血小板功能检测方法及注意事项-闫承慧

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• ACCF/AHA有关UA/NSTEMI患者、ACCF/AHA/SCAI有 关PCI患者、ESC有关NSTE-ACS患者以及STS/SCA有 关手术患者均给出了在某些特殊情况下进行血小板 功能检测的建议
• 血小板功能检测正向着成为临床常规检测项目方向 迈进
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血小板功能检测方法有哪些?
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血小板实验室检查项目
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1.光学比浊法(LTA)
将富血小板血浆(PRP)置于比色管中,加入诱聚剂(ADP、肾上腺素 、胶原、凝血酶、花生四烯酸、TXA2、PAF),用涂硅小磁粒搅拌, 血小板逐渐聚集,血浆浊度降低,透光度增加,记录此变化,形成血小 板聚集的动态曲线(以PRP的聚集率和透光度为0%,乏血小板血浆 所测得的聚集率和透光度为100%)
肝素酶杯 激活剂Kolin+CaCl2
自然全血 普通杯 激活剂Kolin
<5
激活剂F\冻干ADP\
自然全血 普通杯
冻干AA\蒸馏水
抗血小板治疗 血小板图检测
枸橼酸化全血 普通杯 激活剂Kolin+CaCl2
15—120
激活剂F\冻干ADP\
肝素化全血 普通杯
冻干AA\蒸馏水
(1)枸橼酸管:BD公司的蓝盖0.109M/3.2%试管
为:血栓病预防和治疗的“基石” 1985年美国卫生与
民众服务部部长Margaret Heckler 向全美中老年人推荐:每天服用一片 阿司匹林预防血栓性疾病
5
血 小 板 基 本 结 构
6
抗血小板药物分类及作用机理
血小板活化途径与抗血小板药物
ADP 肾上腺素
凝血酶
TXA2 胶原
PAR
抵克力得
氯吡格雷
原始血小板数 - 聚集后最低血小板数 原始血小板数
×100=MAR%
*(原始血小板数-聚剂后最低血小板数)=聚集的血小板数量
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PL血小板仪检测原理示意
未加诱聚剂检测记录
加诱聚剂后检测结果
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PL-11 报告参数
PLT 各次检测获得的血小板数量
MPV 各次检测获得的血小板平均体积
MAR
检测血小板表面的抗原 可区分激活状态和非激活状态的血小板. 激活状态标志物: CD62p/P-Selectin 仪器和试剂都比较昂贵 操作复杂- 需受过特别培训的技术人员. 不能作为快速检测项目
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其他血小板功能检测:血管舒张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化法
PGE1与血小板表面的磷酸肌醇 受体结合,通过G刺激蛋白传递 信号,使三磷腺苷在腺苷酸环化 酶的作用下转变为环磷酸腺苷, 后 者 通 过 蛋 白 激 酶 A 将 VASP 转 化 为 磷 酸 化 的 VASP 。 而 ADP 与 血小板表面的P2Y12受体结合, 通 过 G 抑 制 蛋 白 抑 制 PGE1 传 递 的信号。ADP受体拮抗剂对ADP 诱导的信号传递起抑制作用,因 而 应 用 流 式 细 胞 仪 检 测 VASP-P 的量可较准确地反映药物对ADP 受体的拮抗作用
方法创新、检测信号直接、技术成熟:直接对血样中血小板数量连续检测,通过比 较聚集前后血小板数量变化判断血小板的聚集功能水平
质控体系:具有校准、质控品配套,可以确保结果标准 方便快速、6分钟内完成全部检测,容易推广应用 重复性好:血小板CV≤3%, 聚集率CV ≤7% 样品用量少:仅需0.3-0.5ml血样 检测项目开放:可以任意选用诱聚剂 检测结果不受溶血、高血脂等因素影响 提供的信息全面(血小板数量变化、血小板体积变化、红细胞变化、聚集曲线、
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4.血栓弹力图(TEG)
TEG是一种通过检测全血中血凝块的物理特性而动态地分析凝血 和纤溶全过程的临床常用检测方法。1948年由德国人Harter发明 。1980年代开始广泛用于临床指导术中输血取得了良好效果,现 已成为当今围术期监测凝血功能的最重要指标。1995-1996年, 开始在心脏外科使用。2004年,抗血小板药物疗效监测的血小板 图试验——Platelet Mapping上市,为临床带来快速、准确的监 测血小板聚集功能的技术
• 美国Accumetrics公司研发,2006年经美国FDA批准用于血小板功能检测 。VerifyNow属床旁检测设备,可分别以花生四烯酸、ADP及凝血酶受体 激活肽(TRAP)作为激动剂,特异性地检测血小板对阿司匹林、P2Y12 受体拮抗剂及GPI的反应性
• VerifyNow技术的优势是采用全血作为标本,整个检测过程仅需3分钟,是 目前所有血小板功能检测方法中耗时最短者
GMp-140
血小板代谢:TXB2;丙二醛
血小板膜蛋白:GPI, GPIIb/IIIa
血小板内钙流:钙波动
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血小板聚集功能主要检测方法
(1)血小板集聚比浊法 (2) VerifyNow仪法 (3) 血小板粘附集聚仪
(4)血栓弹力图法 (5)PL-11血小板检测仪 (6)Plateletworks
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仪器模拟血管破损而使血小板聚集
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PFA-100测定封闭时间(CT)
PFA-100测定由血液开始注入到活性膜上 孔洞被血小板凝块封闭的Closure Time (CT)封闭时间
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优点与缺点
优点:该方法操作简便易 行、重复性好,与光学血 小板聚集仪法相关性较好 ,比出血时间等方法更为 敏感。而且能检测血小板 功能失调是原发性因素还 是药物影响所致。
• 结果与LTA及临床事件均有很好的相关性
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检测原理
PRU:240; ARU:550 在试管内预混有血小板激活剂和纤维蛋白原包被的小珠。加入全血标本后,血小 板受激活剂作用而活化,其表面Ⅱb/Ⅲa受体复合物与小珠表面的纤维蛋白原交联 ,使血小板聚集于小珠表面,试管内透光性增强
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评价
检测原理还是采用传统比浊法,没有本质突破, 检测误差达15% (cv)
替格瑞洛 Vorapaxar
Байду номын сангаас
5-羟色胺
阿司匹林
沙雷格酯
腺苷
潘生丁,西洛他唑 GP IIb/IIIa
GP IIb/IIIa 拮抗剂
前列环素
AMP
摄取
纤维蛋白原
欣维宁
ADP
血小板
7
抗血小板治疗的反应性差异
约30%使用抗血小板药物患者无效(抵抗) 约10%个体出血 约2%严重出血 95%以上高风险人群及血栓病患者无法确认是否
PLT及RBC分布图等)
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6.Platletworks
Plateletworks均未完成在中国注册。Platletworks也是采用血小板计数 变化为原理进行检测,但其自动化和标准化方面不及PL-11仪(获得 CFDA和欧盟认证)
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Plateletworks曲线图
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对比曲线
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其他血小板功能检测:流式细胞技术检测血小板表面活化受体
Journal of the American College of Cardiology. 2007,49(6):658-662.
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5.PL-11血小板仪检测原理
全血连续计数检测法原理: 即仪器对全血中血小板原始数量检测后,继续对加入诱 聚剂后血小板数量进行连续计数检测,通过对比未加诱 聚剂前血液中血小板数量与加入诱聚剂后血小板数量的 变化及血小板下降的速度,评价血小板功能水平
Nature 2008;451:914-9318
血小板与血栓形成
血管损伤
内皮下组织暴露 凝血酶形成
血小板粘附
ADP、T XA2
血小板聚集 血小板释放反应
止血栓形成
初期止血
纤维蛋白形成 加固止血栓
止血栓收缩
血凝块形成
二期止血
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血小板与血栓形成
血小板的粘附和聚集是引起血栓形成的第一和重要的因素 抗血小板药物是预防和治疗血栓病的主要措施,临床称之
• 一 般 检 查 : 血小板计数;MPV;血块回缩试验
• 血小板功能:血小板聚集试验: (1) 比浊集聚仪法
(2) VerifyNow仪法
(3) 流式细胞术聚集法
血小板粘附试验: (1)PF-100粘附聚集仪
(2)血栓弹力图等
特殊检查:
血小板释放:
血小板ATP释放 致密颗粒释放
5-TH测定 PF4 a颗粒释放 β-TG
操作快速,简便.易于质量
控制
已有不少的相关文献发表
缺点:其对出血性疾病尚不能非常 精确地预测,而且其结果也受很多因 素影响,如血小板数量、红血细胞压 积、血型及血浆中某些分子水平等 都会影响其结果。费用较高。
•很大程度上受vWF, PCT, HCT, PLT等参数的影响 •只有两种试剂包,应用范围窄
仪器、耗材价格昂贵 目前尚未在国内注册 国内使用信息不多
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3.血小板功能分析仪( PFA-100)
PFA-100系统是血细胞功能检测研究最 多的方法之一。它在高切变率下,利用多 种激活剂进行血小板功能的测定,在检测 血小板功能的临床工作中取得较多进展 。血小板功能分析仪模拟体内初期止血, 又名“外出血时间测定”,检测与血小板 黏附、聚集、栓子形成的初期止血障碍 相关的疾病,也可监测抗血小板药物治疗
(2)肝素管:BD公司的绿盖试管,含有>14.5IU/ml肝素
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Platelet Mapping系统
传统的血栓弹力图对血小板的检测并不是很准,后来出现了
TEG专门用于检测血小板的升级版——Platelet Mapping系统
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TEG测得的血小板抑制率可以预测之后的心血管不良反应事件
2007年,发表在JACC上一篇文章证明,治疗初期,TEG测得的血小板抑制率可以 预测之后的心血管不良反应事件
所有血小板功能的检查与血样采集方法是否正确有关,建议以21G 或更大的针头(20G 或 19G)采集静脉血
中华临床医师杂志(电子版)2013年6月 第7卷第12期
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其他检测方法
代谢产物检测: 血浆TXB2、TXA2,尿11-脱氢TXB2
释放因子检测: PF4;5-HT;β-TG;GMp-140
钙内流的检测: 钙波动
基因型检测: CYP2C19,CYP2C9,CYP2D6
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所有血小板功能检测的注意事项
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检测类型
目的
名称
时间(min) 采血方式
耗材
试剂
凝血全貌 肝素监测
普通检测 肝素酶检测
<5 15—120
<5
15—120
自然全血 普通杯 激活剂Kolin
枸橼酸化全血 普通杯 激活剂Kolin+CaCl2
普通杯 激活剂Kolin 自然全血
肝素酶杯 激活剂Kolin
普通杯 激活剂Kolin+CaCl2 枸橼酸化全血
抗栓治疗中血小板功能 检测方法及注意事项
沈阳军区总医院 韩雅玲 闫承慧
1
全球死亡原因统计资料(2001)
AIDS 意外死亡
肺疾病 感染性疾病
癌症 动脉粥样硬化血栓形成
5% 12% 14% 19% 24%
52%
0
10
20
30
40
50
60
2
动脉粥样硬化血栓形成机制
动脉血栓 粥样斑块破裂——富含血小板血栓形成——阻断血流——造成供血不足
LTA原理
血小板聚集功能检测的发展和应用.医学检验与临床.2005年 第0154期
血小板聚集曲线解释
血小板最大聚集率
血小板聚集曲线与血小板状态
光学比浊法血小板聚集试验是检测血小板聚集功能的金标准
Blood Reviews,2005(19):1-1115.
临床评价
检测结果重复性较差,cv值达到15% 操作繁琐,需要制备贫血小板血浆、富血小板血浆方可以检测 溶血、高血脂样对检测有明显干扰 是在去除血液主要细胞成份条件下进行,不能完全反映体内真
实的血小板聚集功能 操作难度较大影响普及和应用 血小板聚集试验尚无国际或国内通用的质控品
光学比浊法血小板聚集试验的标准化研究.中国实验诊断学.2010年12月第l4卷第12期
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2.全血比浊法(VerifyNow)抗血小板治疗监测仪
• 一种基于光学比浊法的快速便携式血小板功能检测设备,结合P2Y12 试剂 卡可直接检测药物对P2Y12受体的作用
最大聚集率(35-75 %)
MAP
最大聚集点(时间)
AAR
平均聚集率(30-70 %)
RBC-0
末聚集红细胞数量
MCV-0 末聚集红细胞平均体积
RBC-A 聚集后红细胞数量
MCV-A 聚集后红细胞平均体积
血小板聚集曲线、血小板分布曲线、红细胞分布曲线
30
PL-11血小板仪的性能特点
得到有效预防和治疗
8
抗血小板治疗的反应性差异
抗血小板药物的个体差异性太大 临床迫切需要血小板功能检测指导个体化用药治疗
9
ACCF等推荐血小板功能检测 应用于血栓病防治
• 2011年美国心脏病协会AHA 等多个国际组织都推荐 将血小板功能检测列入血栓性疾病抗血栓治疗的诊 疗指南,或提示血小板功能检测
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