鼻咽癌细胞株CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的亚致死性损伤修复速度测定

鼻咽癌细胞株CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的亚致死

性损伤修复速度测定

王雯珺n;郑小康;刘佳宾;袁亚维;陈龙华;孙恒文

【摘要】目的测定CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的亚致死性损伤修复速度参数.半修复时间(repair half-time,T1/2).方法设0s、15S、30s、1h、2h、4h及6h共7个间隔时间,将8Gy照射剂量分为平分为两个4Gy间断照射4株细胞.采用集落形成法得到4株细胞在不同间隔时间两个4Gy照射后的存活分数.拟合细胞存活分数随间隔时间延长的变化曲线,并测算出T1/2.结果 CNE1、HONE1、C666-1和CNE2的T1/2分别为18、22、29和27s.结论鼻咽癌细胞的亚致死性损伤修复速度较快.提示调强放疗中被延长的分次照射时间(15～45s)可能导致鼻咽癌细胞的辐射死灭效应降低.

【期刊名称】《南方医科大学学报》

【年(卷),期】2010(030)004

【总页数】2页(P777-778)

【关键词】鼻咽癌;亚致死性损伤;半修复时间

【作者】王雯珺n;郑小康;刘佳宾;袁亚维;陈龙华;孙恒文

【作者单位】南方医科大学南方医院放疗科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院放疗科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院放疗科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院放疗科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院放疗科,广东,广州,510515;南方医科大学南方医院放疗科,广东,广州,510515

【正文语种】中文

【中图分类】R739.63

近年来，调强放疗等各种适形放疗技术的临床应用越来越广泛。在这些适形照射技术中，分次照射时间常常被延长到15～45 min甚至更长［1］。亚致死性损伤(SLD)是决定细胞照射后存活的重要因素。分次照射时间延长是否会因为照射中SLD修复而降低肿瘤细胞的辐射杀灭效应受到越来越多的关注。显然，肿瘤细胞的辐射杀灭效应在分次照射时间延长时是否降低及降低程度主要取决于两个因素：SLD修复能力和修复速度［2］。一般而言，晚反应组织SLD修复能力较强，而早反应组织SLD修复能力较弱。修复动力学研究表明SLD的修复与照射后时间呈指数性关系，常用半修复时间（T1/2，50%细胞损伤修复所需时间)来表示SLD的修复速度［3］。本研究旨在检测鼻咽癌细胞的半修复时间，为探讨分次照射时间延长是否会降低鼻咽癌细胞的辐射杀灭效应提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 试剂及仪器

RPMI1640为美国Gibco公司产品，小牛血清为天津灏洋生物制品科技有限责任公司产品，6MV X-线为美国Varian600CD直线加速器产生，实验所用细胞CNE1和CNE2购于中山医科大学动物实验中心，C666-1和HONE-1为南方医科大学肿瘤中心提供。CNE1为鼻咽高分化鳞癌细胞（相当于WHO I级），CNE2和HONE1和C6661为鼻咽低分化癌细胞（相当于WHO III级）。

1.2 细胞培养

细胞在标准状态下（5%CO2、37℃）培养于含10%小牛血清、1%双抗的RPMI1640培养基中，待细胞单层生长约占80%培养瓶底时，使用0.25%胰酶

（含.03%EDTA）室温下消化，血细胞技术板计数后逐级稀释，接种于6孔培养板上，每个间隔时间设3个平行样本。标准状态下培养12 h后细胞贴壁，实施照射。

1.3 照射方法

室温下用6MV X-线照射细胞；剂量率为400cGy，射野大小20 cm×15 cm，每

次照射一个6孔培养板，把培养板置于照射野中心，在上加垫2块1 cm厚有机玻璃板，放射源至细胞（培养板底）的距离为100 cm。照射总量8Gy，分成两个

4Gy间隔照射。设 7 个不同间隔时间 0 s、15 s、30 s、1 h、2 h、4 h 和 6 h。

每个间隔时间设3个平行样本。在间隔时间将细胞置于室温下。细胞照射后在标

准状态下培养10～14 d收获。细胞经纯甲醇固定15 min，Giemsa染色30 min，自然晾干后进行克隆计数。细胞数≥50个的集落被作为存活细胞克隆予计数。

1.4 存活曲线的绘制及T1/2计算

采用半对数坐标，横轴为间隔时间，纵轴为细胞存活分数。标出细胞在0～6 h不同间隔时间两个4Gy照射后的细胞存活分数，手工拟合曲线。将平台期曲线水平

反向延长与纵轴相交得到的存活分数值除以2得到半修复存活分数值，曲线上半

修复存活分数对应的间隔时间即半修复时间。

2 结果

以细胞受照射后存活分数（对数）对不同间隔时间（常数）作图，得到随照射间隔时间延长，细胞存活分数的变化曲线（图1）。在曲线上标定亚致死性损伤修复50%的位置（曲线上黑色标记），其对应的间隔时间即半修复时间。鼻咽癌细胞

株CNE1，HONE-1，C666-1和CNE2的半修复时间分别为18、22、29和27 min。

图1 CNE1,HONE-1,C666-1 and CNE2细胞株延长照射的间隔时间存活分数变化曲线

3 讨论

亚致死性损伤是决定细胞受到照射后是否死亡的重要因素之一。亚致死性损伤修复具有时间依赖性，肿瘤细胞的亚致死性损伤修复速度通常较快，半修复时间一般在几分钟到数小时之间［4］。本研究显示4株鼻咽癌细胞的半修复时间均在30

min内。

在目前普遍采用的调强放疗技术中，每分次的照射时间由常规照射的2～3 min延长到15～60 min不等［5］。修复速度较快的肿瘤细胞，其亚致死性损伤可能在被延长的分次照射时间里得到修复，从而使肿瘤细胞的辐射杀灭效应降低。其原

理与我们熟悉的剂量率效应相同。

鼻咽癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其治疗以放射治疗为主。调强放疗的开展使腮腺、下颌关节等正常结构得到保护，患者放疗后遗症明显减少。与常规放疗相比，鼻咽癌患者在调强放疗中的获益已得到肯定［7］。同时，调强放疗中延长的分次照射时间对鼻咽癌细胞辐射杀灭效应的影响受到普遍关注。从本研究显示，鼻咽癌细胞亚致死性损伤的修复速度较快，提示调强放疗中延长的分次照射时间可能降低鼻咽癌细胞的辐射杀灭效应。然而，临床研究结果显示，鼻咽癌调强放疗的局部控制率并未下降，这可能与多方面因素有关：首先，大部分鼻咽癌为低分化鳞癌，其亚致死性损伤修复能力较弱，分次照射时间延长对其辐射杀灭效应的影响相对较小；调强放疗的处方剂量虽和常规照射相近，但肿瘤靶区的平均剂量常常高于常规照射［8］；调强放疗中，肿瘤靶区的遗漏现象可能减少。但是，对于中高分化鼻咽鳞癌（WHO 1-II级）其与低分化鳞癌相比不仅修复速度更快（CNE1的半修复时间仅18 min）而且修复能力更强（CNE1的α/β在3Gy左右［9］），调强放疗中延长的分次照射时间对其辐射杀灭效应的影响应受到格外重视。

参考文献：

［1］王志,邬蒙,何秀琴,等.鼻咽鳞癌CNE1、CNE2细胞系 IMRT模式离体照射生物效应研究［J］.实用癌症杂志,2008,23(3):248-51.