第十章 细胞学检查

制片：
涂4-6张，用乙醚乙醇固定30min，染色。
（二）胃液脱落细胞学检查
标本采集： 1. 冲洗法 2. 摩擦法 3. 胃镜直视下细胞收集

(二)不足
1．取材不准，涂片过厚过薄，影响诊断结果
2．对黏膜表面的脱落细胞和体腔抽出液中的脱 落细胞，难以分辨其微细结构。 3．标本采集的是散在细胞成分，不能全面观察 病变组织的结构层次，因此不利于对肿瘤做组 织学分型。
4. 无法确定肿瘤位置和深度 5. 脱落细胞易受人为因素影响。
三、注意事项
【染色步骤】
1．固定涂片 15～30 min。 2. 渐进脱水 将已固定涂片依次进入80 ％、70％、50％乙醇液各1 min，水洗。 3．染细胞核 置涂片入Harris苏木素液5 min。 4．分色 浸入0．5％盐酸乙醇分化液数秒钟后，流水冲洗。 5．渐进脱水 涂片依次经70％、80％、90％乙醇液内各脱水1 min。 6．染细胞质 (1)浸入橘黄G染1～2 min，进95％乙醇液I 、Ⅱ各1 min。 (2)用EA一36染色5 min，进95％乙醇液I 、Ⅱ各1 min。 7．脱水透明 无水乙醇I、Ⅱ，二甲苯I 、Ⅱ。 8．封片中性树胶封固。
及鉴别淋巴瘤的诊断。不用于痰和宫颈 细胞学涂片。
(三)迈-格-吉染色法：
(May-Grunwald-Giemsa，MGG)
MGG由May-Grunwald染料和Giemsa染料组成。前者化 学名为曙红亚甲基蓝Ⅱ，对胞质着色较好；后者对胞核 着色较好。因此MGG染色，可兼两者的优点，常用于细 胞涂片染色。 用于：细胞涂片、细菌、真菌和胆固醇染色
【染色结果】
1. 上皮细胞核呈深蓝色、核仁红色，胞质颜色 随细胞类型和分化程度不同而异，可呈橘黄、 粉红或蓝绿色。 2．红细胞鲜红色。 3．白细胞胞质呈淡蓝色，核呈深蓝黑色。 4．黏液淡蓝色。
应用：宫颈脱落细胞学检查

(二)瑞氏(Wright)染色法
染液配制
1. 瑞氏染料 1g 甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml 先称干燥瑞氏染料放置乳钵内， 用乳棒轻轻 敲碎染料成粉末， 再行研磨至听不到 研芝麻声 即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研 磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着，再加 较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入 清洁储 存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵 内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口，存室温暗处，储存愈久 ，则染料溶解、分解就越好，一般储存 3 个月以上为佳。 2. 缓冲液： （ pH6.4~6.8 ，弱酸性）： 1% KH2PO4 30ml 1% Na2HPO 20ml H2O( 新鲜 ) 加至 100ml 置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废


(二)涂片操作方法

1．推片法 通常把标本低度离心或自然沉淀后推片。方法是两手各持一张 玻片，甲玻片前部涂有样品，然后将样品处与另一手上玻片之间形成40度 左右夹角，将载玻片上的细胞标本匀速推动，做成细胞涂片。注意：因癌 细胞体积较大，常位于细胞涂膜的尾部，因此推片时不要将尾部推出玻片 外 2．涂抹法 为细胞学标本最常用的方法，常用棉签棒、针头或吸管将标本 均匀涂抹于玻片上，应注意：涂片动作应轻柔利索，沿一个方向，一次涂 抹而成。一般有往复涂抹法和转圈涂抹法。 3．拉片法 常把小滴状标本，置于两张载玻片之间，稍加压力反向拉开， 即成两张厚薄均匀的涂片。选拉片法制片可适用于痰、胸腹腔积液和穿刺 细胞标本。 4．喷射法 适用于液体标本。方法是在距离玻片2～3 cm的高度处，用配 有细针头的注射器将标本均匀、反复地喷射在玻片上。此法适用于各种吸 取液体标本的制作。 5．印片法 此法为活体组织检查的辅助方法。方法是将小块新鲜的病变组 织在玻片的不同部位，印按3～4次后拿开
染色方法


（1）涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落
（2）滴加瑞氏染液染1分钟,使标本被其中甲醛所固定 （3）加等量PH6.4的磷酸盐缓冲液(或等量超纯水)轻轻晃动 玻片,均匀静置5分钟 （4）水洗、吸干、镜检
结果：细胞核染成紫红色，细胞质染成
紫蓝色，粘液染成粉红色或淡蓝色。
应用：用于血液、骨髓、胸腹水细胞学
2. Ⅱ液的配制：

3. 磷酸缓冲液配制：1％磷酸氢二钠20ml，l％磷酸二氢钠30ml，加蒸馏水至 1000ml，调整pH 6.4-6.8(用蒸馏水代替缓冲液，效果亦佳)。
2．染色步骤
(1)自然干燥的细胞涂片(预先滴加甲醇固定更好)水平置于 染色架上。 (2)将I液(用缓冲液或蒸馏水5-10倍稀释)滴盖涂片上，lO-30 分钟。 (3)倒弃涂片上的I液，自来水漂洗干净。 (4)立即滴盖Ⅱ液(用缓冲液或蒸馏水5-10倍稀释)在涂片上染 色10-30分钟。 (5)倒弃涂片上的Ⅱ液，自来水漂洗干净。 (6)趁湿加盖片或待干后镜检。 染色结果: MGG染色将细胞核染成紫红色，细胞质和核仁染 成蓝紫色。

浸入法：可将涂片直接浸入容器的固定液中浸泡10～30 min多数 标本用此法固定。 滴加法：或把涂片平放在染色架或桌面上，把固定液滴加在涂片 上盖满涂片膜，此法可防止细胞脱落。常用于需做瑞氏或MGG染 色的胸腹腔积液、尿及穿刺细胞涂片。

2．干燥固定法 待涂片自然干燥，再滴加或浸入固定液进行固定。
二、涂 片
(一)涂片操作注意事项

1．操作要轻巧，避免人为损伤脱落细胞。 2．厚薄要适宜。涂片太厚，细胞容易重叠，不利于 镜检；涂片太薄，片中细胞数量太少，容易漏诊。 3．涂片应均匀。细胞成分应涂布在玻片的三分之二 范围内，以利于观察和摄影，余1／3留作贴标签。 4．同一标本至少一次涂两张涂片，要做好标记，刻 写编码，防止错号与漏诊的发生。
【染液配制】
1. Harris苏木素染液的配制 配制方法同组织染色 2. 橘黄G染液的配制 橘黄G 0.5g，溶于5 mL蒸馏水，加无水乙醇 95ml，加磷钨酸0.015g。 3. EA-36染液的配制 材料0.5％亮绿45ml，0.5％伊红Y水溶液45ml ，0.45％俾士麦棕水溶液10ml，磷钨酸0.2g，碳酸锂饱和液1滴(先 配制原液)。 方 法 (1)亮绿液 亮绿0.5g溶于5ml蒸馏水中，再加无水乙醇至100ml。 (2)俾士麦棕液 俾士麦棕0.5g溶于5ml蒸馏水中，再加无水乙醇至 100ml (3)伊红Y液 伊红YO.5g溶于5ml蒸馏水中，再加无水乙醇至100ml。 临用前，将亮绿液45ml，伊红Y液45ml，俾士麦棕液10ml混合后，再 加入磷钨酸0.2g，饱和碳酸锂水溶液1滴共同组成EA-36染液

四、染色

染色的目的，是利用一种或多种染料，使细 胞着色，显示不同颜色，以便细胞形态结构在 显微镜下易于观察。细胞涂片常用的染色方法 有HE和巴氏染色。一般染色后即可镜检。对 阳性或认为有保存价值的涂片需要加盖玻片进 行封固保存。
(一)巴氏染色(Papaniculaou，Pap)染色法
巴氏染色主要有苏木素、橘黄G、伊红、亮绿、俾氏麦棕等七 种染料。其中苏木素染胞核，其他染料与胞质中不同化学成分结 合染胞质。特点是对细胞具有多种染色效果，色彩丰富而鲜艳， 细胞核结构清晰，胞质透明性好，颗粒分明，由于染色效果好， 是细胞病理学染色常用的主要方法，本法多用于观察女性雌激素 对阴道上皮的影响，其不足是操作程序复杂。
1. 2. 3. 4.
正确采集标本 保证制片质量 认真阅片 努力学习，善于总结
5.
6.
加强和临床联系
应用推广新技术
第二节 标本的采集和制片
一、标本采集
（一）标本采集原则
及时、正确、清洁、防止并发症
（二）标本采集方法
1. 2. 3. 4. 5.
直接采集法 摩擦法 液体抽吸法 液体标本的采集 灌洗法
(四)发现癌前病变 程。
(五)用于诊断癌
及时治疗癌前病变，干预癌变过
适于防癌普查
二、细胞学检验的优点与不足
(一)ห้องสมุดไป่ตู้点

1．方法简单易学，容易掌握。 2．设备简单、容易推广，费用低。


3．安全，患者痛苦少或无痛苦，可反复取材检验，无不良反应
4．制片技术简捷，报告快速，出报告时间短。 5．癌细胞检出率较高，如技术条件好，采集细胞方法正确，某 些肿瘤阳性率可达80％～90％。尤其对某些无明显临床表现的恶 性肿瘤，如隐性肺癌，能够得到早期诊断。 6．可以对某些器官局部(如宫颈)进行多位点的脱落细胞学检查
染液配制
1. I液的配制：

迈格染料 lg 甲醇 100ml 在研钵内用少量纯甲醇将染料充分研磨成均匀一致的悬液，倒人烧瓶中，加 入其余的甲醇后置入37℃温箱4-6小时，每隔半小时研磨半小时，然后放入深 棕色瓶内，在室温下保存，2周后使用。临用前取上液40ml，加纯甲醇20ml 混合用作工作液。 姬氏染粉 0.6g 甘油 50ml 甲醇100ml 将姬氏染粉溶于甘油内，在研钵内研磨3-4小时，使之磨匀，加入纯甲醇后搅 拌均匀,放入深棕色瓶内，室温下保存，2周后即可使用。
MGG染色特点
染色方法简单，且兼有瑞氏、姬氏两种染色的优点， 并且涂片可保存十多年而不退色。MGG染色对胞质胞 核染色效果均较好，结构清晰，所染细胞亦比HE染色 的细胞大；同时对细菌、霉菌及胆固醇结晶的显示也 很清楚。因此适用于淋巴造血系统的细胞标本、胸腹 水、穿刺标本等。尤其对鉴别恶性淋巴瘤的类型， MGG染色更有帮助。
第十章 细胞学检验技术
病理学
活体组织检验 细胞病理学 脱落细胞学检验
细针穿刺吸取细胞学检验
一、应用范围
(一)诊断某些良性病变 如宫颈涂片，诊断滴虫阴道 炎；淋巴结穿刺诊断慢性淋巴结炎等。 (二)适用于阴道脱落细胞学检验 可判断女性雌激素 水平，了解卵巢功能状态和确定卵巢排卵时间。 (三)用于肿瘤治疗后的随诊观察 判断肿瘤切除或放 疗后的疗效以及有无复发和转移等。
(三)注意事项

1．固定液要根据染色要求，选用合适的固定液 如巴氏或HE染色，应选 用95％乙醇固定，进行MGG染色可选甲醇固定液，而瑞氏染色则以自然 干燥固定为宜。 2．防止交叉污染，保持固定液浓度 当乙醇固定液浓度低于90％时，要 及时更新固定液。


3．液体标本涂片后，应将其在空气中放置片刻，待涂膜周边稍干而中央 尚未干时再浸人固定液固定(潮干固定)，如等全部细胞干燥后再固定， 染色后细胞肿胀、核染色质结构模糊不清，此称为人为退变，将严重影 响诊断结果。 4．标本固定时间因涂片多少与固定液不同而异，一般固定不少于15 min。固定时间一到要及时染色。穿透力强的固定液固定后不可过夜染 色。
3．三氯甲烷乙醇固定液 又称卡诺(carnoy)固定液，穿透力强，固定效 果好。由于试剂价格较贵，配置麻烦，一般只用于核酸染色、糖原染色 和黏蛋白染色等特殊染色。 4．甲醇 固定效果好，结构清晰，常用于瑞氏、MGG或免疫组化染色的 自然干燥涂片的预固定。


(二)固定方法
1．带湿固定法 即涂片尚未干燥时即进行固定的方法，适用于痰、 宫颈刮片及食管拉网涂片的固定，不适用于太稀薄的标本
(四)苏木素-伊红染色
不宜用于宫颈细胞学检查
第三节 常用细胞学检查方法
一、食管、胃脱落细胞学检查 (一)食管脱落细胞学 【标本采集】 主要方法有食管拉网和食管镜刷。
(1)拉网方法：以做3次为宜。
拉网网囊前端：第一次吞咽到达部位距切牙15cm；第 二次到达部位距切牙25 cm；第三次到达部位距切牙40 cm。每次网囊的上半部和下半部都要分别涂片，并做 好标记。根据每次涂片上下端片检查的阳性结果，就 可以确定出肿瘤的部位(网囊近端宜重点涂片，以提高 阳性检测率)。 (2)禁忌证：食管静脉曲张、食管溃疡、胃及十二指肠溃 疡伴出血。




三、固定
固定(fixation)的主要目的在于保持细胞的自然形态，防止细胞自溶或 细菌性腐败，保持细胞内蛋白质、糖等成分易于着色。 (一)常用固定液

1．95％乙醇固定液 为最常用的固定液，适合大规模防癌普查时使用， 但渗透性较差。

2．乙醚乙醇固定液 此固定液渗透性强，固定效果好，适于一般细胞学 染色，如巴氏染色和HE染色。