β-乳球蛋白修饰

β-乳球蛋白修饰

将3-羟基-邻苯二甲酸酐HP溶于二甲基亚飒DMSO中，得到饱和的HP溶液；将β-乳球蛋白β-LG溶于pH8.5，0.1M磷酸钠溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；再将上述HP溶液分为五等份，每12min加入蛋白溶液中，震荡混匀，1MNaOH调节pH为8.5，酸酐在反应体系中的终浓度为60mM，在温度为25℃的条件下，放置l小时，pH7.4PBS透析，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即得成品。

3-羟基-邻苯二甲酸酐修饰乳清蛋白

南方医科大学学报第31卷P1176

乳清蛋白（OVA），3-羟基-邻苯二甲酸酐HP，二甲基亚飒DMSO

HP-OVA的制备（化学修饰）

配制20mg/ml的OVA溶液（pH8.5 0.1mol/L的磷酸钠溶液），将饱和的3-羟基-邻苯二甲酸酐HP溶液分成5等分，每间隔12分钟加入OVA中，振荡混匀，滴加1MNaOH调节溶液维持pH为8.5，置室温1小时，然后pH7.4PBS透析，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即得成品。

专利修饰

种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，

包括以下步骤：

将3-羟基-邻苯二甲酸酐（3-hydroxyphthalicanhydride，缩写HP）溶于二甲基亚飒DMSO中，得到饱和的HP溶液；将β-乳球蛋白β-LG溶于pH8.5，0.1M磷酸钠（应该是磷酸盐缓冲液）溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；再将上述HP溶液分为五等份，每12min加入蛋白溶液中，震荡混匀，每次加完后用1M NaOH调节pH为8.5，酸酐在反应体系中的终浓度为60mM，在温度为25℃的条件下，放置l小时，pH7.4 磷酸缓冲溶液PBS在4度透析过夜，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即可制得成品。

1.一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是包括以下步骤：

将3-羟基-邻苯二甲酸酐HP溶于二甲基亚飒DMSO中，得到饱和的HP溶液；将β-乳球蛋白β-LG溶于pH8.5，0.1M磷酸钠溶液中，得到蛋白终浓度为20mg/mL的蛋白溶液；再将上述HP溶液分为五等份，每12min加入蛋白溶液中，震荡混匀，1M NaOH调节pH为8.5，酸酐在反应体系中的终浓度为60mM，在温度为25℃的条件下，放置l小时，pH7.4 PBS透析，再用0.45uM微孔滤膜过滤除菌，4℃保存，即可按照常规方法制成各种剂型的成品。

2.根据权利要求1所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的β-乳球蛋白从牛奶中分离及纯化得到。

3.根据权利要求1所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的β-乳球蛋白用鸡血清蛋白OVA、兔血清蛋白RSA、猪血清白蛋白PSA、冷水鱼皮明胶G-FS、猪皮明胶G-PS 代替。

4.根据权利要求1或2所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的3-羟基-邻苯二甲酸酐用3-羟基-邻苯二甲酸酐的衍生物、琥珀酸酐、马来酸酐代替。

5.根据权利要求1或2所述的一种预防和控制人乳头瘤病毒感染的生物制剂的制备方法，其特征是所述的剂型为凝胶制剂、膏霜剂、喷雾剂、搽洗剂、盥洗剂。

Chemical modification of B-LG.

B-LG(111.1 or 11.1uM in 0.1 M phosphate pH 8.5)was treated with 3HP(1.19M in dimethylformamide),added in five aliquots (final concentration,60mM)in 12-min intervals and the pH was maintained at 8.5.The mixture(10ml) was kept for another 1h at 25℃,dialyzed against 4 I of 0.15M NaCl,10mM phosphate,pH 7.4 (PBS) overnight,redialyzed for 4 h with fresh buffer, and filtered through 0.45-um syringe filters.

2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS)(28.4mM)was carried out at pH 9.0 in phosphate buffer for 3h at 25℃.

Protein concentration were determined using the BCA Protein Assay Reagent To quantitate lysine in the original and the chemically modified preparation,they were treatment with TNBS and dialyzed against 0.1M NaHSO3. The absorbance at 420nm(A420) of the dialyzed preparation and their appropriate dilutions in 0.1M NaHSO3 were measured.Quantitation of lysine, determined from calibration curvers relating A420 values to lysine concentrations in standard,revealed that 11 to 14 of the 15 B-LG lysines were modified,depending on the 3HP/B-LG rations.The preparations han similar properties.

专利制剂配方及制法

JB-蛋白千分之0.05—1

卡波姆 1—3%

绿茶提取物 0.5—2%

三氯生 0.1—0.3%

甘油 1—5%

加水