噬菌体展示技术

B. 可用于模拟表位的筛选 利用噬菌体展示技术 得到模拟表位的报道较多（Giuseppe, 2001； Seshi et al., 2002；Ouyang et al., 2003）。 模拟表位同样可诱发与天然表位相似的特 异性免疫反应，例如利用乙肝病毒的模拟表位 免疫小鼠可诱导产生高滴度的乙肝病毒抗体。
噬菌体展示技术
• 噬菌体可被分为溶菌周期和溶源周期两种不同的类型。 在溶菌周期，噬菌体将其感染的宿主细胞转变成为噬 菌体的“制造厂”，产生出大量的子代噬菌体颗粒。 实验室常将只具有溶菌生长周期的噬菌体叫作烈性噬 菌体。 • 溶源生长周期是指噬菌体DNA被整合到宿主细胞染色 体DNA上，成为它的一个组成部分，感染过程中不产 生子代噬菌体颗粒。具有这种溶源周期的噬菌体被称 为温和噬菌体。
• 噬菌体展示技术是一种将外源肽或蛋白基因与噬菌体 特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术。该技 术实现了表型与基因型的统一。随着噬菌体展示技术 的进一步发展，其优越性被越来越多的实验室所认识， 使得该技术的使用范围不断扩展，也使该技术得以不 断的完善和发展。
• 原理 将编码“诱饵”蛋白的DNA片段插入噬菌体基因 组，并使之与噬菌体外壳蛋白编码基因相融合。重组 噬菌体侵染宿主细菌后，复制形成大量带有杂合外壳 蛋 白的噬菌体颗粒，直接用于捕获靶蛋白库中与 “诱 饵”相互作用的蛋白质。
另外，他还有以下很多显著的优点： A. 高通量的淘选 将抗体固定在固相载体上，加 入噬菌体展示肽库，利用抗原-抗体的特异性亲 和力将与抗体结合的噬菌体吸附在固相载体上， 不能结合的噬菌体仍在溶液中，可以通过洗涤 去除，再将特异结合的噬菌体洗脱下来，如此 反复数轮扩增、淘选，即可将有用的基因从多 达百万以上的噬菌体克隆中分离出来。
• 噬菌体展示技术的主要优势 在于它将蛋白质与其遗传信息之间提供了 直接的物理联系，人们可以有效的对所需功能 的克隆进行反复筛选，并随之对其进行扩增。 因此，在文库筛选的过程中，特定的噬菌体克 隆由于对其配体的特意亲和性而不断的得到富 集，从而使相对稀少的可以结合配体的克隆能 够快速、有效地从一个大文库中被筛选出来。
噬菌体展示技术的应用
近几年来，噬菌体展示技术成为探测蛋白 空间结构、探索受体与配体之间相互作用结合 位点、寻找高亲和力和生物活性的配体分子的 有利工具，在蛋白分子相互识别的研究、新型 疫苗的研制以及肿瘤治疗等研究领域产生了深 远的影响。肽库（peptide library）的应用为确 定表位序列以至其构象提供了另一有力工具。
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噬菌体展示系统的分类 展示系统分为：丝状噬菌体展示系统、T7噬 菌体展示系统、T4噬菌体与lamda噬 菌体展示系统 所展示内容包括：随机肽段、天然肽段、 cDNA、抗体、抗体片段等等 筛选方式包括：体外筛选和体内筛选
用抗体、受体、核酸、以及某些碳水化合物可以 从噬菌体随机肽库中筛选出与之结合的肽段，因 此在抗原表位分析、分子间相互识别、新型疫苗 及药物的开发研究方面有广泛的应用前景。
C. 易于纯化 重组噬菌体的纯化步骤简单、不要 求昂贵的试剂与设备，在一般的实验室条件下 就可以完成。目前用于鉴定表位和受体所用的 噬菌体载体为M13单链噬菌体。
• 噬菌体展示技术的局限性 1.在噬菌体展示过程中必须经过细菌转化、 噬菌体包装，有的展示系统还要经过跨膜分泌 过程，这就大大限制了所建库的容量和分子多 样性。目前，常用的噬菌体展示文库中含有不 同序列分子的数量一般限制在10。 2.不是所有的序列都能在噬菌体中获得很 好的表达，因为有些蛋白质功能的实现需要折 叠、转运、膜插入和络合，导致在体内筛选时 需外加选择压力。
3.噬菌体展示文库一旦建成，很难再进行 有效的体外突变和重组，进而限制了文库中分 子遗传的多样性。 4.由于噬菌体展示系统依赖于细胞内基因 的表达，所以，一些对细胞有毒性的分子如生 物毒素分子，很难得到有效表达和展示