用氰化高铁血红蛋白液作标准测定血清游离血红蛋白

3 讨 论
311 据文献[3]报道 ,白蛋白可使生理盐水配制的标准 Hb 液 光密度值减低 。我们用白蛋白标准液 (北京化工厂 99 - 2) 按 20g/ L 、30g/ L 、40g/ L 、60g/ L 浓度加入 Hb 标准液中进行测 定 。结果在 30g/ L 时光密度值下降 5 % ,40g/ L 时下降 10 % , 并开始出现随浓度增加而呈平缓增加的趋势 。若在标准液 中加入白蛋白成本颇高 ,作者选定近似生理浓度 (40g/ L) 的 光密度下降比值 011 作为本法白蛋白校正系数来解决这一 问题 。计算时将标准光密度值减去标准液值乘以系数的值 。 312 波 长 的 确 定 : 用 岛 津 UV - 260 分 光 光 度 计 在 400 ～ 650nm 波长范围内同时对标准 、样本和空白进行连续自动扫 描 。结果显示 ,在 500nm 处标准和样本均有最大吸收峰 ,因 此本法选用 500nm 波长 。原法的波长为 530nm。 313 氰化高铁血红蛋白转化液浓度的选择 :我们将文齐氏 液的原浓度 、1/ 2 、1/ 3 、1/ 4 、1/ 5 、1/ 6 浓度分别制成本标准血 红蛋白液 ,按本法测定其光密度 ,发现从 1/ 4 开始随浓度减 低其光密度值也减小 。1/ 2 的光密度值与原浓度相同 ,而空 白值则小于原浓度且随时间的延长波动小 。
400mg/ L 内线性关系良好 。样品含量高于 400mg/ L 时 ,应稀 释重做 。
表 1 按此表加入样本和试剂
试剂 (ml)
测定管 (U)
标准管 (S)
空白管 (B)
血清
0102
-
-
转- 化液
0102
-
0102
Hb 标准液
-
0102
-
放置 5min 后
1 %联苯胺
015
015
015
1 %过氧化氢
015
015
015
混匀 ,置 37 ℃水浴 20min
10 %醋酸
510
510
510
10min 后比色 ,波长 500nm ,蒸馏水调零 ,结果按下式计算 : 血清游离血红蛋白 (mg/ L) = [ Ua - Ba1 (Sa - Sa ×0. 1) - Ba ] ×100 Ua :测定管光密度 Sa :标准管光密度 Ba :空白管光密度 表 2 呈色稳定性观察
笔者对我市 1999 年 6 月至 2000 年 4 月住院输血的病人 (受血者) 1784 人进行了输血前 HBsAg、抗 - HCV、抗 - HIV、 RPR、ALT 五项检测 ,并将同期在血站献血的有偿 、无偿献血 者 5273 人也进行了同样的五项检测 ,检测方法和试剂均相 同 。其结果表明 : 受血者和献血者之间五项检测指标有差
参考文献 :
[1 ] 何长民. 医用微生物实验技术 [ M] . 兰州 : 甘肃人民出版社 , 1980 ,502.
[2 ] 戴立人 ,向友华 ,刘 莹 , 等. 重症病房革兰阴性杆菌的分布 [J ] . 中华医学检验杂志 ,1999 ,2 :77. (收稿日期 :2000206210)
用氰化高铁血红蛋白液作标准测定血清游离血红蛋白
参考文献 :
[1 ] 庄威远 ,等. 临床血液学检验 [ M] . 吉林 : 吉林医学院处 ,1988 ,
66. [ 2 ] Antal Ferencz etal . Clin. Chim. Acta ,1983 ,135～136. [3 ] 王学珍 ,等. 血浆游离血红蛋白测定 ———酚 、4 —AAP 法 [J ] . 中
2 实验结果
211 呈色稳定性观察 :用两份血清标本和 Hb 标准液同时进 行测定 。显色后在 10min、30min、50min、60min 及 80min 用比 色计比色 。结果显示在 1h 内颜色基本不变 (见表 2) 。 212 线性范围 : 将 Hb 标准液作 成 100 、200 、300 、400 、500 、 600mg/L ,用 721 分 光 光 度 计 观 察 本 法 线 性 关 系 。本 法 在
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ表 3 重复试验结果
批 间 样本
均值 SD CV( %)
批 内 均值 SD CV( %)
刘春生1 ,王 勇2 ,何东风3
(11 南充市中心医院检验科 ,四川南充 637000 ;21 川北医学院附属医院 ,四川南充 637000 ;31 南充市中心血站 ,四川南充 637000) 文章编号 :1005 - 3697 (2000) 04 - 0083 - 02 中图分类号 :R446111 文献标识码 : E
按文齐氏液最大转化能力 :5ml 可使 4mgHb (相当于常规 Hb 测定浓度 200g/ L 20μl) 转化推算 ,1/ 2 浓度能足够保证本 法标准 Hb 的全部转化 。故本法选用文齐氏液 1/ 2 浓度作 Hb 标准液的稀释液 。 314 本文改用 HiCN 作标准测定血清 (浆) 游离血红蛋白 ,大 大延长了血红蛋白标准的保存时间 ,操作更简便 。实验证 实 ,本法的线性 、回收率和精密度均良好 ,便于临床常规检 测。
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异 。现将检测结果报告如下 :
1 材料和方法
111 对象 :住院受血者在输血前的血标本 ,由输血科检测 ; 到血站有偿 、无偿献血者的血标本 ,由血站检测 。 112 仪器与试剂 : HBsAg、抗 - HCV、抗 - HIV 试剂均为上海
菌株 数量
生化试验
型别 株 % 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖 靛基质 尿素
F1b 25 5413 +
-
+
+ +/ - - -
F2a 1 212 + / - -
+ +/ - - + +
F3a 5 1019 +
- +/ -
+ +/ - + +
F4a 7 1512 +
-
+
+ - +-
F4b 1 212 +
1 材料与方法
111 试剂 11111 氰化高铁血红蛋白转化液 (试剂 1) : 配制同文齐氏 (VanKampen - Zijlstra) 液[1] 。用其 1/ 2 浓度 。 11112 血红蛋白标准液 :按常规 CCl4 法制备血红蛋白溶液 , 用 HiCN 法定值并稀释到 10g/ L 之浓度 。取此液 110ml ,用试 剂 1 稀释至 100ml ,即为 100mg/ L 。置 4 ℃保存备用 。 11113 其余试剂同原法 。[1] 112 方法 :检测血清样本按表 1 进行 。
A 11012 3133 3102 113106 2184 215
B 10310 413 411
11019 3156 312
C 6714 2167 319
67182 2167 319
214 回收实验 :在含 Hb61129mg/ L 的血清 012ml 中 ,分别加 入 0102ml 含量为 50mg/ L 、100mg/ L 、200mg/ L 的标准 Hb 液进 行 回 收 。结 果 为 97158 % ～ 101111 % , 平 均 回 收 率 为 99169 %。 215 与原法比较 :采用本操作方法与原法同时进行临床 31 份样本测定 。结果显示本法与原法有密切正相关 。 y = 11308x + 6. 16 ,r = 0. 9915 α, = 0. 05 ,P < 0101 。 216 干扰实验 21611 胆红素的干扰 :在已知值的血清标本中加入胆红素 , 使加入后终浓度为 50mg/ L 和 10mg/ L 。实验结果表明 ,胆红 素浓度达 10mg/ L 时可使本法光密度值减少 8 %。 21612 抗坏血酸的干扰 :[2] 将抗坏血酸按 20mg/ L 、2mg/ L 、 0. 2mg/ L三种浓度 ,分别加入待检血清测定 ,结果在 20mg/ L 时 ,可使原光密度值降低 1719 %。 21613 葡萄糖的干扰 :在样本中分别加入 100mg/ L 、200mg/ L 、300mg/ L 葡萄糖进行实验 。结果对本法无影响 。 217 抗凝剂的选择 :选用含枸椽酸钠 (10190mmol/ L) 、EDTA (115g/ L) 、肝素 (110g/ L) 的 基 质 血 清 测 定 , 结 果 枸 椽 酸 钠 、 EDTA 均可 引 起 光 密 度 值 下 降 , 产 生 干 扰 (α = 0. 05 , P < 0105) ,而肝素对测定结果无影响 。故用血浆进行本法测定 时 ,最好使用肝素抗凝 。 218 正常参考范围 :用本法测定正常健康体检人员 67 人 , 结果均值 42183mg/ L 。参考范围 :42183 ±318mg/ L (x ±2SD) , 比原法 ( < 40mg/ L) 稍高 。 219 标准液保存时间观察 :将本法配制的标准液置 4 ℃冰箱 保存 ,每月按样本操作并记录其光密度值 。8mon 后 ,其光密 度逐渐减低 。因此 ,此标准液在 4 ℃可保存至少 7mon。
测定血清 (浆) 游离血红蛋白的经典方法是以联苯胺作 显色底物的比色法 。在此方法中 ,其血红蛋白标准液存在配 制繁杂 、保存时间短的缺点 ,加之临床样本零散 ,每次测定要 花费很多时间配制标准液 。作者通过在传统方法的基础上 , 用氰化高铁血红蛋白 ( HiCN) 作标准 ,进行了血清游离血红 蛋白测定的探索 ,证实血红蛋白转化为 HiCN 后仍有类似过 氧化物酶的作用 。因而 ,用 HiCN 作标准解决了原方法之不 足 。现报道如下 :
-
-
+---
E4 5 1019 +
-
-
+ - + +/ -
Fx 变种 2
413
+
- +/ -
+ +/ - + +
313 本区菌痢主要以生活接触传播为主 ,其次是食物 ,这可能是近
两年夏季前后干旱 ,农村普遍缺水而造成的卫生条件差所致 。再者 市场大开放 ,摆摊设点巨增 ,食物严重污染 ,腹泻病人增加 ,给菌痢 流行造成了有利条件 。上述情况 ,足以引起全社会及卫生部门的重 视 ,应从卫生宣传教育着手 ,大力开展爱国卫生运动 ,树立以卫生为 光荣 ,不卫生为耻辱的社会新风尚 ,搞好饮食卫生管理 ,把好“入口” 关 ,切断菌痢传播途径 ,控制流行 ,这对肠道腹泻门诊的监控 、实验 室病原菌的探索 、菌群分布 、流行因素的分析都具有十分重要的意 义。
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备及开发新的疫苗具有重要意义 ,同时也给腹泻门诊医生在 治疗 、用药方面提供参考 。
表 2 46 株菌株血清学及生化实验结果
时间
标准 样本 1 样本 2
10min
0150 0180 1110
30min
0150 0180 1110
50min
0150 0180 1109
60min
01495 0179 1108
80min
0149 0178 1108
213 精密度 :用三份未知值血清样本 ,进行批内 、批间各 10 次重复测定 。结果见表 3 ,显示精密度较好 。
华血液学杂志 ,1988 ,9 (8) :497～498. (收稿日期 :2000208224)
受血者输血前和献血者五项检测指标分析
彭碧芳1 ,杨明辉2 ,李 峥2
(11 南充市中心医院 ,四川南充 637000 ;21 川北医学院附属医院 ,四川南充 637000) 文章编号 :1005 - 3697 (2000) 04 - 0084 - 01 中图分类号 :R45711 文献标识码 : E