梅毒血清学实验和临床相关问题

梅毒的血清学试验和临床相关问题（1）梅毒是由梅毒螺旋体（Treponema pallidum，TP）引起的一种慢性传染病。对梅毒的诊断除了通过临床症状外，主要是通过实验室血清学试验进行诊断。以下对于梅毒的相关试验进行概述。

梅毒螺旋体的抗原结构:

1. 外膜脂蛋白抗原：具有强免疫原性，是梅毒螺旋体的主要免疫优势抗原。

2. 轴丝抗原：是梅毒螺旋体的运动器官，其免疫原性很强，可以刺激机体产生细胞和体液免疫应答。

3. 4D抗原：为螺旋体特异性表面抗原

机体对梅毒螺旋体感染的免疫应答包括：

1. 非特异性类脂质反应素抗体：即抗心磷脂（cardiolipin）抗体，又称为反应素。是梅毒螺旋体在破坏机体组织的过程中，体内释放一种心磷脂抗原，这种抗原可刺激机体产生相应的抗体。反应素多为IgA和IgM混合型抗体，此类类脂质抗体在体外可增强巨噬细胞对梅毒螺旋体的吞噬作用。未经治疗的梅毒患者血清中反应素可长期存在，经适当治疗后可逐渐减少，直至消失。

2. 抗密螺旋体的特异性抗体：早期患者以产生针对梅毒螺旋体轴丝中37KDa鞘亚单位成分的IgM抗体为主；另外还有针对梅毒螺旋体多肽（分子量分别为45、42、33、30、16.5、15.5KDa）的抗体。二期梅毒时，血循环中可出现抗全部梅毒螺旋体抗原的IgM和IgG抗体，对多肽的抗体除了以上六种外，又增加了另外16种多肽抗体。如经治疗，IgM抗体浓度降低，血清中只能检出IgG抗体。当疾病进入晚期时，则血循环中的某些抗梅毒螺旋体抗原多肽的抗体会逐步消失。

梅毒血清学检查

1．经典的梅毒血清学试验

补体结合试验：1906年由Wasserman建立，是最早使用的梅毒螺旋体感染诊断的血清学试验。

絮状沉淀试验：1920年由Kahn建立.λ

2．使用类脂质抗原的血清学试验

性病研究实验室试验（Venereal diseaseresearch laboratory test,λVDRL）

不加热血清反应素试验(Unheated serumreagin test, USR)λ

快速血浆反应素环状卡片试验(Rapid plasmareagin circle card test，RPR)λ

甲苯胺红不加热血清试验（Toluidine redunheated serum test ，TRUST）λ使用类脂质抗原的血清学试验：优缺点---测定操作简便快速，对一期梅毒的阳性反应出现较早，对二期梅毒也有诊断价值。但该试验特异性较差，生物学假阳性可见于多种疾病，如麻风、结核、红斑狼疮、类风湿性关节炎、猩红热、慢性肝病、HIV感染等。由于感染梅毒螺旋体后，机体血循环中心磷脂抗体的出现要晚于特异性的抗梅毒螺旋体抗体，并且晚期梅毒这类抗体还有可能转阴，因此，上述过筛试验不适于一期梅毒早期和三期梅毒的临床诊断。

3．使用密螺旋体抗原的血清学试验

荧光密螺旋体抗体吸收试验（Fluoresenttreponemal antibody-absorption test,FTA-ABS）梅毒螺旋体血球凝集试验（Treponema pallidumhemagglutination assay, TPHA）

梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（Treponemapallidum particle agglutination assay, TPP A）

酶联免疫吸附试验（ELISA）λ

蛋白印迹技术（Western blotting, WB）λ

荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）

本试验是将梅毒螺旋体Nichols株抗原直接涂在载玻片上，然后将密螺旋体无毒株（Reiter 株）制成吸收剂加至待测血清标本中反应30分钟，以去除同属抗原的交叉反应。再将吸收后的血清加到玻片的抗原膜上，37℃温育30分钟，用PBS缓冲液冲洗晾干，再加荧光素标记的抗人IgG，37℃温育后冲洗，晾干，最后在荧光显微镜下观察结果。本试验由于吸收试剂的使用，提高了测定的特异性，可达92%。由于使用的是梅毒螺旋体Nichols株抗原，密螺旋体各种抗原分子均存在，提高了试验的敏感性。对一期梅毒的敏感性为80%，，二期为99~100%，三期为95~100%。测定假阳性可见于高丙种球蛋白血症、全身免疫性疾病和生殖器疱疹等。FTA-ABS是公认的“经典”密螺旋体抗原的血清学试验。

梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）

本试验是以梅毒螺旋体作为抗原的间接血凝试验，操作简便，通常作为梅毒螺旋体感染的特异性验证试验。所用抗原为将梅毒螺旋体Nichols株经超声破碎后得到的可溶性抗原成分，用其致敏红细胞。同时，同样用Reiter株制成吸收剂稀释血清，可将血清中的非特异性抗体吸收掉，以加强测定的特异性。本方法测定敏感性和特异性均较高，操作较为简便，无需特殊的仪器设备，但其对一期梅毒的检测阳性率不如FTA-ABS。

梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）

TPPA的测定原理基本上与TPHA类同，所不同的是TPPA所用的凝集颗粒为明胶，而非TP HA中的红细胞。

酶联免疫吸附试验（ELISA）

采用基因工程梅毒螺旋体抗原以双抗原夹心法检测梅毒抗体，具有简单、快速和高通量的优点，应是梅毒血清学诊断试验的首选方法。λ

蛋白印迹（WB）

首先将将梅毒螺旋体Nichols株菌体细胞用SDS破碎，再使用聚丙烯酰胺凝胶电泳将将梅毒螺旋体各种抗原成分分开形成不同区带，经电转印可将这些条带转移至硝酸纤维素膜上作为抗原，最后采用酶标技术检测病人血清中的相应特异抗体。梅毒螺旋体特异区带如TpN1 5,TpN17,TpN45λ和TpN47至少两条以上出现阳性时即可判断为阳性。本方法要优于FTA-ABS；其对二期梅毒、早期梅毒、神经梅毒具有100%的阳性诊断率，对使用RPR、FTA-A BS和TPHA等试验出现的假阳性血清标本，用本法均为阴性。本法使用商品试剂，则操作简单，易于掌握且无需特殊设备和试验条件，是一种很好的确认试验。