葡萄籽主要含有多酚类物质
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葡萄籽主要含有多酚类物质(GPS),包括儿茶素类和原花青素类。
其中儿茶素类包括儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯,是葡萄籽中主要的单聚体,也是原花青素寡聚体和多聚体的构成单位,在植物体内经生物化学反应而形成复杂的聚合物,是一种强抗氧化剂,其抗氧化功效是维生素C的20倍、维生素E的50倍;具有抗氧化及清除自由基抗辐射、抗肿瘤、抗衰老、治疗心血管疾病、提高免疫功能、预防神经退行性改变等作用。本文采用正交试验方法,
1仪器与试药
RE52CS型旋转蒸发仪;B一220型恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂);紫外可见分光光度计(上海先科分光仪器有限公司);BSI.IOS型电子分析天平(北京市赛多利斯仪器系列有限公司);G16型医用高速离心机(安新白洋离心厂)。儿茶素对照品(中国食品药品检定研究院,批号110877—201102);葡萄籽,香草醛、甲醇、浓盐酸(分析纯)。
2方法与结果
21含量测定方法的建立
2.1.1 对照品储备液的制备取105℃干燥至恒重的儿茶素对照品,精密称定20.18mg,置50mL量瓶中,加蒸馏水溶解并定容至刻度,即得。
2.1.2 供试品溶液
称取葡萄籽粗粉1.0294g,置100mL圆底烧瓶中,加60%乙醇溶液
50mL,水浴回流提取2次,每次30min,滤过,合并滤液,减压浓缩回收乙醇,水相转移至100mL量瓶中,蒸馏水稀释至刻度,定容。取上
述溶液4mL,离心30min(16 000r/min),取上清液,备用。2.1.3 吸收波长的选择精密吸取对照品溶液和供
试品溶液各0.5mL,置lOmL比色管中(避光),加入
3.0mL 4%香草醛甲醇溶液和mL浓盐酸,混匀,室
温放置显色15min。以纯水为空白,在200~800nm波长范围内进行扫描,结果显示,对照品溶液和供试品500nm,
溶液均在500nm处有最大吸收峰,确定吸收波长为500mm
2.1.4儿茶素标准曲线的制备分别精密移取对照
品储备液1.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、7.0mL、
8.OmL,置lOmL量瓶中,加蒸馏水定容至刻度。分别
移取上述不同浓度对照品溶液各0.5mL,置10mL比
色管中(避光),加入3.OmL 4%香草醛甲醇溶液和
1.5mL浓盐酸,混匀,室温放置显色15min。以纯水为
空白,照紫外一可见分光光度法,在500nm处测定吸
光度(A)。以儿茶素浓度(X)为横坐标,吸光度(Y)
为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程Y=1.773X+
0.000 1,r=0.999 8。结果显示,儿茶素对照品在
0.038 1—0.304 8mg/mL范围内线性关系良好。
2.2不同提取条件对多酚提取效果的影响
2.2.1 乙醇浓度对多酚提取效果的影响准确称取
葡萄籽粗粉5份,分别置于100mL圆底烧瓶中,依次
加入8BV 20%、40%、60%、80%、95%的乙醇溶液,回
流提取2次,每次30min,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩回收乙醇,水相用蒸馏水定容至100mL,摇匀,备用。精密量取2.0mL样品溶液,置10mL量瓶中,加蒸馏水
稀释至刻度,摇匀,得各乙醇浓度项下供试品溶液。取供试品溶液4mL,离心30min(16 000r/min),吸取上清液0.5mL,置10mL比色管中(避光),照儿茶素标准曲
线制备项下的方法,测定样品溶液的吸光度,计算多酚得率。结果显示,40%、60%乙醇多酚得率较高,2.2.2溶剂倍量对多酚提取效果的影响考察6BV、
8BV、10BV、12BV及14BV溶剂倍量对多酚提取效果
的影响,其余操作同2.2.1。结果显示,IOBV乙醇较
为适宜
2.2.3提取时间对多酚提取效果的影响考察提取
时间30、60、90、120、150rain对多酚提取效果的影响,结果显示,1.5h多酚得率可达90%以上