实验室生物安全防护

BSL-2外加：1 、和进入走廊隔 开2、双门进入 ，门自动关闭3 、排出的空气不 循环4、实验室 内负压
BSL-3 BSL-2操 作外加：1、控 制进入2、所有 废物消毒3、洗 涤前，实验服消 毒4、有基础血 清
P4
BSL—4
对生命有高度危 险的危险性病源 或外源性病源： 致命、通过气溶 胶而致实验室感 染：或未知传播 风险的有关病源
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BSC-Ⅰ
• BSC-Ⅰ级生物安全柜原理图
A 前开口 B 可视窗 C 排风HEPA过滤器 D 压力排风系统
特点：为人和环境提供保护，但进入空气未 过滤，无法有效保护操作的标本和材料。
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BSC-II
✓Al 、A2、 Bl 和 B2 型
✓无菌空气经工作台面，提供个
体防护，和台面物品不受污染。
防护水平
实验室操作和安全设施
ABSL-1 限制出入，穿戴防护服和手套。
ABSL-2
ABSL-1的操作内容加上, 危险警告标志。可 产生气溶胶的操作应使用Ⅰ级或Ⅱ级BSC。 废弃物和饲养笼具在清洗前先清除污染。
第二类 第一类
ABSL-3 ABSL-4
ABSL-2的操作内容加上,进入限制,所有操作 均在BSC内进行，并穿着专用特殊防护服。
✓ 操作人员通过固定在安全柜窗口 的橡胶手套，进行工作台面的操 作
✓ 有可灭菌的、装有HEPA过滤排 风装置的传递箱
✓ 与一个双开门的高压灭菌器相连 接，并用它来清除进出安全柜的 所有物品的污染
✓ 适用于三级和四级生物安全水平 的实验室。
✓ 用于操作危险度Ⅲ、Ⅳ级生物因 子
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（三）使用要求
✓3)物品放置:①生物安全柜前后气格栅不被阻挡;②安全柜内物 品应70%酒精表面消毒;③物品应尽可能地放在工作台后部，可 产生气溶胶的设备靠后部放置;④盛装生物危害性废弃物的物品， 放在安全柜内某一侧，不应放在柜外面;⑤工作台面上的实验操 作应该按照从清洁区到污染区的方向进行。
理想的工作台摆放原则 清洁——污染区
• 不同生物安全防护等级的实验室其具体要求各不 相同。
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（一）BSL-1实验室
1、针对对象
Ⅰ级微生物类别，不引起人或动物疾病的微生物
2、基本要求
如用于教学的普通微生 物实验室等。检测
• 建设选址方面无特殊要求
大肠杆菌、枯草杆菌
• 不需要安装生物安全柜等防护设备
• 应能防止昆虫和啮齿动物等进入
• 在可以开启的窗户上安置纱窗
• 配备高压蒸汽灭菌器、化学消毒装置等消毒 灭菌设施
• 安装不低于II级的生物安全柜
• 实验室的门能自动关闭
• 实验室应配备洗眼装置、喷淋装置等
• 需制定专门的安全操作规程
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（三）BSL-3实验室
1、针对对象
多集中在北京，上海， 2004年建成我国首个移动
式P3实验
Ⅲ级微生物、新发传染病和大容量或高浓度的、具有
实验室安全与管理 卫检 第2版
第四节 实验室生物安全防护
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第四节 实验室生物安全防护
一 实验室生物安全防护类型 二 常用生物安全设备 三 个人安全防护用具 四 生物实验室技术规范 五 生物实验室的消毒与灭菌
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一 实验室生物安全防护类型
• 实验室生物安全防护的内容包括安全设备、个体 防护装置和措施（一级屏障）；实验室的特殊设 计和建设（分区、单向气流）要求（二级屏障） ；严格的管理制度和标准化的操作程序及规程（ 三级屏障）
✓可用于操作危险度 Ⅱ 级和Ⅲ
级的感染性物质
✓在使用正压防护服的条件下，
可用于操作Ⅳ级的感染性物质
✓四种类型区别：排风、气体循
环、气流方向等不同
A 前开口；B 可视窗口； C 排风HEPA过滤器； D 后面的压力排风系统； E 送风HEPA过滤器；F 风机
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BSC-Ⅲ
✓ 为负压封闭式操作环境，由一个 外置的专门的排风系统控制气流
• 设立在独立建筑物内，且该建筑应远离市区
• 制定最严格的操作规范
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病源
一级屏障 二级屏障 三级屏障
P1
BSL—1
不会引发健康成 人疾病
不要求
开放实验台、洗 手池
标准的微生物操 作，无特殊操作 规范
P2
BSL—2
人类病源菌，因 皮肤伤口、吸入 、黏膜曝露而发 生危险
1级、2级生物 安全柜 实验 服、手套、若 需要则采取面 部保护措施
1、生物安全柜的安装要求
•清洁环境，远离人员、物品流动大的地方。 • 远离门和窗。 • 侧面留有30cm的间距。 • 预留出30-35cm空间连接管道，外接的排气 口要比楼层高2米。 •专用电源
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2、生物安全柜的使用
1.正确安装，确保安全柜与外部排风系统压力平衡，保证安 全柜处于正常工作状态。
2.定期维护和检测，确保安全性。 3.注意保洁，每天做完实验后，清除所有废弃物，再用75%
• （一）原理 • （二）分类及特点 • （三）使用要求 • （四）维护校验
（一）原理
• 利用高效空气过滤器对空气中微小粒子的阻留特 性，结合负压环境和专门设计的气体流动模式， 实现对危害性生物气溶胶的屏蔽
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（二）分类及特点
• BSC有三个级别， 即BSC-Ⅰ、BSC-Ⅱ（A1、 A2、B1、B2）和BSC-Ⅲ Ⅲ级为密闭袖套操作，其余为前开口操作。
所，在建中
Ⅳ级微生物。实验室隶属于国家或卫生主管机构。
2、基本要求
黄病毒、埃博拉病毒、 中欧蜱传脑炎病毒
• 除满足BSL-1、2和3级生物安全实验室的要求之外
• 分安全柜型实验室和穿着正压服型实验室
• 安全柜型实验室中所有操作均在Ⅲ级生物安全柜中进 行
• 正压服型实验室中工作人员必须穿着特殊的正压服式 保护服装
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二、负压柔性薄膜隔离装置
• 将工作空间用透明聚氯乙烯(PVC)完全包裹起来悬挂在钢 架上，隔离装置始终维持负压。入口处的空气经一个 HEPA过滤器过滤，出口处经两个HEPA过滤器过滤，可 直接将空气排到建筑物外
• 无生物安全柜的现场，采用柔性薄膜隔离装置来进行高危 险生物体(危险度Ⅲ级或Ⅳ级)的操作
高度气溶胶扩散危险的Ⅱ级微生物
2、基本要求
• 除满足BSL-1、2实验室的要求之外 • 独立建筑物或者在建筑物中自成隔离区
结核分枝杆菌、牛分枝
杆菌、鼠疫杆菌、炭疽 杆菌、Q热病原体、 HIV(血清学检测除外)、 立克次氏体等
• 在主实验室内设置Ⅲ级生物安全柜 • 设置不产生蒸汽的高压灭菌锅或其他消毒装置
• 实验室应明确划分为清洁区、半污染区和污染区
• 安装独立的通风空调系统以控制实验室气流方向和压强梯度 • 实验记录等资料通过传真机等发送至实验室外
• 不得将任何未经消毒灭菌的材料带出实验室
• 制定更加严格的生物安全操作规范
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（四）BSL-4实验室 1、针对对象
魔鬼式、全封闭式实验室， 全球50个，我国仅中科院 武汉病毒研究所有1个，中 国农科院哈尔滨兽医研究
正压服型实验室
安全柜型实验室 9
（五）实验动物设施的生物安全防护实验室
1、ABSL-1 适用于饲养大多数经过检疫的储备实验动物(灵长类除
外)，以及专门接种了危险度Ⅰ级微生物的动物。 要求应用微生物学操作技术规范(GMT) 。
2、ABSL-2
适用于专门接种了危险度Ⅱ级微生物的动物。
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3、ABSL-3
✓6)溢出物处理:发生感染性物品溢出时，在安全柜工作状 态下，用有效消毒剂立即进行清理，尽可能减少气溶胶的 生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒或高压灭菌。
✓7)保持洁净:在实验结束时，所有物品清除表面污染后移 出安全柜。擦拭生物安全柜的内部表面污染。用70%酒精 消毒。
✓8)个人防护:在进行一级和二级生物安全水平的操作时， 可穿普通实验服。在进行三级和四级生物安全水平操作时， 使用前面加固处理的反背式实验隔离衣。手套应套在隔离 衣的外面，可以戴加有松紧带的套袖来保护操作人员的手 腕。有些操作还需戴口罩和安全眼镜。
ABSL-3的操作内容加上,严格限制出入,进入 前更衣,配备Ⅲ级BSC或正压防护服,离开时淋 浴,所有废弃物在清除出设施前需先清除污染 。
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二 常用生物安全设备
实 负压柔性薄膜隔离装置 洗眼器
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一、生物安全柜 biological safety cabinet,BSC
✓9)警报器:生物安全柜采用两种警报方式，窗式警报器提 示滑动窗移到适宜的位置；气流警报器表明正常气流模式 受到了干扰，立刻停止工作，并通知实验室主管。
（四）维护校验
• 在进行维护、更换过滤器、性能测试、以及气体 消毒以前，应使用消毒剂清除所有内部工作表面 和暴露内表面的污染。
• 评估内容：安全柜的完整性、HEPA过滤器的泄 漏、向下气流的速度、正面气流的速度、负压/换 气次数、气流的烟雾模式以及警报和互锁系统进 行测试。还可选择进行漏电、光照度、紫外线强 度、噪声水平以及振动性的测试。
• 应配备消毒设备
• 在靠近实验室出口处设立洗手池
• 地面光滑无缝，台面耐热、耐腐蚀、耐水
3、操作规范
不需要制订特殊的安全操作规程
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（二）BSL-2实验室
1、针对对象
Ⅱ级微生物，公共卫生、临床、医院的诊断实
验室
如麻疹病毒、 沙门氏
2、基本要求
菌、乙型肝炎病毒、 HIV血清学检测等
• 除满足BSL-1实验室的全部要求之外
• 适用于接种危险度Ⅲ级微生物的动物，或根 据危险度评估结果来确定 。所有系统、操作和规程每年都需要重新检查及认证。
4、ABSL-4
• 适用于接种危险度Ⅲ级微生物的动物，或根 据危险度评估结果来确定 。所有系统、操作和规程每年都需要重新检查及认证。
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动物设施的防护水平的实验操作和安全设备汇总
危害程度分类 第四类 第三类
BSL-1外加：高 压灭菌锅
BSL—1操作外 加：1、限制进 入2、有生物危 险警告标志3、 “锐器”安全措 施4、生物安全 手册，其中规定 废物消毒和医疗 观察
P3
BSL—3
内源性和外源性 病源，可通过气 溶胶传播，能导 致严重后果或生 命危险
1级、2级生物 安全柜保护性 实验服、手套 、若需要则采 取呼吸保护措 施
在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行
干净的物品
被污染的区域
废弃物托盘
垃圾袋
✓4)紫外灯:每周对紫外灯进行清洁，避免灰尘和污垢影响 杀菌效果。定期检查紫外线的强度，操作时关闭紫外灯， 实验前、后开启20-30min。
✓5)明火:避免使用明火对气流产生影响。用微型燃烧器对 接种环灭菌。
3级生物安全柜 或1级、2级生 物安全柜加全 身的、供应空 气的正压防护 服
BSL3外加：1、 单独建筑或隔离 区域2、有供气 系统、排气系统 、真空系统、消 毒系统3、其他 有关要
BSL3操作外加 ：1、进入前换 衣服2、出实验 室前淋浴3、带 出设施的所有材 料消毒
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BSL-1 BSL-3
BSL-2
酒精消毒。 4.一般滤膜有5-10年使用寿命，在仪器压力表显示压力为
50%时候，需更换滤膜。
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3、操作规范
✓1)操作人员:维持生物安全柜开口处气流的完整性。双臂应垂直 缓慢进出安全柜。进入后等待约1min，再操作。必需的物品提 前置于安全柜内，减少双臂进出次数。
✓2)生物安全柜运行:A1及A2型，不使用时可以关闭。B1和B2 型始终保持空气流动以维持房间空气平衡。开始工作前和完成工 作后，应运行数分钟排出污染空气。
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2.离心机 - 离心桶的装载、平衡、密封、打开在安全柜中进行。 - 每次使用后要及时清除离心桶、转子和离心机腔的污染
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3.搅拌器、振荡器、混匀器和超声波破碎仪的使用
• 确认仪器正常运转。 • 建议使用聚四氟乙烯（PTFE）器皿。 • 应有防护装置，有条件在生物安全柜里，覆盖塑料罩操作。 • 在操作结束后，应在生物安全柜里开启容器。 • 使用超声波破碎仪时，应有耳部听力保护装置。
• 2.标本运输 使用可高 压灭菌或耐受化学消毒剂的二级容 器，固定标本容器并保持直立运输。
• 3.标本处理 接收大量标本的实验室应安排专门的房间或 空间。工作人员了解标本的潜在危害和防护方法，掌握破 碎或泄漏容器的处理方法。内层容器需在生物安全柜内打 开，并准备好消毒剂。
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• （二）实验室仪器和器具操作 • 1.移液管和移液器
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三 个人安全防护用具
• 1.实验服、隔离衣、连体衣、围裙 • 2.护目镜、安全眼镜和面罩 • 3.口罩及防毒面具 • 4.手套 • 5.鞋
P3
P4
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四 生物实验室技术规范
• （一）标本的安全操作 • 1.标本收集 容器坚固，防止意外破损。标本不得超过总
体积的50%，无泄漏，外部无残留。粘贴标签，要求或说 明书与标本分开放置，并置于防水袋中。