乳酸菌的筛选与鉴定综述
食品中乳酸细菌的筛选和鉴定
食品中乳酸细菌的筛选和鉴定食品是人类生活中不可或缺的一部分，而乳酸细菌则是食品产业中的重要组成部分。
乳酸细菌在食品加工过程中起着关键的作用，例如发酵乳制品、面包、啤酒等。
因此，筛选和鉴定食品中的乳酸细菌对于食品安全和质量的保障具有重要意义。
首先，筛选食品中的乳酸细菌应该从源头开始。
当我们选择原料时，应注意选择新鲜且有机的食材。
乳酸细菌通常存在于新鲜的奶制品、蔬菜和水果中。
因此，在生产过程中应该选择高质量的原料，以确保食品中含有丰富的乳酸细菌。
其次，对食品中的乳酸细菌进行鉴定也是非常重要的。
目前常用的方法有传统培养方法和分子生物学方法。
传统培养方法是通过将食品样品接种到乳酸菌富集培养基中，然后根据菌落形态和生理特性进行鉴定。
虽然该方法简单易行，但对于少数难以培养的乳酸细菌则无法准确鉴定。
分子生物学方法是近年来迅速发展的一种鉴定乳酸细菌的新方法。
这种方法基于对乳酸细菌基因组的分析，通过PCR、蛋白质电泳等技术手段来确定乳酸菌的种类和数量。
分子生物学方法具有快速、准确和高通量的特点，可以帮助我们更好地了解食品中乳酸细菌的情况。
此外，筛选合适的乳酸菌应具备以下特点。
首先，应具备较强的耐受性，能够在食品加工过程中存活和繁殖。
其次，应具备较好的产酸能力，确保食品发酵的质量和风味。
最后，应能够对食品中的有害细菌起到一定的抑制作用，从而保证食品的安全性。
乳酸细菌在食品发酵过程中起到的作用不仅仅是改善风味，还具有多种益处。
首先，乳酸细菌能够制造出多种有益物质，例如乳酸、对乳酸菌独有的多种抗菌物质等。
这些物质具有抗菌、抗氧化和免疫调节等作用，对人体健康有益。
其次，乳酸细菌可以帮助消化，改善肠道菌群的平衡，增加人体对营养的吸收。
此外，乳酸细菌还可以帮助降低肠道内有害菌的数量，提高人体的免疫力。
然而，在乳酸细菌的选择过程中也存在一些问题和挑战。
首先，不同种类的食品需要不同的菌株，因此我们需要根据具体产品的特点来选择适合的乳酸菌。
乳酸菌检测方法_综述_
中图分类号 :R15 ; TS20116 文献标识码 : E 文章编号 :1004 - 8456 (2002) 01 - 0047 - 07
乳酸菌检测方法 (综述)
张一凡 冉 陆 罗雪云 (卫生部食品卫生监督检验所 北京 100021)
乳酸菌是一类能利用可发酵糖产生大量乳酸的 细菌总称 ,这个名称就细菌分类学而言是一非正式 、 非规范的名称 。目前在自然界已发现的这类菌在细 菌分类学上划分出至少 23 个属 ,涉及到的有关属则 更多 ,包括乳杆菌属 、双歧杆菌属 、链球菌属 、肠球菌 属等 。而相当多的乳酸菌对人 、畜的健康起着有益 的作用 。近年来 ,随着微生态学研究的不断发展 ,越 来越多的实验证明有益细菌对人体健康的重要作 用 ,微生态制剂也因此应运而生 。目前我国微生态 制剂利用的益生菌近 10 种 ,其中除了乳杆菌和乳酸 链球菌有国家的标准检验方法外 ,大部分菌种均无 统一的标准方法 ,难于对该类产品进行质量控制 ,保 证其安全性 。故急需建立规范的标准检验方法 ,以 便对微生态制剂进行监督管理 ,保障其功能 、安全性 及质量 ,以保护消费者的健康和利益 。本文即对目 前国内外用于乳酸菌检测的方法做一综述 。
离子色谱法和气相色谱法从分析厌氧菌的代谢 产物结果来看 ,在总体上无明显差异 ,但离子色谱法 具有以下优点 :[4]
《乳酸菌筛选及其对苜蓿青贮发酵性能的影响》范文
《乳酸菌筛选及其对苜蓿青贮发酵性能的影响》篇一一、引言随着现代畜牧业的发展，青贮饲料在畜牧业中的地位日益重要。
苜蓿作为青贮饲料的主要原料之一，其发酵过程对饲料的质量和营养价值具有重要影响。
乳酸菌作为青贮发酵过程中的主要微生物，其种类和数量直接影响着发酵的效果。
因此，筛选出优良的乳酸菌株并研究其对苜蓿青贮发酵性能的影响，对于提高青贮饲料的质量和营养价值具有重要意义。
二、乳酸菌的筛选1. 筛选方法乳酸菌的筛选主要通过从自然环境中的样品中分离、纯化、鉴定等步骤进行。
首先，从苜蓿青贮样品中采集乳酸菌，经过一系列的分离纯化操作，得到纯菌株。
然后，通过生理生化试验和分子生物学技术对菌株进行鉴定，确定其种类和特性。
2. 筛选标准在筛选过程中，主要考虑乳酸菌的产酸能力、耐酸能力、生长速度等指标。
产酸能力强的乳酸菌能够快速降低青贮环境的pH 值，抑制其他有害微生物的生长；耐酸能力强的乳酸菌能够在低pH值环境下生存并继续发酵；生长速度快的乳酸菌能够更快地占领青贮环境，抑制其他杂菌的生长。
三、乳酸菌对苜蓿青贮发酵性能的影响1. 发酵过程中的变化添加优良乳酸菌的苜蓿青贮在发酵过程中，其pH值会迅速降低，乳酸含量增加，同时其他有害微生物的数量会减少。
这表明优良乳酸菌能够有效地促进苜蓿青贮的发酵过程，提高其发酵效果。
2. 对饲料质量的影响优良乳酸菌的添加可以显著提高苜蓿青贮的饲用价值。
乳酸菌的发酵作用能够降低饲料中的抗营养因素，提高饲料中蛋白质的消化率；同时，乳酸菌还能够产生一些有益的物质，如维生素等，进一步提高了饲料的质量和营养价值。
四、结论通过对乳酸菌的筛选及其对苜蓿青贮发酵性能的影响的研究，我们可以得出以下结论：1. 筛选出产酸能力强、耐酸能力强、生长速度快的乳酸菌株对于提高苜蓿青贮的发酵效果具有重要意义。
2. 优良乳酸菌的添加可以显著改善苜蓿青贮的发酵过程，降低pH值，增加乳酸含量，减少有害微生物的数量。
3. 优良乳酸菌的添加可以提高苜蓿青贮的饲用价值，降低抗营养因素，提高蛋白质消化率，产生有益物质，如维生素等。
乳酸菌的分子鉴定及其发酵生产研究
乳酸菌的分子鉴定及其发酵生产研究乳酸菌是一类重要的微生物，它们可以对人体健康和食品质量有着积极的影响。
因此，乳酸菌的分子鉴定和发酵生产已成为当前生物技术领域的热点研究方向。
一、乳酸菌的分子鉴定1. 基于16S rRNA序列的分子鉴定16S rRNA序列是一种分子生物学技术，可用于确定细菌的分类位置。
通过对乳酸菌的16S rRNA序列进行分析，可以对其进行分子鉴定。
例如，可以通过利用PCR技术来扩增16S rRNA序列，并进行DNA测序，然后使用一些专门的软件来比对数据库中已有的乳酸菌序列，以此确定乳酸菌所属的种属和亚种属。
2. 基于质谱谱图的分子鉴定质谱谱图技术可以分析乳酸菌代谢产物的质谱图谱，并根据代谢物的组成、分子量和分子结构来鉴定乳酸菌的种属和亚种属。
例如，可以通过利用质谱仪来对乳酸菌发酵代谢产物的质谱谱图进行解析，然后将谱图与数据库进行比对，以此确定乳酸菌所属的种属和亚种属。
二、乳酸菌的发酵生产乳酸菌的发酵生产是一种很常见的生产方式。
下面我们将从乳酸菌的筛选及培养、选择发酵介质以及乳酸菌株种类等方面来阐述乳酸菌的发酵生产。
1. 乳酸菌的筛选及培养乳酸菌的筛选通常要经过多个步骤。
首先，需要从环境中分离出乳酸菌，然后进行预筛选，以去除不适宜生产的菌株。
接着，根据具体需求来确定乳酸菌的最终筛选条件，并进行强筛。
例如，可以通过对菌株进行分子鉴定，并对其菌株活力、乳酸生产能力以及耐受性等方面进行细致研究，以此筛选出适合生产的菌株。
2. 选择发酵介质乳酸菌的发酵过程需要选择适当的发酵介质。
通常使用的发酵介质包括糖类、蛋白质、乳类及酵母提取物等。
具体来说，糖类可以提供乳酸菌的生长和代谢所需的碳源，乳类则可以作为乳酸菌的营养来源。
对于蛋白质，可以促进乳酸菌生长并提高其产乳酸的能力。
3. 乳酸菌株种类乳酸菌株种类的选择对乳酸发酵生产有着至关重要的影响。
目前，市场上常见的乳酸菌株有Lactobacillus、Bifidobacterium和Streptococcus等。
食品科学与工程中酸奶乳酸菌菌株的筛选与鉴定研究
食品科学与工程中酸奶乳酸菌菌株的筛选与鉴定研究酸奶作为一种常见的乳制品，深受消费者喜爱。
它不仅富含营养，还含有丰富的活性乳酸菌，对人体有益。
因此，在食品科学与工程领域，关于酸奶乳酸菌菌株的筛选与鉴定研究备受关注。
乳酸菌是一类在自然界中广泛存在的细菌，常常被运用在食品发酵中。
乳酸菌能够将糖转化为乳酸，这也是酸奶酸味的形成原因。
除了产生乳酸外，乳酸菌还能分解一些难以消化的食物成分，帮助人体更好地吸收营养。
因此，在选择适宜的乳酸菌菌株时，除了考虑其产酸能力外，还需要关注其产生其他功能物质的能力。
在酸奶乳酸菌的筛选过程中，最常用的方法是通过培养基和生理生化特性进行初步分离和鉴定。
乳酸菌菌株需要在特定培养基中进行培养，然后观察其菌落特征和生长情况，以初步筛选出优良的菌株。
此外，对于产乳酸和其他活性物质能力较强的菌株，还可以通过进一步的生化检测确认其身份。
除了传统的培养基方法外，近年来，基于分子生物学的酸奶乳酸菌菌株筛选与鉴定方法也逐渐兴起。
通过提取菌株DNA，利用PCR技术检测特定基因片段，从而确定乳酸菌的种属和亚种。
这种方法具有时间短、灵敏度高的特点，节省了大量的实验操作时间，并且可避免传统的培养方法中菌株纯度不足或者污染的情况。
在乳酸菌菌株的鉴定方面，除了培养和分子生物学方法外，还可以通过生理学、生化学和遗传学的方法进行。
通过分析乳酸菌的氨基酸代谢途径、蛋白质结构以及基因组序列，可以进一步确定菌株的性质和特性。
这些信息不仅可以用于酸奶生产中菌株的优化选择，还可用于乳制品行业的质量控制和产品改良。
乳酸菌菌株的筛选与鉴定不仅在酸奶生产中有重要意义，在其他食品领域也具有广泛的应用。
例如，乳酸菌在面包、蔬菜发酵和调味品制作等过程中都扮演着重要角色。
因此，食品科学与工程领域的研究者们不断改良乳酸菌筛选与鉴定的方法，以更好地发掘和利用乳酸菌的潜力。
总之，乳酸菌作为酸奶中不可或缺的元素，在食品科学与工程领域的筛选与鉴定研究中扮演着重要的角色。
乳酸菌菌种的分离筛选原理
乳酸菌菌种的分离筛选原理乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的益生菌，广泛应用于食品、饲料、医药等领域。
乳酸菌菌种的分离筛选是乳酸菌应用研究中的重要一环，其目的是从大量的混合菌群中筛选出具有优良特性的菌株。
乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括以下几个方面：1. 选择合适的培养基：乳酸菌菌种对营养要求较高，因此选择适宜的培养基是分离筛选的首要步骤。
常用的培养基有MRS培养基、DC培养基等，它们含有适宜乳酸菌生长的营养成分，能提供所需能量和营养物质。
2. 适宜的培养条件：乳酸菌对培养环境的温度、pH、氧气和二氧化碳等条件有一定要求。
通常情况下，乳酸菌分离筛选需要在适宜的温度（一般为30-40）下进行，pH值保持在4.5-7.0之间，氧气和二氧化碳含量适中。
3. 分离方法：乳酸菌菌种的分离常采用传统的分离培养技术，如层析法、稀释平板法、摇瓶培养法等。
其中，层析法是一种常用的快速分离方法，通过将混合菌群在筛选培养基上涂抹或刺激，使不同菌株在筛选培养基上形成分离的菌落。
4. 鉴定鉴别：乳酸菌菌种的筛选与鉴定是不可分割的一步，只有确定菌株的种属和特性才能真正确认其乳酸菌的菌种类型。
目前，常用的鉴定方法包括形态学观察、生理和生化特性检测、分子生物学方法（如PCR技术、16S rDNA序列分析）等。
在乳酸菌菌种的分离筛选过程中，还需要注意以下几个问题：1. 选择样品：样品的选择对于乳酸菌菌种的分离筛选至关重要。
通常情况下，从乳制品、肠道、土壤等环境中寻找潜在的乳酸菌菌种，可以提高分离到优良菌株的几率。
2. 优化培养条件：对于特殊的乳酸菌菌种，可能需要优化培养条件，如调整温度、添加特定的营养成分等，以促进其生长和繁殖。
3. 评价筛选结果：乳酸菌菌种的分离筛选结果需要综合考虑其特性和应用价值。
如菌株的酸奶生产能力、耐酸碱能力、抗菌能力、抗氧化能力等。
总结起来，乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括选择合适的培养基和培养条件、采用适当的分离方法和鉴定鉴别技术。
食品中乳酸菌的筛选与活性鉴定
食品中乳酸菌的筛选与活性鉴定乳酸菌是一类对人体健康具有益处的细菌，在许多食物中都可以找到它们的踪迹。
从酸奶到发酵食品，乳酸菌都发挥着重要的作用。
然而，如何筛选出具有较高活性的乳酸菌，并对其进行鉴定，这是一个令人感兴趣的话题。
首先，我们需要选择适当的食品样本进行筛选。
常见的食品包括酸奶、奶酪、纳豆等发酵产品。
这些食品中含有大量的乳酸菌，因此是我们进行筛选的理想选择。
此外，还可以考虑其他一些食物，如蔬菜和肉类，它们也可能含有乳酸菌。
接下来，我们需要从样本中分离出乳酸菌。
这可以通过培养基选用和分离培养来实现。
培养基的选用非常重要，它应提供乳酸菌所需要的营养物质。
我们可以选择常用的乳酸菌培养基，如MRS培养基。
通过将样品接种于MRS培养基中，我们可以让乳酸菌生长并形成可见的菌落。
然后，通过将这些菌落转移至其他培养基中，可以进行单菌落分离，确保我们获得的是纯种的乳酸菌菌株。
鉴定乳酸菌的活性也是我们的重点之一。
活性乳酸菌可以产生乳酸、酶和抗菌物质，这些物质对人体健康有益。
因此，我们想要筛选出活性较高的乳酸菌菌株。
常见的活性鉴定方法包括测定乳酸产量、酶活性和抗菌活性。
乳酸产量是乳酸菌活性的重要指标之一。
我们可以通过高效液相色谱法（HPLC）来测定乳酸的含量。
通过将培养基或发酵物转移到HPLC系统中，我们可以分析出乳酸的浓度。
通过与不同菌株之间的比较，我们可以确定哪些菌株产乳酸的能力更强。
酶活性是另一个衡量乳酸菌活性的重要指标。
乳酸菌常常能够产生多种酶，如蛋白酶和纤维素酶。
我们可以使用相应的酶活性试剂盒来检测其酶活性。
高酶活性的乳酸菌意味着它们能够更好地消化蛋白质和纤维素，从而提高食物的可消化性和营养吸收能力。
除了乳酸和酶活性外，抗菌活性也是评估乳酸菌活性的重要指标之一。
乳酸菌可以产生抗菌物质，对抗病原菌的侵袭。
我们可以通过抗菌活性试验来评估乳酸菌的抗菌能力。
将不同乳酸菌菌株与病原菌一起接种在琼脂平板上，观察是否形成抑制区域。
《抗真菌乳酸菌的抗菌成分分离鉴定及在奶酪保鲜中的应用》范文
《抗真菌乳酸菌的抗菌成分分离鉴定及在奶酪保鲜中的应用》篇一一、引言近年来，食品安全和质量控制一直是国内外食品行业的重要关注点。
乳酸菌因其在食物保鲜及食品生物防护上的潜力而被广泛研究。
尤其在奶酪等发酵食品中，其作为防腐剂的天然替代品，具有显著的优势。
本文旨在研究抗真菌乳酸菌的抗菌成分的分离与鉴定，并探讨其在奶酪保鲜中的应用。
二、材料与方法1. 材料本实验所需材料包括：不同种类的乳酸菌、奶酪样品、培养基等。
2. 方法（1）乳酸菌的分离与筛选：从奶酪样品中分离出乳酸菌，筛选出具有抗真菌特性的菌株。
（2）抗菌成分的提取与分离：通过不同的提取方法，如溶剂萃取、超声波辅助提取等，对筛选出的乳酸菌进行抗菌成分的提取与分离。
（3）抗菌成分的鉴定：采用质谱、光谱等分析方法对提取的抗菌成分进行结构鉴定。
（4）在奶酪保鲜中的应用：通过添加分离出的抗菌成分，研究其对奶酪保鲜效果的影响。
三、实验结果与分析1. 乳酸菌的分离与筛选结果通过不同的方法，我们从奶酪样品中成功分离出多种乳酸菌。
经过筛选，我们得到了一株具有明显抗真菌特性的乳酸菌，命名为Lactobacillus sp. A。
2. 抗菌成分的提取与分离结果通过溶剂萃取和超声波辅助提取等方法，我们成功从Lactobacillus sp. A中提取出抗菌成分。
经过分析，该成分主要由多种有机酸和多肽组成。
3. 抗菌成分的鉴定结果通过质谱和光谱分析，我们确定了该抗菌成分的主要成分为多种有机酸和多肽类物质。
这些物质在之前的文献中已有报道，具有明显的抗真菌活性。
4. 在奶酪保鲜中的应用效果分析将该抗菌成分添加到奶酪中，我们发现其对奶酪的保鲜效果有显著影响。
添加了该抗菌成分的奶酪在保存过程中，其微生物生长得到了有效控制，延长了奶酪的保质期。
同时，该抗菌成分并未对奶酪的风味和口感产生明显影响。
四、讨论本研究成功地从奶酪中分离出具有抗真菌特性的乳酸菌，并对其抗菌成分进行了提取与鉴定。
产高效细菌素乳酸菌的筛选及鉴定
产高效细菌素乳酸菌地筛选及鉴定摘要：本研究旨在从自然生境中筛选产高效抑菌蛋白地乳酸菌, 并进行抑菌活性分析和菌种鉴定. 通过牛津杯法抑菌实验对样本中乳酸菌进行初筛, 然后对发酵液进行排除酸、过氧化氢干扰和蛋白酶处理, 进一步复筛出产抑菌蛋白地乳酸菌. 通过形态学、生理生化、糖发酵<API ）和16SrDNA基因序列同源性分析进行菌种鉴定•结果表明：本研究成功地筛选出2株对金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌等致病菌有高效抑制作用地乳酸菌<抑菌圈直径均>20 mm）, 证明其抑菌物质为蛋白类物质并推测为细菌素, 菌种鉴定为植物乳杆菌和粪肠球菌• 本实验对高效细菌素—乳酸菌地研究为食品及饲料行业中乳酸菌素地开发和应用提供参考•关键词：乳酸菌；细菌素；筛选鉴定；抑菌活性畜牧生产中抗生素滥用、病源微生物耐药性等问题严重威胁着食品安全及人类健康, 越来越多地研究致力于寻找新型安全有效地绿色饲料添加剂作为理想地抗生素替代品• 细菌素是细菌在生长过程中通过核糖体途径合成并分泌到环境中地具有抑菌作用地蛋白或多肽物质, 具有高效、无毒、耐高温、无残留、无抗药性等优点[1]•目前国内外对细菌素地研究主要集中在芽孢杆菌和乳酸菌上, 乳酸菌是一类可发酵碳水化合物、产生大量乳酸<>50%）地革兰氏阳性球菌或杆菌地统称[2]•饲料中添加乳酸菌制剂可以促进动物胃肠道微生态平衡, 改善动物健康[3]我国《饲料添加剂品种目录<2018）》中允许添加地29 种微生物菌种中有9 种属于乳酸菌属• 添加植物乳杆菌地发酵饲料中粗蛋白、粗脂肪含量明显上升, 提高饲料利用率[4]•Riboulet 等[5]研究表明, 乳杆菌素Abp118 对小鼠和猪地肠道沙门氏菌等致病菌有显著地抑制作用并影响动物机体免疫力• 因此对乳酸菌细菌素抑菌能力地挖掘成为开发绿色饲料添加剂地重点• 本实验旨在筛选出对病原菌有高效、广谱抑菌活性地产细菌素乳酸菌菌株, 并对其进行菌株鉴定, 为天然安全地饲料添加剂地开发提供理论依据.1材料与方法1.1材料与试剂生境材料<酸菜、生牛奶、青贮料、土壤等）；指示菌为单增李斯特菌<L.monocytogenes cvcc1599 ）；金黄色葡萄球菌<S.aureus cvcc26003 ）；藤黄八叠微球菌<S.lutea cmcc28001 ）；大肠杆菌<E.coil cvcc245 ）；沙门氏菌<S.typhimuriumcvcc541 ）；培养基<MRS BPY LB等）,药品采用国产分析纯；细菌基因组DNA提取试剂盒< 北京天根生化有限公司）；Analytic Products INCAPI50CH 试剂盒<法国梅里埃）.16SrDNA地PCR T增引物27F: 5' -AGAGTTTGATCCTGG CTCAG3'、1525R: 5' -AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-1.2产抑菌物质乳酸菌地初筛乳酸菌地分离与培养:将收集地样本悬浮于无菌生理盐水中按梯度稀释,涂布于含溴甲酚紫指示剂<0.01%）地MRS琼脂平板上，37C培养箱培养48 h,挑选培养基变黄地菌落划线纯化, 选取镜检革兰氏染色阳性、无芽孢地菌株于MRS夜体培养基中37C培养12 h作为种子液.种子液按2滋种于新地MRS夜体培养基37C静置培养36 h 作为发酵液.以8 000 r/min 离心10 min, 取上清液备用.指示菌地制备:选取地4株指示菌中大肠杆菌用LB 培养基, 其余用BPY培养基，种子液按2%接种于液体培养基37C、150 r/min 摇床过夜< 浓度约达109个/mL）,稀释到107CFU/mL备用.菌株抑菌实验初筛:采用牛津杯法. 取备用指示菌<107CFU/mL 150卩L涂布于BPY琼脂平板上，放置3个牛津杯/板，常温干燥30 min.取菌株发酵上清200卩L 加入牛津杯内, 以空白培养基为对照,3 个重复/样, 置于37C培养24 h,测定抑菌圈直径d<mm .选取抑菌效果较好地菌株进行复筛，用甘油-20C保种备用.1.3产抑菌蛋白乳酸菌地复筛同上制作初筛菌株地发酵液和指示菌液. 检测各菌株发酵上清液地pH 值,并对发酵上清进行排酸、过氧化氢酶和蛋白酶处理：①上清原液；②用NaOH调节上清至pH 5.5 :③调节上清至pH7.2并用过氧化氢酶、蛋白酶<1mg/mL）处理，37C温育2 h后调回pH至5.5[6];④对照：用乳酸、乙酸调节pH为4.0地培养基.牛津杯法测抑菌活性• 选用单增李斯特菌、藤黄八叠微球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌作为指示菌, 牛津杯法测定各菌株发酵上清抑菌活性, 分析各菌株抑菌效果并筛选出含有高效抑菌蛋白地乳酸菌作为目标菌株.1.4菌株地鉴定形态学鉴定：将目标菌株划线于MRS琼脂平板，37C培养48 h,观察菌落形态，挑取单菌落进行革兰氏染色镜检.生理生化鉴定：对菌株进行接触酶、硝酸还原、产氨、水解、H2S、VP吲哚、明胶液化等实验＜参照《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》）[13];对菌株进行49种糖发酵实验＜API50CH试剂盒）•将实验结果参照第八版《伯杰氏细菌鉴定手册》、《常见细菌系统鉴定手册》）并与API 数据库进行比对.16S rDNA 基因序列鉴定：利用细菌基因组提取试剂盒提取目标菌株地基因组DNA利用乳酸菌通用引物进行PCR T增并测序•通用引物序列：27F: 5' -AGAGTTTGATCC TGGCTCAG- 1 525R: 5' -AGAAAGG AGGTGATCCAGCC-;反应体系50 卩L: DNA模板1 卩L, 2X Taq PCR Mix 25 卩L,27F 2 卩L,1525R 2 卩L,双蒸水20卩L;扩增条件为：94C预变性5 min, 94C变性30 s, 55C退火30 s, 72C延伸90 s,共30个循环，最后72C延伸10 min.引物合成及PCR T物测序由上海英骏生物技术有限公司完成.运用NCBI上地BLAST在线软件将测序结果与GenBank数据库进行同源性比较；利用Clustalx 2.0.11 和MEGA5.10 软件构建乳酸菌系统发育树.1.5统计分析采用Excel 对实验数据初步整理, 并用SPSS Statistics17.0 软件中One-Way ANOVA进行进行方差分析，以P v 0.05为显著水平,P v 0.01为差异极显著，差异显著性分析应用Duncan' s多重比较.结果均以平均值±标准差表示.2结果2.1产抑菌物质乳酸菌地初筛从样本中分离出革兰氏染色阳性、无芽孢地乳酸菌72 株;再通过牛津杯法抑菌实验, 以金黄色葡萄球菌为指示菌筛选出有抑菌效果地菌株10株＜见表1）,选取其中抑菌圈直径大于16 mm地6株菌＜N13 EN3 CN4 SN4 SN5 SC5）作为后续复筛菌株.此外，发现牛津杯中发酵上清地加样量大于150卩L时抑菌效果比较明显，后续实验选用此指标.表1菌株对SA地抑菌圈直径mm菌株pH 发酵液上清/ L50 100 150 200N13 4.70 + ++ +++ +++EN3 4.91 - + ++ +++CN4 4.76 - + ++ +++SN4 4.17 + +++ +++ ++++SN5 4.15 + +++ +++ ++++AS1 5.07 - + ++ ++SC4 4.96 - + ++ ++SC5 4.76 + + ++ +++W35 4.95 + + ++ ++CW6 4.93 - + ++ ++注：抑菌圈直径"-”：＜8mm ＜无抑菌活性)；“+”：8~12 mm;牛津杯直“ ++ ”: 12~16 mm “ +++ ” : 16~20 mm “ ++++ ” : ＞20b5E2RGbCAP径为8 mm2.2产抑菌蛋白乳酸菌地复筛对初筛得到地6 菌株，发酵上清液经过排酸、H2O2酶和蛋白酶处理后与上清原液相比，抑菌活性结果见表2. 各菌株发酵液pH较低＜3.90 ＜pH ＜4.72 ),其中SN4、SN5地产酸能力最强＜pH达3.9 ).排酸处理后N13和SC5抑菌活性消失,CN4、SN4 SN5抑菌活性与发酵上清相比有所降低＜如图1),但pH 4.0 地乳酸、乙酸对照无抑菌活性；H2O2酶处理后抑菌活性无明显差异；蛋白酶K和胰蛋白酶处理后抑菌活性均消失. 此外, 在对多种指示菌地抑菌实验中＜表3), 各菌株发酵上清液对G+有较好地抑菌活性而对G无抑菌活性；其中CN4、SN4 SN5对李斯特菌有显著地抑菌活性＜抑菌圈＞20 mm；P<0.01 ) , 选为产高效抑菌蛋白地目标菌株.2.3 菌株地鉴定2.3.1 形态学鉴定如图2 所示, 筛选地目标菌株CN4 SN4 SN5平板培养48 h后呈现直径约1~2 mm圆形突起、乳白色、不透明地光滑菌落；镜检下细菌CN4为单个球状,SN4、SN5为短杆状或链状，均无芽孢、无鞭毛、无荚膜、革兰氏染色阳性.2.3.2生理生化鉴定参照第八版《伯杰氏细菌鉴定手册》和《常见细菌系统鉴定手册》[7]并运用bioMerieux73动物生产・Animal Production2018 年第49 卷第19 期注：A:乳酸菌SN4菌落形态,B和C为SN4 CN4革兰氏染色后细胞形态<x 100oil )图2 菌株地鉴定注：A: CN4 SN4 SN5对S.aureus地抑菌圈,B : SN4发酵液处理对L. monocytogenes 地抑菌圈,C ：SN4 发酵液处理对S.aureus 地抑菌圈图1 乳酸菌发酵液对指示菌地抑菌活性表3 目标菌株对不同指示菌地抑菌圈直径mm菌株S.aureusL.monocytogenesS.lutea E.coilS.typhimuriumN13 15.75±1.06bc17.50±0.71c18.50±0.71abEN3 14.25±0.35c16.25±0.35c17.50±0.35bcCN4 17.50±0.71b20.25±1.06b15.75 ±1.06cSN4 20.75±1.06 a27.25 ±1.06a20.50 ±1.41aSN5 20.88±0.18 a27.50 ±0.71a20.25 ±0.35aSC5 14.75±1.06 c17.00 ±0.71c20.75 ±1.06aP 0 0.001 0.009 0 0注：同列数据肩标相邻小写字母表示差异显著＜P v 0.05 ),相间字母表示差异极显著＜P v 0.01 )apiweb 数据库对菌株24 、48 h API 发酵结果进行判读,结果鉴定CN4为副干酪乳杆菌＜鉴定度：ID为99.9%; T值为0.88 ); SN4 SN5同为植物乳杆菌＜鉴定度：ID为99.9%; T值为0.64 ).根据API50 CHL试剂盒使用手册，本鉴定所得ID大于99%,T值大于0.5均为极好地鉴定结果＜表4 和表5) .表4 菌株生理生化实验结果实验CN4 SN4 实验CN4 SN4H2O2酶- - H2S 产生- -厌氧生长+ + 硝酸盐还原- -V-P + + 吲哚- - 运动性- - 精氨酸双水解酶+ -产气- - 明胶液化- -产酸+ + 50 C生长--精氨酸产氨--15C生长+ -注：“+”表示阳性反应；“-”阴性反应•下表同2.3.3 16S rDNA 基因序列鉴定以菌株CN4、SN4、SN5地DNA为模板，16S rDNA通用引物进行PCR扩增后得到约1 500 bp地特异性扩增产物.PCR产物测序结果于NCBI中使用BLAST软件在GenBank中进行同源性比对,SN4和SN5序列比对为同一菌株.与CN4SN4 <SN5) 同源性最高地菌株分别为EnterococcusfaecalisstrainKLDS4.0341<No.GQ337884.1 )和Lactobacillusp1EanqFDPwplantarum strain G8 <No.JX183220.1 ),同源性均为99%.因此目标菌株CN4鉴定为粪肠球菌、SN4和SN5为同株植物乳杆菌. 乳酸菌系统发育树见图3.3讨论3.1 产抑菌物质乳酸菌地初筛基于乳酸菌对营养物质地特殊要求, 选择性培养基MRS [8]常被用作乳酸菌地分离鉴定, 以溴甲酚紫作为酸碱指示剂可将样本中产酸地细菌初步分离出来. 王有湘等[9]研究发现，相同条件下，乳酸菌在MRS上地生长情况和数量好于TJA、M17 •抑菌实验中常用地方法包括牛津杯法、滤纸片法和浊度法. 本研究采用牛津杯法对金黄色葡萄球菌地抑菌表明，发酵上清加样量大于150卩L 时才有明显抑菌效果，应该是受到牛津杯限制或琼脂扩散等原因；各菌株地抑菌活性大小不等，抑菌圈直径小于14 mm时抑菌活性较低，因此选取抑菌圈大于16 mm地菌株作为复筛菌株•3.2产抑菌蛋白乳酸菌地复筛对于初筛得到地乳酸菌，为了排除抑菌效果中H2和酸性代谢产物<乳酸、乙酸)地影响，本研究对发酵上清进行了H2 2酶处理后抑菌活性无明显差异说明抑菌物质不是HO2；上清调节pH至弱酸性后抑菌活性有所降低,说明酸性物质对抑菌活性有影响；而pH 4.0 地乳酸表2菌株发酵上清不同处理对SA地抑菌圈直径mm菌株pH发酵液上清处理上清原液调酸pH5.5H202 酶蛋白酶K胰蛋白酶N13 4.63 14.67 ±1.53 - 14.17±1.26 - -EN3 4.60 13.83 ±1.44 10.50 ±2.18 13.50 ±0.87 - -CN4 4.72 16.5 0±1.32 15.17 ±1.04 16.83 ±1.26 - -SN4 3.90 20.17 ±0.76 18.50 ±0.50 19.83 ±1.04 - -SN5 3.93 19.33 ±1.76 17.83 ±0.76 19.67 ±1.26 - -SC5 4.47 14.50 ±0.87 - 13.83 ±0.76 - -乳酸液4.0 - ND ND ND ND乙酸液4.0 - ND ND ND ND注：“-”表示抑菌圈<8 mm或无抑菌活性，“DNf表示未测定742018年第49 卷第19 期Animal Production •动物生产管号代码底物成分CN4 SN4 管号代码底物成分CN4 SN4 0 - - - - 25 ESC 七叶灵柠檬酸铁+ +1GLY 甘露醇+ - 26 SAL 水杨苷+ +2ERY 赤藻糖醇- - 27 CEL D- 纤维二糖+ +3DARA D -阿拉伯糖- - 28 MAL D- 麦芽糖+ +4LARA L- 阿拉伯糖- + 29 LAC D- 乳糖+ +5LIB D- 核糖+ + 30 MEL D- 密二糖- +6DXYL D- 木糖- - 31 SAC D- 蔗糖+ +7LXYL L- 木糖- - 32 TRE D- 海藻糖+ +8ADO D-侧金盏花醇1 - - 33 INU 菊粉--9MDX 甲基- D 吡喃木糖苷- - 34 MLZ D- 松三糖+ -10GAL D-半乳糖+ + 35 RAF D- 棉子糖--11GLU D-葡萄糖+ + 36 AMD 淀粉--12FRU D-果糖+ + 37 GLYG 糖原--13MNE D-甘露糖+ + 38 XLT 木糖醇--14SBE L- 山梨糖- - 39 GEN D- 龙胆二糖+ +15RHA L-鼠李糖-+ 40 TUR D- 土伦糖--16DUL 卫茅醇- - 41 LYX D- 来苏糖- -17INO 肌醇- - 42 TAG D- 塔格糖+ +18MAN 甘露醇+ + 43 DFUC D- 岩藻糖- -19SOB 山梨醇+ - 44 LFUC L- 岩藻糖- -20MDM 甲基- D- 吡喃甘露糖苷- + 45 DARL D- 阿拉伯醇- -21MDG 甲基- D- 吡喃葡萄糖苷- - 46 LARL L- 阿拉伯醇- -22NAG N-乙酰葡萄糖胺+ + 47 GNT 葡萄糖酸钾+ +23AMY 苦杏仁苷+ + 48 2KG 2 酮基葡萄糖酸钾- -24ARB ARBULIN + + 49 5KG 5 酮基葡萄糖酸钾- - 表5菌株对API49种糖发酵实验结果和乙酸培养基对照无抑菌活性, 可推断抑菌活性不是由酸性物质所致，但较低地pH环境可以增强其他抑菌物质地抑菌活性.Zacharof 等[10]报道，乳酸菌素在pH<5环境下可以更好地吸附于靶细胞表面发挥抑菌活性；发酵上清经蛋白酶K 和胰蛋白酶处理后，抑菌活性完全消失，说明发酵液中地抑菌物质为蛋图3菌株CN4 SN4与同源性属种16S rDNA序列构建地系统发育树75动物生产・AnimalProduction2018 年第49 卷第19 期白类物质，可初步鉴定为细菌素[11]本研究地多种指示菌地抑菌实验中，6 株乳酸菌对G+<S.aureus 、L.monocytogenes 、S.lutea ）均有抑菌活性而对G菌<E.coil 、S.typhimurium ）无抑菌活性，其中对L.monocytogenes 地抑菌效果均显著高于S.aureus 和S.lutea. 很多研究表明大部分细菌素只对近源菌株有抑菌活性，也有些细菌素抑菌谱比较广.Zacharof 等[10]研究指出，大部分地乳酸菌素对G+细菌细胞壁有特异吸附性. 其原因可能与G+和G菌细胞壁地结构差异有关系，细菌素主要通过与靶细胞膜上地特异性受体相结合而发挥抑菌或杀菌作用. 对同一指示菌地抑菌效果来看SN4 SN5发酵上清地抑菌活性极显著大于其他菌株<d>20 mm),其次为CN4地抑菌活性显著大于其他菌株<d>17 mm);因此选取CN4 SN4 SN5为具有高效产抑菌蛋白地目标菌株•3.3菌株地鉴定传统地生理生化鉴定分析方法, 往往还不能准确鉴定出细菌地种属• 通过遗传特征地保守性序列<如16S rDNA)分析,能够判定细菌间亲缘关系地远近, 从而得到准确地鉴定结果[12] 由于菌属地关系复杂, 单一鉴定方法容易受到环境和自身变异地影响而不能准确鉴定其所属, 因此本实验通过形态学、生理生化、API 糖发酵鉴定和分子学鉴定最终确定菌株地种属• 形态学和生理生化鉴定结果表明,CN4为肠球菌属，SN4、SN5同为乳杆菌属；而API糖发酵实验中CN4鉴定为副干酪乳杆菌， SN4 SN5为植物乳杆菌，这与CN4在镜检下球状形态相冲突，进一步采用16S rDNA 基因序列鉴定，在GenBank进行BLAST比对后鉴定结果为CN4为粪肠球菌,SN4、SN5为同株植物乳杆菌，因此将CN4推断为变异地粪肠球菌菌种•CN4API 鉴定和形态学、16S rDNA基因序列地鉴定结果差异，说明单一地鉴定方法不足以准确地鉴定菌株地种属，鉴定结果地差异可能是由于菌株自身地变异而使得生理生化特征发生改变成为新地菌株，因此在细菌菌种地鉴定时要运用多种鉴定方法结合确定其种属• 4 结论本研究通过多种抑菌实验对样本中地乳酸菌进行初筛和复筛，得到2株产抑菌蛋白地目地菌株，其发酵液对G+<S.aureus、L.monocytogenes、S.lutea )致病菌均有较好地抑菌活性• 通过排除酸、过氧化氢地干扰以及蛋白酶处理实验可以确定抑菌物质为蛋白类活性物质细菌素. 对目标地菌株进行形态学、生理生化实验、API糖发酵实验和16S rDNA基因序列分析菌种鉴定并将其建立了系统发育树，鉴定结果为CN4为变异地粪肠球菌,SN4和SN5为同株植物乳杆菌. 本实验将进一步研究目标菌株地生物学特性、抑菌范围、细菌素地分离和纯化和鉴定等，为其应用于青贮饲料、微生物饲料和饲料添加剂方面提供参考和依据.参考文献：[1] 郭兴华. 益生乳酸细菌分子生物学及生物技术[M]. 北京: 学出版社， 2008.[2]Zaunm u Iler T, Eichert M, Richter H, et al. 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乳酸菌的筛选与鉴定
• 片球菌属（Pediococcus）
– 形态：细胞呈球形，成对或四联排列。 – 运动性：不运动。 – 营养类型：化能异养型。 – 需氧情况：兼性厌氧型。
乳酸菌的筛选
• 乳酸菌的分布
– 乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧菌，营 养类型为化能异养型。生长繁殖于厌氧或微好 氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体 如下：
• 与动物相关：乳汁、消化道、粪便等； • 与植物相关：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部 位等； • 自然水体； • 发酵食品：酸奶等。
• 筛选方法
– 利用碳酸钙溶解圈法筛选。
改良乳酸细菌培养基（MRS）
• • • • 蛋白胨10.0 g，牛肉膏8.0 g，酵母膏4.0 g， 柠檬酸二铵2.0 g，葡萄糖20.0 g， 吐温-60 1.0 mL，乙酸钠5.0 g， 磷酸氢二钾2.0 g，硫酸镁0.2 g，硫酸锰0.05 g， 琼脂20.0 g，碳酸钙30 g，
乳酸菌蛋白酶活性试验
• 在添加了15%脱脂乳或0.5%干酪素的MRS 固体培养基中, 分别滴入0.2ml一定稀释度 的试验菌液涂布均匀后,37℃ 恒温培养。当 牛乳中酪蛋白分解时, 菌落周围会出现透明 圈。
耐盐性试验
• 在添加质量分数为0%、2%、4%、6%、 8%食盐的MRS平板, 划线接种分离菌种， 在37 ℃ 培养24h后观察菌落生长情况。
分解脂肪的能力
• MRS固体培养基中添加15%的猪脂肪和甲 基红指示剂，稀释平板法接入供试菌后， 于37'C培养48 h，观察各种菌种有无红色 斑点出现。
• 乳杆菌属（Lactobacillus）
– 形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状， 一般成链状排列。 – 运动性：通常不运动，有的能够运动，具有周 生鞭毛。 – 营养类型：化能异养型。 – 需氧情况：微好氧型。
食品中乳酸菌的种类鉴定与筛选
食品中乳酸菌的种类鉴定与筛选导语：乳酸菌作为一类益生菌，对人体健康有着重要作用。
在食品行业中，乳酸菌也被广泛应用于酸奶、乳酸发酵食品等产品的制作中。
但是，不同种类的乳酸菌对人体的功效和食品质量的影响也存在差异。
因此，食品中乳酸菌的种类鉴定与筛选成为了食品工业中一项重要的研究内容。
一、乳酸菌的基本特征乳酸菌是一类革兰氏阳性、非芽孢形成的厌氧杆菌。
它具有利用碳源的多样性，能够在较宽的温度和pH范围内生长，敏感于多种抗生素，但对酸和胆盐具有很高的耐受性。
乳酸菌的独特特征在于其产酸能力和产酶能力，这对于发酵乳制品中的酸度调节、食品品质和保质期具有重要影响。
二、食品中乳酸菌的种类食品中常见的乳酸菌主要包括嗜酸乳杆菌、屎肠球菌、乳酸杆菌等。
这些乳酸菌在食品发酵过程中发挥着重要作用。
例如，嗜酸乳杆菌能够将乳糖转化为乳酸，起到酸度调节和抑制有害菌生长的作用；屎肠球菌则具有较强的抗菌活性，能够抑制肠道有害菌的生长；乳酸杆菌则被广泛应用于酸奶等乳制品的制作中，具有促进消化、增强免疫力等功效。
三、食品中乳酸菌的种类鉴定方法1.传统方法传统上，食品中乳酸菌的种类鉴定主要依靠生理和生化特性，包括菌株的外形特征、生长条件、产酸能力、抗菌活性等。
然而，这种方法存在着一定的主观性和局限性，无法准确鉴定不同种类的乳酸菌。
2.分子生物学方法近年来，随着分子生物学技术的发展，食品中乳酸菌的种类鉴定方法得到了极大的改进。
例如，通过PCR扩增和序列分析特定的基因片段（如16S rRNA）可以确定乳酸菌的亲缘关系和种类。
这种方法准确度高、重现性好，成为当前乳酸菌鉴定的主要手段之一。
四、食品中乳酸菌的筛选与应用1.筛选方法食品中乳酸菌的筛选一般基于其酸度产生和抗菌活性。
通过培养基和条件的优化，可以获得具有较高产酸能力和抗菌活性的乳酸菌菌株。
同时，利用基因工程技术也可以对乳酸菌进行基因编辑，增强其产酸能力和抗菌活性。
2.应用领域食品中乳酸菌的筛选和应用广泛存在于乳制品、调味品、肉制品等食品行业中。
产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定
产细菌素乳酸菌的筛选及鉴定摘要：采用琼脂平板扩散实验，从湖南传统发酵腊肉和香肠中筛选出3株对单核增生李斯特菌（Listeria monocytogene54002）具有明显抑制作用的乳酸菌，排除酸和过氧化氢的干扰后，仍具有抑菌活性，而用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理以后，其抑菌活性消失，因此确定该抑菌物质为蛋白质类物质，即细菌素。
三株菌所产细菌素具有一定热稳定性，在pH5～10之间仍具有一定的抑菌活性。
通过生理生化实验和16S rRNA基因序列分析对3株菌进行了鉴定。
PCR扩增得到1600bp左右的16S rRNA基因序列，将序列通过BLAST软件在NCBI网站上进行同源性对比，并通过MEGA5.0软件绘制系统发育树。
结果显示3株菌的16S rRNA序列和数据库中的屎肠球菌的序列同源性均在99%以上，这与生理生化实验初步鉴定结果一致。
关键词：细菌素，筛选，屎肠球菌Identification and screenging of bacteriocin-producing lactic acid bacteriaAbstract：Three lactic acid bacterium were isolated from Hunan traditonal fermented meats，which exhibitedstrong inhibitory activity against Listeria monocytogenes 54002. After eliminating the interference factors suchas the organic acids，hydrogen peroxides，the inhibitory activity still existed. But inhibitory activity was lost aftertreatment with trypsin and pepsin. Therefore，the inhibiotory substance could be classed as bacteriocin. Thebacteriocin exhibited good thermal stability and its active pH range from 5~10. The three bacteriocin-producingbacteria were identified on the base of physiological and biochemical characteristics and 16S rRNA genesequence. The sequence fragments around 1600bp 16S ribosomal RNA were amplified from total DNA of thethree isolated strains by PCR. The sequence was completed by the application of BLAST on the websites ofNCBI and phylogenetic tree was drawn with MEGA5.0. According to the high homology of 16S rRNA sequence，the three bacteriocin-producing bacteria was identified as Enterococcus faecium. Key words：bacteriocin；screening；Enterococcus faecium细菌素是由某些细菌产生的一类抑菌物质，是由细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类多肽类物质[1]。
乳酸菌的筛选与鉴定流程
乳酸菌的筛选与鉴定流程1.材料首先要确定目标，即所筛选的乳酸菌来自哪里，例如想要筛选一株果蔬发酵乳酸菌，那我们就得找一个产区或者其他地方自然发酵果蔬的样品。
1.1培养基查找相关文献，菌种生化鉴定用培养基建议查看文献：工业微生物实验手册MRS培养基：牛肉膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，吐温801g/L，葡萄糖50 g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，溴甲基酚紫0.4 g/L，酵母提取物5 g/L，琼脂15～20 g/L，pH 6.3～6.7，121 ℃湿热灭菌30 min。
（PS：若自己嫌麻烦，可买现成的MRS培养基）初筛培养基：在MRS分离培养基的基础上，添加0.5%碳酸钙，乳酸调至PH2.0.（加碳酸钙是为了能更好的挑出优势菌，乳酸调至PH2.0也是同样道理）如图：若是乳酸菌菌落旁会有清晰可见的透明圈，这是由于乳酸与碳酸钙反应了。
高盐复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上，添加10%氯化钠和0.5%碳酸钙。
高糖复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上将葡萄糖质量分数提高到30%，添加0.5%碳酸钙。
明胶培养基∶蛋白胨25 g/L，牛肉膏7.5 g/L，氯化钠5g/L，明胶100 g/L，pH7.0～7.2，121∶湿热灭菌15 min。
果蔬发酵培养基∶将苹果、胡萝卜、西瓜、西红柿等水果、蔬菜清洗去皮切分后分别榨汁除渣制得发酵果酱，然后按1∶1∶1∶1比例混合经巴氏灭菌后4 ∶冷藏。
按照混合果蔬汁33.3%、葡萄糖5%、蔗糖5%、氯化钙0.5%、磷酸氢二钠0.05%、磷酸二氢钠0.05%、硫酸镁0.03%、柠檬酸0.1%的配比配制，除果蔬和柠檬酸外其余成分于115 ∶湿热灭菌15 min。
2.方法2.1乳酸菌的分离筛选取产区自然发酵苹果原浆，用0.9%灭菌生理盐水进行10 倍梯度稀释后，吸取适宜稀释度溶液涂布至MRS分离培养基中，37 ∶恒温厌氧培养24h，挑取菌落黄色范围大并具有乳酸菌典型特征的单菌落，进行革兰氏染色观察菌体形态。
荔枝内生乳酸菌的筛选鉴定及发酵效果分析
荔枝内生乳酸菌的筛选鉴定及发酵效果分析内生乳酸菌是存在于荔枝果实内部的一类乳酸菌。
本文旨在对荔枝内生乳酸菌进行筛选鉴定，并分析其在发酵过程中的效果。
我们需要进行荔枝内生乳酸菌的筛选工作。
我们可通过以下步骤进行筛选：1.选取新鲜完整的荔枝果实，将果实表皮微生物清除。
2.将果实进行剖开，取出果肉。
3.将果肉加入生理盐水中进行搅拌均匀。
4.将搅拌均匀的果肉液分别接种于MRS培养基中。
5.将培养基进行培养，孵育温度一般控制在37°C，培养时间为24-48小时。
在筛选鉴定阶段，我们可以通过以下几个指标进行判断：1.菌落形态：观察菌落的颜色、大小和形态特征。
2.革兰染色：根据菌株的染色特性，判断其为革兰氏阳性或者革兰氏阴性。
3.乳酸产生能力：通过检测菌株在MRS培养基中产生的乳酸含量来评估乳酸产生能力。
4.抗酸能力：将菌株接种于低pH值的培养基中，观察其生长情况，评估其抗酸能力。
通过以上步骤，我们可以筛选出具有良好乳酸发酵能力的内生乳酸菌菌株。
接下来，我们可以对具有乳酸发酵能力的内生乳酸菌进行发酵实验，分析其发酵效果。
我们可以按以下步骤进行发酵实验：1.将筛选出的内生乳酸菌菌株接种到发酵培养基中，如MRS培养基。
2.控制发酵条件，如温度、时间等。
一般推荐在37°C下进行发酵，发酵时间根据需要可以选择24小时以上。
3.监测发酵过程中的pH值、乳酸产量和细菌数量的变化。
可以使用pH计检测pH值的变化，使用乳酸测定盒检测乳酸产量，使用菌落计数法检测细菌数量。
4.对发酵产物进行物理化学性质的分析，如颜色、味道和营养成分等。
通过以上步骤，我们可以了解到发酵过程中内生乳酸菌对荔枝果实中的乳酸产量、pH 值和菌群变化的影响。
在进一步分析发酵产物的物理化学性质后，可以评估内生乳酸菌的发酵效果。
荔枝内生乳酸菌的筛选鉴定是一个多步骤的过程，需要通过菌落形态、革兰染色、乳酸产生能力和抗酸能力等指标进行鉴定判断。
乳酸菌的提取和鉴定
酸奶中乳酸菌的筛选试验一、实验目的：熟悉从酸奶中分离和纯化乳酸菌的一般方法二、实验原理：市场销售的酸奶主要含乳酸菌，乳酸菌的主要作用是把牛奶中乳糖发酵成乳酸，此外酸奶中还含有其他球菌，利用它产酸等性质可以分离乳酸菌，分离培养基一般添加蛋白胨、酵母膏提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；柠檬酸铵、硫酸镁、硫酸锰、亚硫酸铁、吐温-80和乙酸钠为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌；琼脂是培养基的凝固剂。
、也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。
培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据。
.筛选方法：.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3 的培养基上产生CaCO3 溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。
其中培养基中加入CaCO3 的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH、更利于乳酸菌的生长和分离三、实验药品及仪器牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、乳糖、吐温-80、柠檬酸二铵、CaCO3 、K2HPO4 NaAc·3H2O、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、琼脂、结晶紫染色液、碘液、95%乙醇、石蜡、蒸馏水。
仪器：超净工作台、电子显微镜、接种环、恒温培养箱、接种环、培养皿、涂布环、高压锅、试管、微波炉、电子天平、离心机四培养基类型①改良MRS 培养基（乳酸菌分离培养基）：牛肉膏10g，蛋白胨10g，酵母膏5g，葡萄糖20g，吐温-80 1.0ml（它是一种很好的乳化剂和分散剂也就是说它的作用就是是培养基的营养成分更加的均匀就是对营养成分的再一次优化），K 2HPO4 2g，NaAc·3H2O 5g，柠檬酸二铵2g，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.25g，补蒸馏水至1000ml（固体培养基中加琼脂 1.5%-2%），调pH 至6.4±0.2，121℃高压灭菌15min②改良MC 培养基（乳酸菌选择培养基）：牛肉膏5g，蛋白胨5g，酵母膏5g，葡萄糖20g，乳糖20g，CaCO3 10g，琼脂20g，中性红0.05g（指示剂），最终pH6.5±0.2，补蒸馏水至1000ml，121℃高压灭菌15min。
发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选
发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选在我们的日常生活中，发酵食品是不可或缺的一部分。
无论是酸奶、酸菜还是啤酒，它们都是通过乳酸菌的发酵作用而产生的。
但是，我们知道乳酸菌不仅仅只有发酵的功能，它还具备着许多其他的益处。
因此，对于发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选，具有重要的意义。
功能鉴定是指通过实验和测试，了解乳酸菌在食品中的具体功能和效果。
首先，鉴定乳酸菌的抗菌能力是一项重要的功能。
通过抑制其他有害菌的生长，乳酸菌能够保持食品的卫生安全。
其次，乳酸菌的产酸能力也是功能鉴定的重点之一。
乳酸的产生会使食物呈现出酸性，这不仅有助于保持食品的新鲜度，还能抑制有害菌的生长。
最后，功能鉴定还包括乳酸菌的抗氧化能力、调节肠道菌群平衡等。
当我们完成了乳酸菌的功能鉴定后，接下来就需要进行筛选，以选出优质的乳酸菌菌种。
筛选的方法有很多种，其中最常用的是理化指标法和生物学指标法。
理化指标法主要是通过测定乳酸菌产酸、产气、耐酸和耐热等性能来筛选合适的菌株。
这种方法能够对乳酸菌的基本性质进行初步评估，并快速进行筛选。
而生物学指标法则是通过检测乳酸菌对人体健康的影响来筛选菌种。
例如，观察乳酸菌对肠道菌群平衡的调节效果、对免疫系统的影响等。
这些生物学指标可以更好地衡量乳酸菌菌种的功能和效果。
在功能鉴定和筛选乳酸菌菌种的过程中，我们也需要注意一些问题。
首先，在筛选乳酸菌时，要考虑到乳酸菌的耐受能力。
有一些菌株在强酸或高温条件下表现出较强的耐受能力，这对于发酵食品的质量和储存稳定性都是至关重要的。
其次，在饮食习惯和健康需求方面，也需要进行相应的筛选。
不同的人群对于乳酸菌的需求和反应可能有所不同，因此要选择适合的乳酸菌菌种。
发酵食品中乳酸菌的功能鉴定与筛选，是一个需要科学、精确和细致的过程。
它涉及到食品的质量和安全问题，也关系到人们的健康和生活质量。
因此，在进行功能鉴定和筛选时，我们需要综合考虑多个因素，如抗菌能力、产酸能力、抗氧化能力、调节肠道菌群平衡等。
酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定
酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定酸奶是一种由牛奶或者其他乳制品通过乳酸菌的发酵而制成的食品。
乳酸菌是酸奶发酵的关键因素，具有良好的保健效果和口感。
在酸奶制作过程中，乳酸菌菌株的筛选与鉴定是非常重要的步骤。
本文将介绍酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定的方法和意义。
首先，乳酸菌菌株的筛选是为了选择出适合酸奶发酵的优质菌株。
在酸奶制作中，菌株的特性包括产酸能力、耐受性、生长速度和抗菌特性等多方面。
通过筛选过程，可以找到产酸量高、生长快速、对不良菌有抑制作用的优质菌株。
这些菌株可以在酸奶制作中快速发酵，产生出优质的酸奶。
乳酸菌菌株的筛选方法有很多种，常见的包括传统筛选法、分子筛选法和生理筛选法等。
传统筛选法是指利用一系列的生理、生化和形态特性对菌株进行初步筛选。
通过这种方法，可以初步判断菌株是否具有发酵酸奶的潜力。
分子筛选法则是通过利用分子生物学技术对乳酸菌菌株进行检测，例如PCR扩增、16S rRNA测序等。
这些方法可以对菌株的遗传信息进行分析，从而确定其种属和亲缘关系。
生理筛选法则是根据菌株在不同环境条件下的生长情况，筛选出适应性强、产酸能力高的菌株。
乳酸菌菌株的鉴定是为了确保酸奶发酵过程中使用的菌株的纯度和品质。
鉴定的目的是确定菌株的种属和亚种，以及其在酸奶制作中的适用性。
鉴定的方法多样化，常用的有生化鉴定法、微生物学鉴定法和分子生物学鉴定法等。
生化鉴定法是利用菌株在特定培养基和条件下的代谢特征进行分析，通过菌株对不同物质的反应情况来确定其种属。
微生物学鉴定法则是通过观察菌株的细胞形态、培养特性等进行判断。
分子生物学鉴定法则是通过测序菌株的特定基因序列，例如16S rRNA，来确定菌株的种属和亲缘关系。
乳酸菌菌株的筛选与鉴定在酸奶发酵过程中具有重要的意义。
通过合适的筛选和鉴定方法，可以保证酸奶发酵的质量和稳定性。
优质的菌株不仅可以提高酸奶的口感和品质，还具有益生菌的功能，对消化系统和免疫系统有益。
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌分离鉴定及试验方法
乳酸菌的分离鉴定主要包括以下步骤：
1. 菌落筛选：根据菌落的颜色、大小、光泽度和透明程度，挑取含溶钙圈的单菌落。
2. 分离纯化：在MRS或Elliker固体培养基上反复划线分离，直到分离到纯的单一菌落。
3. 革兰氏染色：镜检观察菌体颜色、大小、形状和排列方式。
4. 过氧化氢酶实验：将革兰氏染色阳性、过氧化氢酶阴性的菌株初步认定为乳酸菌。
5. 保藏：用终浓度为25%甘油冻存管进行菌株的保藏，置于-80℃冰箱中保存备用。
乳酸菌的试验方法主要包括以下步骤：
1. 耐酸性优良菌株筛选试验：将分离纯化的乳酸菌和实验室耐酸性较好的WHH544接种到MRS液体培养基中，接种量为2%，于37℃培养箱中培养24小时，连续活化2代后，以6000r/min离心10分钟，弃去上清液，沉淀菌体用灭菌生理盐水洗涤、离心2次后，通过麦氏比浊法调整菌悬液浓度为×108CFU/mL。
2. 其他试验：根据具体研究需求进行相关试验，例如通过不同条件培养，观察菌株生长情况；或通过发酵实验，测定乳酸菌的产酸能力等。
以上内容仅供参考，建议查阅专业微生物学书籍或文献获取更全面和准确的信息。
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• 乳杆菌属（Lactobacillus）
– 形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状， 一般成链状排列。 – 运动性：通常不运动，有的能够运动，具有周 生鞭毛。 – 营养类型：化能异养型。 – 需氧情况：微好氧型。
• 链球菌属（Streptococcus）
– – – – 形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或链状排列。 运动性：一般不运动。 营养类型：化能异养型。 需氧情况：兼性厌氧型。
• 明串珠菌属（Leuconostoc）
– – – – 形态：细胞呈球形或豆状，成对或链状排列。 运动性：一般不运动。 营养类型：化能异养型。 需氧情况：兼性厌氧型。
• 双歧杆菌属（Bifidobacterium）
– 形态：细胞呈多样形态：Y形、V形、弯曲状、 勺形，典型形态为Y形。 – 运动性：不运动。 – 营养类型：化能异养型。 – 需氧情况：专性厌氧型。
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分解脂肪的能力
• MRS固体培养基中添加15%的猪脂肪和甲 基红指示剂，稀释平板法接入供试菌后， 于37'C培养48 h，观察各种菌种有无红色 斑点出现。
• 加自来水至1000 mL，调pH 6.2~6.4。
方法
• 1）称10 g 材料（水样取1ml逐级稀释）剪碎、研 磨，放入装有90 mL 无菌生理盐水的三角瓶中， 在旋涡振荡器上充分混合均匀，即为稀释度为10-1 的样品液，继续将样品稀释至10-5。 • 2）分别吸取10-3、10-4、10-5 样品稀释液0.2 mL 涂布在MRS 琼脂培养基上。置于37 ℃培养24 h。 • 3）挑取有透明圈的菌落，进行革兰氏染色。将革 兰氏阳性菌在MRS 琼脂平板上划线，于37 ℃培养 24 h。重复以上操作，直至得到纯菌落。 • 4）培养获得的乳酸菌，通过形态分析对菌种进行 鉴定。
• 与动物相关：乳汁、消化道、粪便等； • 与植物相关：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部 位等； • 自然水体； • 发酵食品：酸奶等。
• 筛选方法
– 利用碳酸钙溶解圈法筛选。
改良乳酸细菌培养基（MRS）
• • • • 蛋白胨10.0 g，牛肉膏8.0 g，酵母膏4.0 g， 柠檬酸二铵2.0 g，葡萄糖20.0 g， 吐温-60 1.0 mL，乙酸钠5.0 g， 磷酸氢二钾2.0 g，硫酸镁0.2 g，硫酸锰0.05 g， 琼脂20.0 g，碳酸钙30 g，
乳酸菌的筛选与鉴定
4-5人一组 共3组 150ml 无菌水 200ml 培养基 9个平板 1ml移液管 若干支 10ml移液管若干支 试管若干支 灭菌：药勺、剪刀、4个小烧杯 材料：火腿、文山湖水样、植物叶片、花朵、果实等
乳酸菌简介
• 乳酸菌的分类
– 乳酸菌泛指能发酵糖生成乳酸的细菌，分布非常广泛， 发酵食品、植物、动物、自然水体中均有分布。大致包 括下列属：乳杆菌属（Lactobacillus）、链球菌属 （Streptococcus）、明串珠菌属（Leuconostoc）、双歧 杆菌属（Bifidobacterium）、片球菌属（Pediococcus） 等。 – 多数乳酸菌为有益菌，在保健品的生产、发酵工业以及 农业生产中应用广泛。
乳酸菌蛋白酶活性试验
• 在添加了15%脱脂乳或0.5%干酪素的MRS 固体培养基中, 分别滴入0.2ml一定稀释度 的试验菌液涂布均匀后,37℃ 恒温培养。当 牛乳中酪蛋白分解时, 菌落周围会出现透明 圈。
耐盐性试验
• 在添加质量分数为0%、2%、4%、6%、 8%食盐的MRS平板, 划线接种分离菌种， 在37 ℃ 培养24h后观察菌落生长情况。
• 片球菌属（Pediococcus）
– 形态：细胞呈球形，成对或四联排列。 – 运动性：不运动。 – 营养类型：化能异养型。 – 需氧情况：兼性厌氧型。
乳酸菌的筛选
• 乳酸菌的分布
– 乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧菌，营 养类型为化能异养型。生长繁殖于厌氧或微好 氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体 如下：