cho基因敲除细胞系

cho基因敲除细胞系

北京维尚立德生物

HO-GS-/-1 is derived from CHO-K1 cell (ATCC ), and Knock-out glutamate-ammonia ligase gene by TALEN, then adapt to suspension culture with serum free culture medium.

Cho细胞来源：ATCC CHOK1

Genotype sequence：

CHO GS WT:

GS Knock-out genotype : 5bp

Mutant:

ATTTTGATGGCTCTAGTACCTTTCAGTCTGAGGGCTCCAACAGTG.....TATCTCAGCCCTGTTGCCATGT

WT: ATTTTGATGGCTCTAGTACCTTTCAGTCTGAGGGCTCCAACAGTGACATGTATCTCAGCCCTGTTGCCATGT

mycoplasma detection result:

1-5: different cell wells sample;

NC: negative control;

北京安必奇生物

Knockout基因敲除细胞或动物模型一直以来是开展基因功能研究、寻找合适药物作用靶点的重要工具。CRISPR/Cas系统是细菌的一种适应性免疫机制，用来抵抗各种外来核酸的入侵。CRISPR/Cas9技术与ZFN、TALEN相比，更为高效、便捷，成为基因编辑的一个重要工具，在基因工程领域开创了新纪元。改造优化后的CRISPR/Cas9系统由两部分组成：sgRNA和Cas9蛋白。sgRNA特异性识别靶位点后，Cas9蛋白在靶位点附近进行切割，从而形成DSB。

安必奇凭借先进的技术平台、专业的科研团队，将为您提供各种Knockout基因敲除细胞系服务，甚至是难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、神经元细胞等。我们的一站式服务包括：sgRNA设计、筛选高效的sgRNA、敲除载体构建、敲除效率验证等。我们将会在最短的时间内提供给您高质量的单克隆基因敲除细胞系，以及全面的检测报告，包括靶点设计，靶点基因敲除效率检测，克隆筛选及靶基因检测全部过程。

技术

流程

服务内容

•靶点设计- 根据目的基因设计相应的靶位点，并构建sgRNA表达质粒。•效率检测- 通过Cruiser™Enzyme酶切及pool细胞测序对设计的sgRNA 进行靶点敲除效率检测。

•细胞转染- 将cas9和sgRNA质粒转染目的细胞。

•克隆筛选- 挑选单克隆细胞，检测细胞基因型。

•敲除检测- Cruiser™Enzyme酶切、TA克隆测序、qRT-PCR 、Western blot 等。

我们的优势

•多样细胞种类- 在H1299、2F-2B、4T1、786-O、9607、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、CHO、HepG2 等多个种属细胞中成功构建

Knockout基因敲除细胞系。

•一站式服务- 我们提供从sgRNA设计至敲除结果检测（DNA、mRNA、蛋白水平）的一站式服务，满足客户不同的需求。

•各种基因位点- 敲除效率不受靶位点限制。

•敲除效率高- 敲除效率达到高，且脱靶效率低，达到100%的准确率。

应用前景

•研究基因的功能及表达调控机制。

•构建各种基因突变导致的疾病模型如白化病、阿尔兹海默症、镰刀型细胞贫血症等，从而研究疾病的治疗及诊断方法。

•染色体敲除或大片段敲除[1]。

•通过设计模版链和同源臂，插入外源基因或修复突变基因，从而进行转基因或突变基因修复实验[2]。

•利用Cas9的突变体（dCas9）只能特异性识别结合靶位点，而不能产生DSB 的特点，可以进行基因表达调控的研究[3-4]以及甲基化等表观遗传学研究[5]。参考文献

[1] He Z, Proudfoot C, Mileham A J, et al. Highly efficient targeted chromosome deletions using CRISPR/Cas9[J]. Biotechnology and bioengineering, 2015, 112(5): 1060-1064.

[2] Schwank G, Koo B K, Sasselli V, et al. Functional repair of CFTR by CRISPR/Cas9 in intestinal stem cell organoids of cystic fibrosis patients[J]. Cell stem cell, 2013, 13(6): 653-658.

[3] Perez-Pinera P, Kocak D D, Vockley C M, et al. RNA-guided gene activation by CRISPR-Cas9-based transcription factors[J]. Nature methods, 2013, 10(10): 973-976.

[4] Gilbert L A, Larson M H, Morsut L, et al. CRISPR-mediated modular RNA-guided regulation of transcription in eukaryotes[J]. Cell, 2013, 154(2): 442-451.

[5] Konermann S, Brigham M D, Trevino A, et al. Optical control of mammalian endogenous transcription and epigenetic states[J]. Nature, 2013.CRISPR/Cas9技术