、胶体性质;
B、两性性质;
C、沉淀性质;
D、变性性质;
E、双缩脲性质
⒊蛋白质溶液的稳定因素为()
A、蛋白质溶液为真溶液;
B、蛋白质在溶液中做布朗运动;
C、蛋白质分子表面带有水化膜和
同性电荷;D、蛋白质溶液的黏度大;E、以上都不对
⒋关于蛋白质在等电点时的特性描述,哪项是错误的?()
A、导电性最小;
B、溶解度最小;
C、黏度减小;
D、电泳迁移率最小;
E、以上都不对
⒌今有①、②、③、④、四种蛋白质的混合液,等电点分别为:5.0、8.6、6.8和9.2 ,在pH8.6的
条件下进行电泳分离,四种蛋白质电泳区带自正极的排列顺序为:()
A、①、③、②、④;
B、①、②、③、④;
C、④、②、③、①;
D、③、②、①、④;
E、②、
④、③、①;
⒍盐析沉淀蛋白质的原理为()
A、中和电荷,破坏水化膜;
B、与蛋白质结合成不溶性盐;
C、次级键断裂,蛋白质构象改变;
D、调节蛋白质溶液的等电点;
E、以上都不是
⒎关于下列多肽Glu-His-Arg-Val-Lys-Asp的叙述,哪个是错的?()
A、在pH12时,在电场中向阳极移动;
B、在pH3时,在电场中向阴极移动;
C、在pH5时,
在电场中向阴极移动;D、在pH11时,在电场中向阴极移动;E、该肽的等电点大约在pH8
⒏用下列方法测定蛋白质含量,哪一种方法需要完整的肽键()
A、双缩脲反应;
B、凯氏定氮;
C、紫外吸收;
D、茚三酮;
E、奈氏试剂
⒐蛋白质用硫酸铵沉淀后,可选用透析法除去硫酸铵,要确定硫酸铵是否从透析袋中除净,你选用
下列哪一种试剂检查()
A、茚三酮试剂;
B、奈氏试剂;
C、双缩脲试剂;
D、Folin-酚试剂;
E、斐林试剂
⒑将抗体固定在层析柱的载体上,使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来,这种技术属于()
A、吸附层析;
B、离子交换层析;
C、分配层析;
D、亲和层析;
E、凝胶过滤
⒒若用电泳分离Gly-Lys、Asp-Val和Ala-His三种二肽,在下列哪个pH值条件下电泳最合适()
A、pH2以下;
B、pH2-4;
C、pH7-9;
D、pH10-12;
E、pH12以上;
⒓进行疏水层析时,以下哪种条件比较合适?()
A、在有机溶剂存在时上柱,低盐溶液洗脱;
B、在有机溶剂存在时上柱,高盐溶液洗脱;
C、
在低盐条件下上柱,高盐溶液洗脱;D、在高盐条件下上柱,按低盐、水和有剂溶剂顺序洗脱;
E、低盐缓冲液上柱,低盐洗脱
⒔对一个富含His残基的蛋白质,在使用离子交换层析时应优先考虑()
A、严格控制蛋白质上样液的浓度;
B、严格控制盐浓度;
C、严格控制NaCl的浓度;
D、严格
控制洗脱液的pH值;E、严格控制洗脱液的体积
⒕定性鉴定20种氨基酸的双向纸层析是()
A、交换层析;
B、亲合层析;
C、分配层析;
D、薄层层析
二、判断是非
⒈用凝胶过滤法分离蛋白质时,总是分子质量大的蛋白质首先被洗脱下来。

⒉盐析法可使蛋白质沉淀,但不引起变性,所以盐析法常用于蛋白质的分离和纯化。

⒊测定别构酶的相对分子质量可以用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺(SDS)-聚丙烯酰胺凝
胶电泳。

⒋等电点不是蛋白质的特征参数。

⒌蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺电泳和圆盘电泳是两种完全不同的技术。

⒍逆流分溶和纸层析这两个分离氨基酸的方法是基于同一原理。

⒎某蛋白质在pH6时向阳极移动,则其等电点小于6。

⒏蛋白质带电荷为0的pH值为蛋白质的等电点。

三、填空题
⒈蛋白质是稳定的亲水胶体,其稳定因素是和。

⒉有一种蛋白质,说明此蛋白质含有个
电泳均显示一条带,说明蛋
⒊这是因为蛋白质分子中的、和三
⒋当蛋白质溶液中盐离子低时,可增加蛋白质的溶解度,这种现象称;当溶液中盐离子强
⒌DEAE-
⒍pH值和
离子强度的缓冲液,才能将此蛋白质洗脱下来。

⒎测定蛋白质浓度的方法主要有、、和。

⒏利用蛋白质不能通过半透膜的特性,使它和其它小分子物质分开的方法有和。

⒐利用分配层析的原理进行氨基酸分析,常用的方法有、、和。

⒑实验室常用的测定蛋白质相对分子量的方法有、和等。

四、名词解释
⒈蛋白质等电点;⒉凝胶过滤;⒊分配层析;⒋离子交换层析;⒌疏水层析;⒍亲和层析;
⒎聚丙烯酰胺凝胶电泳;⒏双向电泳;⒐蛋白质组
五、问答题
⒈根据给定的条件,回答问题:
⑴一个Ala、Ser、Phe、Leu、Arg、Asp和His的混合液在pH3.9时进行纸电泳,指出哪种氨基酸
向阳极移动?哪种氨基酸向阴极移动?
⑵带相同电荷的氨基酸如Gly和Leu在纸电泳时常常稍能分开,解释其原因?
⑶假如有一个Ala、Val、Glu、Lys和Thr的混合液,在pH6.0进行电泳,然后用茚三酮显色,画出
电泳后氨基酸的分布图。

⒉以正丁醇:乙酸:水体系为溶剂(pH4.5),对下列氨基酸进行纸层析分离,指出下列各组中氨基
酸的相对移动速度:⑴Ile、Lys;⑵Phe、Ser;⑶Ala、Val、Leu;⑷Pro、Val;⑸Glu、Asp;
⑹Tyr、Ala、Ser、His
⒊用阳离子交换树脂分离下列氨基酸对,用pH7.0的缓冲液洗脱时哪种氨基酸先被洗脱下来?
⑴Asp和Lys;⑵Arg和Met;⑶Glu和Val;⑷Gly和Leu;⑸Ser和Ala
⒋分析下列肽段在pH1.9、pH3.0、pH6.5、pH10.0条件下进行纸电泳时的移动方向。

⑴①Lys-Gly-Ala-Gly;②Lys-Gly-Ala-Glu;③His-Gly-Ala-Glu;④Glu-Gly-Ala-Glu;⑤Gln-Gly-Ala-Lys;
⑵上述五肽混合物,在Dowex-1(一种阴离子交换树脂)的离子交换柱上以pH值从10到1.0连续
变化的缓冲系统作洗脱,试分析每种肽洗脱的相对次序。

⒌扼要解释为什么大多数球状蛋白质在溶液中具有下列性质。

⑴在低pH时沉淀;⑵当离子强度从0逐渐增加时,其溶解度开始增加,然后下降,最后出现沉
淀;⑶在一定的离子强度下,达到等电点pH值时,表现为最小的溶解度;⑷加热时沉淀;⑸加入一种可和水混溶的非极性溶剂减小其介电常数,而导致溶解度的减小;⑹如果加入一种非极性强的溶剂,使介电常数大大地下降会导致变性。

⒍凝胶过滤和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳这两种分离蛋白质的方法均建立在分子大小的基础上,而
且这两种方法均采用交联的多聚物作为支持介质,为什么在凝胶过滤时,相对分子质量小的蛋白质有较长的保留时间,而在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时,它有移动得最快?
⒎在一混合液中含有三种蛋白质,其性质如下:蛋白质A相对分子质量20 000D、等电点8.5;蛋
白质B相对分子质量21 000D、等电点5.9;蛋白质C相对分子质量5000D、等电点6.0;设计一个方案分离纯化这三种蛋白质。

⒏常见蛋白质相对分子质量测定方法和原理。

⒐常见蛋白质含量的测定方法。

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