专题一基因工程知识点归纳

【咼考目标定位】

专题重点：DNA 重组技术所需的三种基本工具；基因工程的基本操作程 序四个步骤；基因工程在农业和医疗等方面的应用； 蛋白质工程的原理。 专题难点：基因工程载体需要具备的条件；

从基因文库中获取目的基因;

利用PCF 技术扩增目的基因；基因治疗；蛋白质工程的原理。 【课时安排】 2课时 【考纲知识梳理】

第1节

教材梳理：

知识点一 基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的 设计，并通过体外 DNA 重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性， 从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是 在DNA 分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做 DNA 重组技术。

注意：对本概念应从以下几个方面理解：

知识点二

基因工程的基本工具

1. 限制性核酸内切酶一一“分子手术刀”

（1） 限制性内切酶的 来源：主要是从原核生物中分离纯化来的。

（2） 限制性内切酶的 作用：能够识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序 列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。

（3） 限制性内切酶的切割 方式及结果：①在中心轴线两侧将 DNA 切开，切 口是黏性末端。②沿着中心轴线切开

DNA 切口是平末端。

2. DNA 连接酶一一“分子缝合针” （1） 来源：大肠杆菌、T4噬菌体

（2） D NA 连接酶的种类：E.coliDNA 连接酶和 tDNA 连接酶。

（3） 作用及作用部位：E.coliDNA 连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二

专题

基因工程

1、

2、 DNA 重组技术的基本工具

酯键，T 4DNA i 接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。

注意：比较有关的 DNA 酶

(1) DNA 水解酶：能够将 DNA 水解成四种脱氧核苷酸，彻底水解成膦酸、 脱氧核糖和含氮碱基

(2) DNA 解旋酶：能够将 DNA 或 DNA 的某一段解成两条长链，作用的部位 是碱基和碱基之间的氢键。注意：使 DNA 解成两条长链的方法除用解旋酶 以外，在适当的高温(如 94C)、重金属盐的作用下，也可使

(3) DNA 聚合酶：能将单个的核苷酸通过磷酸二酯键连接成 (4) DNA 连接酶：是通过磷酸二酯键连接双链

聚合酶和DNA 连接酶的异同点。

3. 基因进入受体细胞的载体一一“分子运输车” (1)

分子运载车的 种类：①质粒：常存在于原核细胞和酵母菌中， 是一种 分子质量较小的环状的裸露的 DNA 分子，独立于拟核之外。②病毒：常用

的病毒有噬菌体、动植物病毒等。

(2) 运载体作用：①是用它做运载工具， 将目的基因转运到宿主细胞中去。 ②是利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。

(3) 作为运载体必须 具备的条件：①在宿主细胞中保存下来并大量复制 ②有多个限制性内切酶切点

③有一定的标记基因，便于筛选。 思维探究：知识点 3、4、5主要是介绍DNA 重组技术的三种基本工具 及其作用。限制酶—“分子手术刀”，主要是介绍限制酶的作用，切割 后产生的结果。在这部分内容学习时，应关心的问题之一是：限制酶从哪 里寻找？我们可以联想从前学过的内容一一噬菌体侵染细菌的实验，进而 认识细菌等单细胞生物容易受到自然界外源 DNA 的入侵。那么这类原核生 物之所以长期进化而不绝灭，有何保护机制？进而联想到可能是有什么酶 来切割外源 DNA 而使之失效，达到保护自身的目的”。这样就对“限制 酶主要是从原核生物中分离纯化出来”的认识提高了一个层次。

基因进入受体细胞的载体一一 “分子运 输车”的学习内容，不能仅仅着眼于记住这几 个条件，而应该深入思考每一个条件的内涵， 通过深思熟虑，才能真正明确为什么要有这些 条件才能充当载体。

教材拓展：

拓展点一限制酶所识别序列的特点

限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱 基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如图，中轴线两侧的双链

DNA 军旋。 DNA 长链。

注意比较 DNA

DNA 勺缺口。 中轴馥

CCAGG A

基互补对称；GGTCC 以T 为轴，两侧碱基互补对称。

拓展点二 DNA 连接酶连接的是什么部位？

DNA 连接酶是将一段 DNA 片段3’端的羟基与另一 DNA 片段5’端磷酸 基团上的羟基连接起来形成酯键，而不是连接互补碱基之间的氢键。

基因工程的基本操作程序

教材梳理：

基因工程的基本操作步骤为四步曲：目的基因的获取；基因表达载体 的构建；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。

一?目的基因的获取

1?目的基因：主要是指编码蛋白质的结构基因。 2?目的基因的获取方法:

厂基因组文库

从基因文库中获取

文库

人工合成丿逆转录法、根据已知的氨基酸序列推测脱氧核苷

（真核生物）

注：需要重点复习的内容有： a 基因组文库与部分基因文库的含义及区别

（教材P10表格），建立基因文库的目的？如何从基因文库中获取目的基 因？ b 逆转录法的过程

cPCR 技术（原理、场所、条件、过程、特点）

DNA 复制与PCR 技术列表比较。如下所示：

DNA 上的碱基是反向对称重复排列的。如:

GC GC

CG CG 以中心线为轴，两侧碱

CDNA 序列、PCR 技术扩增目的基因、DNA 合成仪合成等。

X

（1） 从基因文库中获取 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多

群体储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。

构建基因文库的目的：为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得 所需的目的基因。

f 基因组文库：含有一种生物的所有基因。

%部分基因文库（如cDNA 文库）：含部分基因，可由mRNA 反转录而来。 （2） 利用PCR 技术扩增目的基因 PCR 是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成技术。

原理：DNA 双链复制

原料：模板DNA RNA 引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA 聚合酶（Taq 酶）； 方法：DNA 受热变性解旋为单链、冷却后RNA 引物与单链相应互补序 列结合、DNA 聚合

酶作用下延伸合成互补链。

过程：热变性（90-95 ）、退火（55-60 ）、延伸（70-75 ）。 特点：指数形式扩增

二. 基因表达载体的构建（基因工程的核心一体外进行）

1. 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在；可以遗传给下一代；使 目的基因能够表达和发挥作用。

提观g 的基0的谊便

从供倒哋规恥中

SW 軀因 ① 殛的过程； ②反襯法的过程;

瓏侧（即目的基因

DNA 片段，导入受体菌的

D 粘分子

[DJJA 连接 as

董组DN 上分子逢组质粒）

4?条件： 标记基因）

三. 将目的基因导入受体细胞

转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达 的过程。

① 导入植物细胞：常用农杆菌转化法（将构建的载体导入农杆菌， 再让农杆菌感染植

物细胞），基因枪法、花粉管通道法。（过程重 点介绍）

② 导入动物细胞：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射 到受精卵中）

（过程重点介绍）

③ 导入微生物细胞：Ca 2

"处理受体细胞成为感受态细胞，

再进行混合。

提示：农杆菌转化法的原理是利用农杆菌（胞内寄生菌）对植物的感 染而把目的基因导入受体细胞。

四. 目的基因的检测和鉴定 分子检测：导入检测 ①导入检测：利用 针）与受体细胞中提取的 杂交技术，目的基因DNA 一条链（作探针）与受体细胞中提取的 mRNA 杂交,

f

2.基因表达 载体的组成1

目的基因：根据需要来选择。 启动子：位于基因首端，RNA 聚合酶识别和结合的部 位，驱动转录基因。

终止子：位于基因尾端，使转录在所需要的地方停下 3.方法: 来。

I 标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因。

同种限制酶分别切割载体和目的基因， 再用DNA 连接酶把两

者连接。

目的基因与运载体结合

（以质粒为运载体）

同种限制酶、 DNA 连接酶、（目的基因、启动子、终止子、 +表达检测

DNA 分子杂交技术，目的基因DNA —条链（作探 DNA 杂交，看

是否有杂交带。 mRNA 利用DNA-mRN 分子

②表达检测：目的为了检测是否转录出了

看是否有杂交带。

③表达检测：目的为了检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白质进行抗原-抗体杂交，看是否有杂交带。

个体水平的鉴定：进行抗虫、抗病的接种实验，根据其性状判断是否表

达。

提示：①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA然后高温解成单链,

再与同位素标记的DNA探针杂交；②抗原-抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的

第3节基因工程的应用

教材梳理：

知识点一植物基因工程的应用

植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力(如抗除草剂、抗虫、抗病、抗干旱和抗盐碱等)以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。

1.提高抗逆性

(1)常用抗虫基因：用于抗虫(杀虫)的基因主要是Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等。

(2)常用抗病基因：a.抗病毒基因有：病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因；b.抗真菌基因有：几丁质酶基因和抗毒素合成基因

(3)其他抗逆基因：环境条件对农作物的生产会造成很大影响，并且这些影响是多方面的，因此，抗逆性基因也有多种多样，如：抗盐碱和干旱的调节细胞渗透压基因、抗冻基因、抗除草剂基因等等。

2.改良植物品质

由于人们的食品含有的营养不平衡，不能满足人们对食品的要求，这样，可以通过转基因技术，使植物能够合成某些本来不能合成的物质。如科学家将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物中，或者改变这些氨基酸合成途径中某种关键酶的活性，以提高氨基酸的含量。

知识点二动物基因工程的应用

1.用于提高动物生长速度：由于外援生长激素基因的表达可以使转基因动物生长得更快，将这类基因导入动物体内，以提高动物的生长速率。如：转基因绵羊和转基因鲤鱼。

2.用于改善畜产品的品质：基因工程可用于改善畜产品的品质。如：有些人对牛奶中的乳糖不能完全消化或食用后会出现过敏、腹泻、恶心等不适症状，科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，这样所获得的牛奶其成分

不受影响，但乳糖的含量大大减低。 3. 生产药物

基因工程不但促进了传统技术的变革，也为人类提供了传统产业难以得到 的许多昂贵药品，并已形成基因工程制药业的雏形。目前诸如人胰岛素、 人生长激素、人脑激素、 a -干扰素、乙肝疫苗、蛋白

C 组织血纤维蛋

白溶酶原激活剂等数十种基因工程药物已实现商品化。此外，还有促红细 胞生成素、白细胞介素-2、肾素、心钠素等一大批珍贵药品正处于试用或 临床试验阶段。 4. 用转基因动物做器官移植的供体：

目前，人体移植器官短缺是一个世界

性的难题，用其它动物的器官替代，又会出现免疫排斥现象，现在，科学 家正试图利用基因工程方法对一些动物的器官进行改造，培育出没有免疫 排斥反应的转基因克隆器官。

2.方法： 体外基因

治疗：先从病人体内获得某种相关细胞，进行培养，然后在体外 完成基因转移，再筛选成功转移的细胞扩增培养，最后重 新输入患者体内，这种方法叫做体外基因治疗。

体内基因治疗：直接向人体组织细胞中转移基因的治疗方法叫做体内基因 治疗。

说明：对于遗传病的治疗最根本的方法是进行基因替换或修复。基因 治疗的最佳时期理论上是受精卵时期，这样可以使个体的每个细胞都含有 正常基因，但在现实生活中是不可能的，因为不可能人人在受精卵时期进 行基因检查。其次是对患者进行相关细胞的基因替换，如：对于遗传性糖 尿病患者，只对胰腺的B 细胞进行基因替换，该个体就能正常分泌胰岛素, 糖尿病得以治疗；但这种局部细胞的基因替换，并没有改变其它部位细胞 的基因，如精原细胞，其后代很大可能还会患遗传性糖尿病。

教材拓展

拓展点一该节内容是对第2节知识的综合运用，是近几年及今后几年高 考的主考点。在学习这部分知识时，要注意以下几点：

1. 熟练、灵活掌握第 2节的基础知识，形成系统的、完善的知识体系

2. 目的基因来自其他生物，目的基因和受体细胞的基因构成基因重组，这 是基因工程的原理。

基因治疗

基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥 功能，从

而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效的手 段。

体外基因治疗和体内基因治疗

知识点三

1.概念：