第四章--细胞化学染色PPT课件

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【临床意义】
病理性变化： （1）细菌性感染与病毒性感染
（尤其是化脓性感染）
明显增加 无明显变化
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(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病
明显增加
明显下降且常为零分， 缓解时又上升到正常
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（3）再生障碍性贫血
增加
阵发性睡眠性血红蛋白尿 下降
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三、过碘酸-雪夫反应 ( 糖原染色 )
α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）
（单核细胞、粒细胞、淋巴细胞）
α-丁酸萘酚酯酶
（单核细胞、巨噬细胞）
醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-D NAE)
（单核细胞、粒细胞、淋巴细胞）
特异性 氯乙酸AS-D萘酚酯酶(AS-D NCE)
（粒细胞）
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α-醋酸萘酚 （基质液中）
水解 α-醋酸萘酚酯酶 （细胞内）
【
α-萘酚
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3.其他细胞 ➢ 戈谢细胞呈强阳性
（葡萄糖脑苷脂在单核-吞噬细胞积聚）
➢ 尼曼-匹克细胞呈阴性或弱阳性 （鞘磷脂在单核-吞噬细胞积聚）
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四、α-醋酸萘酚酯酶染色
（α-naphthol acetate esterase，α-NAE）
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酯酶
非特异性
酸性α-醋酸萘酚酯酶
（T淋巴细胞、单核-巨噬细胞）
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2.鉴别急性白血病类型
（1）急性淋巴细胞白血病
阳性率20%～80%，呈红色粗颗粒状或块状。
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（2）急性粒细胞白血病 少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色。
（3）急性单核细胞白血病 可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时
胞质边缘处颗粒较粗大。
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（4）巨核细胞白血病 阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。
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【原理】Kaplow偶氮偶联法
中性粒细胞
磷酸萘酚钠
（基质中）
胞浆中NAP
水解 α-萘酚
＋ 磷酸钠
重氮盐
紫黑色偶氮染料
（坚牢蓝盐RR）
（胞浆中）
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【结果判断】
胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+～++++）
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【正常血细胞染色反应】
1. 中性成熟粒细胞（杆状和分叶）阳性反应 其他细胞呈阴性反应
（分化差的原粒细胞呈阴性反应）
（2）急性单核细胞白血病 弱阳性反应 （分化差的原单核细胞呈阴性反应）
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2. 急性淋巴细胞白血病 阴性反应 或阳性率< 3%(残留的原粒细胞)
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二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色
（neutrophilic alkaline phosphatase，NAP）
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一、过氧化物酶染色 （peroxidase，POX）
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髓过氧化物酶（ marrow peroxidase,MPO )
血细胞主要的POX,是人类中性粒细胞含量 最多的蛋白质，主要功能是破坏生物氧化过 程中有剧毒的过氧化物。
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【原理】
过氧化氢 POX
（基质中） 粒、单核 细胞胞浆
二氨基联苯胺 （无色）
显示 被染的化学物质最终形成稳定的 有色沉淀
复染 显示各种细胞，其颜色与有色沉 淀的颜色有明显的对比度
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三、临床应用
1.鉴别各类血细胞 2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断 3.观察疾病疗效和判断预后
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第二节 常用细胞化学染色方法
➢ 过氧化物酶染色 ➢ 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 ➢ 过碘酸-雪夫反应 ➢ α-醋酸萘酚酯酶染色 ➢ 铁染色
颗粒较粗大。
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4.淋巴细胞系统 大多数淋巴细胞呈阴性； 少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。
5.巨核细胞系统 呈颗粒状或块状阳性（含血小板）。
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【临床意义】
1.红细胞疾病:恶性疾病呈阳性，良性疾病，呈阴性。 红血病或红白血病 幼红细胞阳性 巨幼细胞性贫血 幼红细胞阴性
骨髓增生异常综合征 幼红细胞阳性 再生障碍性贫血 幼红细胞阴性
第三章
血细胞化学染色
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第一节 概述
以细胞形态学为基础，根据化学反应的原理 ，应用涂片染色的方法，对血细胞内的各种 化学成分及其变化作定性、定位、半定量的 分析。
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一、研究对象
外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的
化学物质：
酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等
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二、基本步骤
固定 保持细胞结构和化学成分
新生态氧 [O]↑
棕黄色沉淀 （浆内酶部位）
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【结果判断】
➢阴性 无颗粒 ➢弱阳性 颗粒小，分布稀疏 ➢阳性 颗粒稍粗，分布较密集 ➢强阳性 颗粒粗大，密布于整个胞浆
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【正常血细胞染色反应】
1.粒细胞系统 POX主要存在于粒系细胞中。 分化差的原粒细胞阴性; 分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各 阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成 熟逐渐增强。
（periodic acid-Schiff reaction，PAS）
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【原理】
乙二醇基 过碘酸
(多糖类物质含有) 氧化
双醛基
雪夫试剂中 的无色品红
紫红色化合物 (附于含多糖类
的胞浆内)
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【结果判断】
阳性 胞浆内出现红色阳性物， 呈弥漫均匀红色、颗粒状或小块状。
阴性 胞浆内无色,核淡绿。
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2.NAP积分值
油镜下计数100个成熟中性粒细胞（杆 状和分叶）,分别记录其分级情况：
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(-)
0分
(+)
1分
(++)
2分
(+++)
3分
(++++) 4分
阳性率 全部阳性反应细胞之和 积分值 各种阳性程度细胞的分值之和
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3.参考值 积分值 40~80分 阳性率 10%~40% ( 各实验室参考值不同)
原
理
】
重氮盐 （坚牢蓝B）
胞浆不溶性灰黑色
或棕黑色沉淀
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【结果判断】
胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀 为阳性。
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氟化钠抑制试验 在基质液中加入适量NaF,其余染色方法同上。 两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细
用阳性率报告结果，并说明阳性物的形态。
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【正常血细胞染色反应】
1.粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性； 分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞 各阶段均呈阳性反 应，阳性程度随细 胞的成熟逐渐增强。 阳性物呈细颗粒、 均匀红色。
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2.红细胞系统 阴性
3.单核细胞系统 细颗粒状，有时分布于细胞边缘的阳性
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2.单核细胞系统 阴性或弱阳性 3.淋巴细胞系统
红细胞系统 巨核细胞系统 阴性 浆细胞 组织细胞
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【临床意义】
临床上是辅助判断急性白血病首选的、最 重要的细胞化学染色
急性髓细胞白血病
鉴别
急性淋巴细胞白血病
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1. 急性髓细胞白血病 （1）急性粒细胞白血病 阳性反应：M3>M2b>M2a>M1