受体配体简

简单单位点系统Scatchard作图为一条直线，斜 率为 -（1/KD），横轴截距为[RT]，纵轴截距为[RT]/ KD（见图3）。
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图3 简单单位点系统RBA的Scatchard作图
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（二）非特异性结合 (non-specific binding，NSB)
NSB
在RBA系统中，放射性配体除与受体特异性结合外，还 可与其他成分（如非特异蛋白、反应容器、分离材料等） 结合。
KD＝ k2 ＝ [R][L] k1 [RL]
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2. 饱和曲线(saturation curve)
1）饱和曲线
当配体的浓度从零开始上升时，形成的复合物也逐渐 增多。但由于受体数量有限，又是可逆反应，因此[RL]的 增加不是直线上升，而是一条上升先快后慢的曲线，最后 绝大部分受体与配体结合时，[RL]的增加就非常缓慢，渐 趋水平，即受体已经饱和了，此即饱和曲线 。
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饱和曲线曲线的高度取决于[RT]（如图2）。
图2 [RT]对饱和曲线影响
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3. Scatchard作图
由式（1.1）整理可得： KD ＝ [RT-RL][L] [RL]
将上式整理可得： [RL] = [RT] － 1_ × [RL] [L] KD KD
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以复合物浓度[RL]为横坐标，以复合物浓度和游 离配体的浓度比值[RL]/[L]为纵坐标作图，即为 Scatchard作图。
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受体与配体特异性结合的特点：
➢ 亲和力高，结合容量小。
亲和力：受体与配体的结合能力。 平衡解离常数（equilibrium dissociation constant，KD）
➢ 指占据半数受体所需的配体浓度。 ➢ KD值愈小，表明亲和力愈高；KD值愈大，亲和力愈低。
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三、单位点系统RBA的基本规律
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源自文库
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2）设[LT]为配体的初始浓度，[RT]为受体的
初始浓度，则有： [L] = [LT] – [RL] [R] = [RT] – [RL]
将上式代入(1.1)式，经整理得： [RL]2-[RL]{[RT]+[LT]+KD}+[RT][LT]=0
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饱和曲线的形状和KD有关（如图1）。
图1 KD对饱和曲线的影响
第八节 受体的放射性配体结合分析 （radioligand binding assay of receptors,
RBA）
岳凌
一、总 论
受体（receptor，R）
细胞膜上或细胞内能识别生物活性物质并与 之结合，进而引起生物学效应的生物大分子。
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配体（ligand，L）
能与受体特异性结合的生物活性分子。 ➢ 配体
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四、RBA的基本方法
离体RBA的基本方法可概述如下： 1. 制备待测受体的离体标本（组织切片、细胞悬液、细胞 组分的分离制备等） 2. 加样（标本、放射性标记配基、缓冲液、非标记配基等） 3. 温育 4. 分离结合和游离的放射性标记配体 5. 测定结合部分的放射性 6. 数据处理
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标记配体的基本要求
受体密度的表示方式有以下几种：
① 胞浆胞膜等的受体含量：fmol/mg蛋白；
② 胞核的受体含量：fmol/mgDNA；
③ 完整细胞受体的含量：结合位点/cell（site/cell）或
fmol/106细胞。
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单点法实验只适用于简单单位点系统，其计算公式 如下：
[RT] = _____________RL的cpm______________ 探测效率（％）×配体比活度×标本的蛋白量（DNA量）或细胞数
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RBA的分类
➢ 定量RBA 可以测定靶组织或靶细胞中能与配体结合的受体数 （以结合位点数表示）及研究受体的亲和力（常以 平衡解离常数表示）。
➢ 定性RBA 发现和确定新的受体和受体亚型，及在分子水平研 究受体-配体的相互作用等。
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RBA的应用
➢ 神经递质 ➢ 激素和药物等的作用机制 ➢ 疾病的病因和发病机制 ➢ 新药设计和药物筛选 ➢ 受体显像与受体介导治疗
✓ 内源性配体 ✓ 外源性配体
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RBA
➢ 原理是基于放射性核素标记的配体与特异受体的理化结 合反应。
➢ 应用放射性标记配体和组织、细胞或含有受体的制剂一 起温育，使受体和配体充分结合，形成受体-配体复合物， 终止反应后，用过滤或离心的方法除去未被结合的标记 物，测定受体-配体复合物的放射性，经过数据处理，可 求得受体对配体的亲和力和受体的最大结合容量。
1）高比活度 2）亲和力高 3）特异性强 4）放射化学纯度高
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五、定量RBA的数据处理
定量RBA主要是通过已知标记配体的量 和比活度，以及测得的样本的数据，应 用数学模型求出受体的有关参数如受体 密度[RT]、KD等。
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1. 单点法实验的数据处理
通常是计算饱和区的受体密度，即受体最大结合容量 （maximum binding capacity，Rmax）。
（一）简单单位点系统受体和配体结合反应的基本规律
1. 质量作用定律
k1,v1
[R] + [L]
[RL]
根据质量作用定律：
k2,v2
v1 = k1 [R] [L] v2 = k2 [RL]
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当反应达到平衡后，
v1 = v2
即：
k1 [R][L] = k2 [RL]
则平衡解离常数（KD）的数学表达式（1.1）为：
NSB的特点
亲和力小而结合容量大，不易被饱和，随反应系统内配 体浓度增加而线性增大，而且这种结合与生物效应无关（见 图4）。
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图4 饱和曲线实验中TB、SB和NSB的关系
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在RBA的数据处理时，测得的总结合的放射性 (total binding，TB)，必须减去NSB，才能得到特 异性结合(specific binding，SB)的数据。
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二、概 述
1. 受体的分类 类(class) 膜受体
核受体 亚类（subclass） 型 (type) 亚型 (subtype)
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2. 受体与配体结合的基本特点
1）可饱和性(saturability) 2）特异性(specificity) 3）适度的亲和力（affinity） 4）可逆性(reversibility) 5）识别能力(recognition)和生物效应的一致性