【管理资料】肿瘤靶向治疗-基因检测汇编
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Target Assay for NSCLC
EGFR Gene Mutations Detection
非小细胞肺癌靶向治疗之靶标分析
表皮细胞生长因子受体基因突变检测
宝藤临床检验中心
肿瘤靶向治疗-基因检测
临床上治疗肿瘤的方法
• 患者对药物是否敏感？毒性是否可耐受？ • 患者治疗后转移复发风险有多高？
中等 中等
中等
测序技术发展历程
Ion Semiconductor Sequencing （2011）
Next-Gen Sequencing （2005以后）
Sanger Sequencing （1977）
Ion Torrent半导体测序原理
ห้องสมุดไป่ตู้
Ion Torrent半导体测序平台及芯片
PI芯片：sequence exomes and whole transcriptomes（5Gb）
✓ NCCN明确指出西妥昔单抗（爱必妥）用药 之前须检测K-ras基因突变检测；
野生型 突变型
✓ K-ras突变型患者并不能从抗EGFR治疗（爱 必妥）中获益,反而徒增不良反应危险和治 疗费用；
✓ 中国人群中K-ras基因突变率15% ！
✓ 15%的病人不应该使用爱必妥！
World J Gastroenterol. 2011 November 21; 17(43): 4779-4786.
EGFR基因突变检测方法灵敏度的比较
检测方法/ 检测灵敏度
100%
直接测序法 +++
TaqmanARMS® 焦磷酸测序
法
+++ +++
Taqman QPCR技术
+++
50% ++ +++ ++
+++
5% -
+++ +
+/-
1% 0.01% 耗时
-
-
>6h
+++
-
1.5h
-
-
>6h
-
-
<2h
费用 低
目前成熟的肿瘤分子靶向药物敏感性基因检测
肿瘤类型
靶向药物
基因
样本
疗效佳的情况
非小细胞肺癌
易瑞沙（Iressa） 特罗凯（Tarceva）
克唑替尼
EGFR KRAS
EML4ALK融合
手术/穿刺/ 胸腹水/血浆
手术/穿刺/ 胸腹水
EGFR突变/KRAS野生 阳性
胃肠间质瘤
格列卫（Gleevec）
C-Kit PDGFRA
基因KRAS热点突变位点
KRAS主要突变在： 外显子2（密码子12，13 ），3（密码子61）9
个体化检测平台
基因突变检测
——ARMS技术，测序等
ARMS技术——普通PCR
等位基因特异性扩增法（Allele Specific Amplification，ASA） 建立于1989年，是PCR技术应用的发展，也称扩增阻滞突变系统
RRM1 mRNA <1.4 >1.4
No. Patients 8 8
Median Survival 15.5 mos 6.8 mos
P 0.0028
ERCC1表达与铂类药物疗效相关 的临床数据
ERCC1低表达患者，能从铂类辅助化疗中获益.
BRCA1/2表达与铂类药物疗效 相关的临床数据
BRCA1过度表达 •铂类耐药的预测因子 •抗微管类药物的敏感因子
已发现并确认至少9种EML4-ALK融合基因的突变体： v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7
检测方法：RT-PCR, FISH, PCR-测序等
靶向EGFR的抗肿瘤药物
类别一：小分子酪氨酸激酶抑制剂（ EGFR －TKI)
作用机制：抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活 性，阻断EGFR信号通路；
个体化治疗：医学概念。应用它不仅降低并发症的发生,还
降低医疗费用。
肿瘤标准化治疗
病理分型
Ⅰ期患者：手术/化疗 Ⅲ、Ⅳ期患者：放/化疗+手术
局部晚期患者：手术、化疗、放疗、靶向
分子分型
肿瘤个体化治疗
标本→基因检测→遗传特性 →选择化疗/靶向药物
克唑替尼的靶标——EML4-ALK融合基因
EML4和ALK两个基因分别位于人类2号染 色体的p21和p23带
（Amplification Refractory Mutation System ， ARMS）、等位基 因特异性PCR（Allele Specific PCR， ASPCR）等。
方法：
2条正向引物（针对正 常DNA，突变DNA）
1条反向引物
2个平行的PCR反应
普通PCR仪
TaqMan-ARMS技术
野生型
病理切片
高表达/表达阳性
基因表达量（mRNA）检测
——指导个体化化疗
可使标准化疗方案得到个体化应用
mRNA检测主要技术特色
• 采用荧光定量PCR技术，采用内参比 RNA作为质控对照，应用beta-actin作 为内对照，定量检测检测目的基因 mRNA表达水平。
• 适用于各种肿瘤组织检测，包括石蜡标 本、穿刺标本、冰冻活检标本等。
手术/穿刺/内镜 活检/血浆
C-kit第11外显子突变/PDGFR突变
慢性粒细胞白 血病
格列卫（Gleevec） 达沙替尼(Dasatinib) 尼罗替尼(Nilotinib)
ABL
骨髓/全血
无T315I突变
乳腺癌
拉帕替尼（ Lapatinib）
赫塞汀
PI3K Her-2
手术/穿刺/内镜 活检/血浆
药物代表：吉非替尼（阿斯利康）；厄罗替 尼（罗氏）。
类别二：单克隆抗体(mAb)
作用机制：与EGFR胞外区结合，阻断配体与 EGFR的结合；
药物代表：西妥昔（默克）；贝伐单抗（罗 氏）。
基因EGFR热点突变位点
•EGFR主要突变在：外显子18，19，20，21 •耐药突变：T790M
➢靶向药物西妥昔单抗靶标——K-ras基因检测
• 国内采用校准RNA（Calibrator RNA）方法进行基因表达定量。
22
Q-PCR检测基因表达数据库
基础：>5000例样本 人种：中国患者样本
标准：正态分布 定位：精确到1%
统计：p<0.05
RRM1表达与吉西他滨疗效相关的临床数据
NCCN 2012年版临床治疗指南明确 指出：
患者接受吉西他滨化疗前进行 RRM1 mRNA检测可提高治疗有 效率和患者生存率。
TaqMan-ARMS探针技术基于实时PCR平台，结合了 ARMS突变富集和Taqman-MGB特异性荧光检测两种技术。
Taqman-MGB：针对SNP位点特异性扩增的探针，可区分一个碱基的突变。
一个PCR体系中：1对引物，1条探针 每个位点需要做至少两管PCR扩增！！！
应用：对微量突变进行检测。
SNP位点检测应用
EGFR Gene Mutations Detection
非小细胞肺癌靶向治疗之靶标分析
表皮细胞生长因子受体基因突变检测
宝藤临床检验中心
肿瘤靶向治疗-基因检测
临床上治疗肿瘤的方法
• 患者对药物是否敏感？毒性是否可耐受？ • 患者治疗后转移复发风险有多高？
中等 中等
中等
测序技术发展历程
Ion Semiconductor Sequencing （2011）
Next-Gen Sequencing （2005以后）
Sanger Sequencing （1977）
Ion Torrent半导体测序原理
ห้องสมุดไป่ตู้
Ion Torrent半导体测序平台及芯片
PI芯片：sequence exomes and whole transcriptomes（5Gb）
✓ NCCN明确指出西妥昔单抗（爱必妥）用药 之前须检测K-ras基因突变检测；
野生型 突变型
✓ K-ras突变型患者并不能从抗EGFR治疗（爱 必妥）中获益,反而徒增不良反应危险和治 疗费用；
✓ 中国人群中K-ras基因突变率15% ！
✓ 15%的病人不应该使用爱必妥！
World J Gastroenterol. 2011 November 21; 17(43): 4779-4786.
EGFR基因突变检测方法灵敏度的比较
检测方法/ 检测灵敏度
100%
直接测序法 +++
TaqmanARMS® 焦磷酸测序
法
+++ +++
Taqman QPCR技术
+++
50% ++ +++ ++
+++
5% -
+++ +
+/-
1% 0.01% 耗时
-
-
>6h
+++
-
1.5h
-
-
>6h
-
-
<2h
费用 低
目前成熟的肿瘤分子靶向药物敏感性基因检测
肿瘤类型
靶向药物
基因
样本
疗效佳的情况
非小细胞肺癌
易瑞沙（Iressa） 特罗凯（Tarceva）
克唑替尼
EGFR KRAS
EML4ALK融合
手术/穿刺/ 胸腹水/血浆
手术/穿刺/ 胸腹水
EGFR突变/KRAS野生 阳性
胃肠间质瘤
格列卫（Gleevec）
C-Kit PDGFRA
基因KRAS热点突变位点
KRAS主要突变在： 外显子2（密码子12，13 ），3（密码子61）9
个体化检测平台
基因突变检测
——ARMS技术，测序等
ARMS技术——普通PCR
等位基因特异性扩增法（Allele Specific Amplification，ASA） 建立于1989年，是PCR技术应用的发展，也称扩增阻滞突变系统
RRM1 mRNA <1.4 >1.4
No. Patients 8 8
Median Survival 15.5 mos 6.8 mos
P 0.0028
ERCC1表达与铂类药物疗效相关 的临床数据
ERCC1低表达患者，能从铂类辅助化疗中获益.
BRCA1/2表达与铂类药物疗效 相关的临床数据
BRCA1过度表达 •铂类耐药的预测因子 •抗微管类药物的敏感因子
已发现并确认至少9种EML4-ALK融合基因的突变体： v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7
检测方法：RT-PCR, FISH, PCR-测序等
靶向EGFR的抗肿瘤药物
类别一：小分子酪氨酸激酶抑制剂（ EGFR －TKI)
作用机制：抑制EGFR胞内区酪氨酸激酶活 性，阻断EGFR信号通路；
个体化治疗：医学概念。应用它不仅降低并发症的发生,还
降低医疗费用。
肿瘤标准化治疗
病理分型
Ⅰ期患者：手术/化疗 Ⅲ、Ⅳ期患者：放/化疗+手术
局部晚期患者：手术、化疗、放疗、靶向
分子分型
肿瘤个体化治疗
标本→基因检测→遗传特性 →选择化疗/靶向药物
克唑替尼的靶标——EML4-ALK融合基因
EML4和ALK两个基因分别位于人类2号染 色体的p21和p23带
（Amplification Refractory Mutation System ， ARMS）、等位基 因特异性PCR（Allele Specific PCR， ASPCR）等。
方法：
2条正向引物（针对正 常DNA，突变DNA）
1条反向引物
2个平行的PCR反应
普通PCR仪
TaqMan-ARMS技术
野生型
病理切片
高表达/表达阳性
基因表达量（mRNA）检测
——指导个体化化疗
可使标准化疗方案得到个体化应用
mRNA检测主要技术特色
• 采用荧光定量PCR技术，采用内参比 RNA作为质控对照，应用beta-actin作 为内对照，定量检测检测目的基因 mRNA表达水平。
• 适用于各种肿瘤组织检测，包括石蜡标 本、穿刺标本、冰冻活检标本等。
手术/穿刺/内镜 活检/血浆
C-kit第11外显子突变/PDGFR突变
慢性粒细胞白 血病
格列卫（Gleevec） 达沙替尼(Dasatinib) 尼罗替尼(Nilotinib)
ABL
骨髓/全血
无T315I突变
乳腺癌
拉帕替尼（ Lapatinib）
赫塞汀
PI3K Her-2
手术/穿刺/内镜 活检/血浆
药物代表：吉非替尼（阿斯利康）；厄罗替 尼（罗氏）。
类别二：单克隆抗体(mAb)
作用机制：与EGFR胞外区结合，阻断配体与 EGFR的结合；
药物代表：西妥昔（默克）；贝伐单抗（罗 氏）。
基因EGFR热点突变位点
•EGFR主要突变在：外显子18，19，20，21 •耐药突变：T790M
➢靶向药物西妥昔单抗靶标——K-ras基因检测
• 国内采用校准RNA（Calibrator RNA）方法进行基因表达定量。
22
Q-PCR检测基因表达数据库
基础：>5000例样本 人种：中国患者样本
标准：正态分布 定位：精确到1%
统计：p<0.05
RRM1表达与吉西他滨疗效相关的临床数据
NCCN 2012年版临床治疗指南明确 指出：
患者接受吉西他滨化疗前进行 RRM1 mRNA检测可提高治疗有 效率和患者生存率。
TaqMan-ARMS探针技术基于实时PCR平台，结合了 ARMS突变富集和Taqman-MGB特异性荧光检测两种技术。
Taqman-MGB：针对SNP位点特异性扩增的探针，可区分一个碱基的突变。
一个PCR体系中：1对引物，1条探针 每个位点需要做至少两管PCR扩增！！！
应用：对微量突变进行检测。
SNP位点检测应用