酶制剂的理化指标分析_PPT幻灯片
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并催化底物化学反应的部位 。
❖
结合部位
❖
催化部位
一、酶的基础知识
❖ 酶的催化特性
❖ 1）催化效率高 ❖ 2）高度的专一性 ❖ 3）反应条件温和
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ 分光光度法： ❖ 以反应生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量
有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。 ❖ （DNS法测定纤维素酶、木聚糖酶、β—葡聚糖酶活力；福
基纤维素钠溶液中降解释放1μmol还原糖所需要的酶量为一 个活力单位（IU），还原糖以葡萄糖等量。
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ ★DNS法测定纤维素酶
❖ 2、原理： ❖ 在一定温度和pH条件下纤维素酶水解纤维素产生单糖和寡糖。
具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下 与DNS试剂发生显色反应，反应液颜色的强度与酶解产生还 原糖的量成正比，还原糖生成量与反应液中纤维素酶活力成 正比，通过分光比色测定反应液吸光度，可计算纤维素酶活 力。
E1 60
40 E2
20
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温度℃
温度对酶活性的影响
三、酶活测定方法及其影响因素
活力%
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7
pH值
pH值对酶活性的影响
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ 纤维素酶活力测定方法
❖ 1、纤维素酶 ❖ 纤维素酶是催化水解纤维素，生成葡萄糖的酶的总称。 ❖ 2、纤维素酶组分 ❖ β—1，4—内切葡聚糖酶 ❖ β—1，4—外切葡聚糖酶 ❖ β—葡萄糖甘酶
三、酶活测定方法及其影响因素
❖★DNS法测定纤维素酶
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四、酶制剂的理化特性及其评价方法
❖ 酶制剂的基本理化特性
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ 3、活力测定方法 ❖ 滤纸法：滤纸崩溃法、滤纸糖化法 ❖ CMC法：CMC粘度法、CMC糖化法（DNS法） ❖ 蓝色底物法
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ ★DNS法测定纤维素酶
❖ 1、酶活定义： ❖ 在50℃，pH为4.80条件下，每分钟从浓度为5mg/mL的羧甲
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ ★DNS法测定纤维素酶
❖ 3、具体操作
❖ 3.1试剂配制（缓冲液、标准葡萄糖溶液 、底物、DNS试剂 ） ❖ 3.2 标准曲线制作 ❖ 3.3 稀释酶液 ❖ 3.4 预热、反应 ❖ 3.6分光光度计测定 ❖ 3.7计算
❖ 酶活力（IU/mL或IU/g）= (葡萄糖等量值/180/15/0.5)×n
主要内容:
❖ 一、酶的基础知识 ❖ 二、酶制剂技术指标 ❖ 三、酶活力测定方法及其影响因素 ❖ 四、酶制剂的理化特性及评价方法
一、酶的基础知识
❖ 酶：酶是生物体内在一定条件下根据生命活动的需要而
合成的生物催化剂。酶的化学本质是蛋白质。
❖ 底物：酶所作用和催化的物质。
❖ 酶的活性中心：酶分子中能够直接与底物分子结合，
林法测定蛋白酶活力；淀粉酶、植酸酶活力测定）
❖ 黏度法： ❖ 根据酶能够降低一定浓度的标准底物的黏度的能力来确定酶
的活性。
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ 影响酶促反应的因素
❖ 温度 ❖ pH值 ❖ 酶浓度 ❖ 底物 ❖ 激活剂与抑制剂 ❖ 作用时间
三、酶活测定方法及其影响因素
活力%
120
100
80
❖ 酶制剂的稳定性 ❖ 储存稳定性 ❖ 热稳定性 ❖ 酶制剂的底物针对性
四、酶制剂的理化特性及其评价方法
❖ 评价方法：
❖ 测定酶在一定条件下的酶活保存率
❖ 粘度下降
❖ 体外模拟实验
❖ 体内试验
❖ 代谢试验
❖ 生产性能试验
最直接、最有说服力的方法
❖ 提取率
❖
结合部位
❖
催化部位
一、酶的基础知识
❖ 酶的催化特性
❖ 1）催化效率高 ❖ 2）高度的专一性 ❖ 3）反应条件温和
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ 分光光度法： ❖ 以反应生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量
有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。 ❖ （DNS法测定纤维素酶、木聚糖酶、β—葡聚糖酶活力；福
基纤维素钠溶液中降解释放1μmol还原糖所需要的酶量为一 个活力单位（IU），还原糖以葡萄糖等量。
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ ★DNS法测定纤维素酶
❖ 2、原理： ❖ 在一定温度和pH条件下纤维素酶水解纤维素产生单糖和寡糖。
具有还原性末端的寡糖和有还原基团的单糖在沸水浴条件下 与DNS试剂发生显色反应，反应液颜色的强度与酶解产生还 原糖的量成正比，还原糖生成量与反应液中纤维素酶活力成 正比，通过分光比色测定反应液吸光度，可计算纤维素酶活 力。
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温度℃
温度对酶活性的影响
三、酶活测定方法及其影响因素
活力%
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pH值
pH值对酶活性的影响
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ 纤维素酶活力测定方法
❖ 1、纤维素酶 ❖ 纤维素酶是催化水解纤维素，生成葡萄糖的酶的总称。 ❖ 2、纤维素酶组分 ❖ β—1，4—内切葡聚糖酶 ❖ β—1，4—外切葡聚糖酶 ❖ β—葡萄糖甘酶
三、酶活测定方法及其影响因素
❖★DNS法测定纤维素酶
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四、酶制剂的理化特性及其评价方法
❖ 酶制剂的基本理化特性
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ 3、活力测定方法 ❖ 滤纸法：滤纸崩溃法、滤纸糖化法 ❖ CMC法：CMC粘度法、CMC糖化法（DNS法） ❖ 蓝色底物法
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ ★DNS法测定纤维素酶
❖ 1、酶活定义： ❖ 在50℃，pH为4.80条件下，每分钟从浓度为5mg/mL的羧甲
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ ★DNS法测定纤维素酶
❖ 3、具体操作
❖ 3.1试剂配制（缓冲液、标准葡萄糖溶液 、底物、DNS试剂 ） ❖ 3.2 标准曲线制作 ❖ 3.3 稀释酶液 ❖ 3.4 预热、反应 ❖ 3.6分光光度计测定 ❖ 3.7计算
❖ 酶活力（IU/mL或IU/g）= (葡萄糖等量值/180/15/0.5)×n
主要内容:
❖ 一、酶的基础知识 ❖ 二、酶制剂技术指标 ❖ 三、酶活力测定方法及其影响因素 ❖ 四、酶制剂的理化特性及评价方法
一、酶的基础知识
❖ 酶：酶是生物体内在一定条件下根据生命活动的需要而
合成的生物催化剂。酶的化学本质是蛋白质。
❖ 底物：酶所作用和催化的物质。
❖ 酶的活性中心：酶分子中能够直接与底物分子结合，
林法测定蛋白酶活力；淀粉酶、植酸酶活力测定）
❖ 黏度法： ❖ 根据酶能够降低一定浓度的标准底物的黏度的能力来确定酶
的活性。
三、酶活测定方法及其影响因素
❖ 影响酶促反应的因素
❖ 温度 ❖ pH值 ❖ 酶浓度 ❖ 底物 ❖ 激活剂与抑制剂 ❖ 作用时间
三、酶活测定方法及其影响因素
活力%
120
100
80
❖ 酶制剂的稳定性 ❖ 储存稳定性 ❖ 热稳定性 ❖ 酶制剂的底物针对性
四、酶制剂的理化特性及其评价方法
❖ 评价方法：
❖ 测定酶在一定条件下的酶活保存率
❖ 粘度下降
❖ 体外模拟实验
❖ 体内试验
❖ 代谢试验
❖ 生产性能试验
最直接、最有说服力的方法
❖ 提取率