三种红豆杉属植物中紫杉烷类化合物含量的检测与分析

（baccatin III）和紫杉醇（Taxol）置于同一色谱条件下检测，以比较不同种类紫杉烷类化合物的含量，为红豆杉资源的开发和利用
奠定了基础。
关键词：红豆杉；紫杉烷类化合物；含量；高效液相色谱；优化条件
中图分类号：Q949.95
文献标识码：A
Determination and Analysis of Taxanes Content in the Branches of Different Taxus Species
1. 1. 3 仪器 Waters2695 高效液相色谱分析仪 （2996 型二极管阵列检测器）；DL-7208 超声波清洗 器。 1. 2 实验方法 1. 2. 1 供试样品的制备 采集新鲜的中国红豆 杉枝条、南方红豆杉枝条和东北红豆杉枝条，于 90 ℃烘箱内干燥 1 h，用粉碎机粉碎，分别准确称取 3 种样品 20 g，置 250 mL 磨口具塞三角瓶中，加入 150 mL 甲醇，超声萃取 2 h，留上清液，沉淀复加等 体积甲醇，重复操作 3 次。合并上清液，过滤除渣，滤 液于 30 ℃减压蒸干，浸膏用 50 mL 甲醇溶解，加入 等体积石油醚（60～90 ℃），振荡 30 min，脱脂，重复 3 次；弃去石油醚相，甲醇相用 30 ℃减压浓缩，浸膏 用 50 mL 三氯甲烷溶解，用三氯甲烷:水（体积比 1: 1）萃取，重复 3 次。弃去水相，合并三次三氯甲烷相， 30 ℃减压浓缩，用 3 mL 甲醇溶解，制备液均经 0.45 μm 过滤器过滤，滤液供 HPLC 分析。 1. 2. 2 对照溶液的制备 分别精密称取紫杉醇、 巴卡亭 Ш、10-DAB 对照品 1 mg，以甲醇溶解并定 溶于 1 mL EP 管中，制成 1 mg·mL-1 的对照品储备 液。然后逐级稀释，制成浓度分别为 100、50、20、10、 5、3、1 μg·mL-1 的标准液，供绘制标准曲线时使用。 1. 2. 3 高效液相色谱法检测紫杉烷类物质含量 1.2.3.1 色谱条件的选择 液相色谱分离条件是色 谱柱为 C18 柱（150 mm×4.6 mm），流动相为乙腈-水 的梯度洗脱，进样量：10 μL，每次进样分析时间为 38 min，流速为 1 mL·min-1，检测波长 230 nm，最大 压力 4 kPa，柱温 30 ℃。 1.2.3.2 标准曲线的绘制 分别精密吸取 3 种对照 品储备液适量，以甲醇稀释至 6 个浓度，以系列浓度 对照品溶液按色谱条件进行操作，分别进样 10 μL， 以浓度 x（μg·mL-1）对色谱峰面积 y 进行最小二乘 法线性回归，绘制各对照品的标准曲线。 1.2.3.3 重复性试验 取待测样品进行 5 次测定， 记录数据并进行分析。 1.2.3.4 稳定性试验 取供试品进行 6 次测定，记 录数据并进行分析。 1.2.3.5 回收率测定 精密称取五份样品各 1 g，分 别加入 1 mg·mL-1 的紫杉醇、巴卡亭 III、10-DAB 标 准溶液 153、95、150 μL，按样品提取步骤测定上述 3 种紫杉烷类物质的含量。按公式加样回收率（%）= （测得量-原有量）/加入量×100%计算回收率和 RSD 值。 1. 2. 4 数据处理 所有测定数据重复 3 次，数据 以 x+s 表示，采用 Excel 作图处理。
收稿日期：2009-08-07 基金项目：上海市中药现代化专项基金资助项目（07DZ19724）；国家“863”计划专项资助（2007AA021501） 作者简介：朱慧芳（1981-），女，安徽池州人，硕士生；周选围为本文通讯作者，E-mail:xuanweizhou@sjtu.edu.cn.
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（10-deacetyl-baccatin III）和巴卡亭 II（I baccatin III） 也是被人们关注较多的紫杉烷类化合物 [6-9]，10-去 乙酰巴卡亭 III 也是从红豆杉短枝叶中分离、提取得 到的一种紫杉烷二萜类化合物，不但自身具有抗癌 活性，而且是生物合成与化学半合成紫杉醇和多烯 紫杉醇的重要前体化合物，在解决临床治疗和科学 研究用紫杉醇和多烯紫杉醇药源问题中起着不可替 代的作用[10,11]。
紫杉烷类化合物是从红豆杉科（Taxaceae）红豆 杉属（Taxus）植物中分离得到的二萜类化合物的总 称[1]；到目前为止，已经从红豆杉属植物中分离得到 400 多种紫杉烷类化合物，并且还不断有新的化合 物被分离和鉴定[2,3]，大多数该类成分显示出较强的 抗癌活性[4,5]。其中以紫杉醇（taxol）最为引人注目, 因 其具有独特抗肿瘤成分而被国际上认为是目前最有 效的抗癌药物之一；除此之外 10-脱乙酰巴卡亭 III
ZHU Hui-fang，ZHENG Wen-long，WANG Yu-liang，FENG Xiao-源自文库u，ZHOU Xuan-wei
（School of Agriculture and Biology, Fudan-SJTU-Nottingham Plant Biotechnology R&D Center, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240，China）
第1期
朱慧芳，等：三种红豆杉属植物中紫杉烷类化合物含量的检测与分析
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2 结果与分析
2. 1 紫杉醇、巴卡亭Ⅲ、10- DAB的标准曲线 根据 HPLC 所测结果峰形分析可知，当浓度在
1 μg·mL-1 时，3 种标准品的峰都近似于基线齐平， 说明 1 μg·mL-1 的浓度已超出最低检测浓度。以浓 度 x（μg·mL-1）对色谱峰面积 y 进行最小二乘法线 性回归，绘制各对照品的标准曲线。紫杉醇、巴卡亭
第 28 卷 第 1期 2010 年 2 月
上海交通大学学报(农业科学版)
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY (AGRICULTURAL SCIENCE)
Vol．28 No．1 Feb．2010
文章编号：1671-9964（2010）01-0009-05
DOI：10.3969/j.issn.1671-9964.2010.01.002
Abstract：The contents of taxanes in branches of Taxus chinensis var. mairei, Taxus chinensis Rehd. and Taxus cuspidata Sieb.et Zucc were determined and analysed by HPLC after optimization conditions. The results showed that the content of taxanes of Taxus cuspidata Sieb.et Zucc was highest (0.427 mg·g-1), that of Taxus chinensis var. mairei (0.396 mg·g-1), and that of Taxus chinensis Rehd. was lowest (0.350 mg·g-1); taxol content of Taxus chinensis var. mairei was the highest (0.153 mg·g-1), that of Taxus chinensis Sieb.et Zucc was higher (0.142 mg·g-1), and that of Taxus chinensis Rehd. was the lowest(0.0102 mg·g-1). This method compared the contents of 3 kinds of taxanes （10-deacetyl-baccatin III，baccatin III，Taxol）detected through the same chromatographic condition, which lay a foundation for developing and making use of Taxus resources. Key words：Taxus；taxanes；content；HPLC；optimization condition
上海交通大学学报(农业科学版)
第 28 卷
全球红豆杉有 11 个品种, 目前中国有 4 个种 和 1 个变种，分别是：云南红豆杉 Taxus yunnanensis Cheng et L K. Fu、东北红豆杉 T. cuspidata Sieb. et Zucc. 、西藏红豆杉 T. wallichiana Zucc.、中国红豆杉 T. chinensis Rehd. 和南方红豆杉又称美丽红豆杉 T. chinensis var. mairei[12]。其中南方红豆杉，是红豆杉 属中分布最广、生长最快的一类植物，分布在长江流 域、南岭山脉地区以及广东、广西、江西、河南、陕西 （秦岭）、甘肃、台湾等地的山地或溪谷；东北红豆杉 为红豆杉科红豆杉属常绿乔木，在我国境内天然群 体分布于东北 3 省，主要分布于吉林省境内的长白 山脉；中国红豆杉是中国特有种，主要分布于甘肃南 部、陕西南部、湖北西部、四川等地。在以前的研究 中，不同品种红豆杉中的紫杉醇及其紫杉烷类化合 物的含量已陆续报道，如陈立国[8]报道东北红豆杉 紫杉醇的含量为 0. 0275%，郑德勇[13]报道的结果却 是 0.0108%；郑德勇[13]报道南方红豆杉中的含量为 0.0125%，曾志平[14]在对不同年限的南方红豆杉进行 检测后，所得紫杉醇含量范围为 0.0046%～0.0105%； 陈立国[8]报道中国红豆杉中为 0. 0037%, 赵春芳[15] 报道 500 年生中国红豆杉各器官紫杉醇平均含量为 0.015%；甚至有的报道称不同季节采收或不同遮荫 条件可提高紫杉醇的含量[16]，等等。显然，不同测定 方法，不同红豆杉品种、甚至同一品种不同栽培场 地、同一品种的不同提取部位，其紫杉醇含量均有明 显的差异。在此，我们选择了南方红豆杉、东北红豆 杉和中国红豆杉 3 种红豆杉，在优化检测条件的前 提和统一检测条件下，对天然生长的树龄相近的 3 种红豆杉中 3 种紫杉烷类化合物进行了测定，以期 为红豆杉人工栽培品种的选育、为紫杉醇提取提供 优质的材料奠定基础。
0.396 mg·g-1、中国红豆杉为 0.350 mg·g-1；紫杉醇含量的高低依次为：南方红豆杉为 0.153 mg·g-1、东北红豆杉为 0.142 mg·g-1、
中国红豆杉为 0.0102 mg·g-1。该方法把 3 种紫杉烷类化合物：10-脱乙酰巴卡亭 III （10-deacetyl-baccatin III）、巴卡亭 III
三种红豆杉属植物中紫杉烷类化合物含量的检测与分析
朱慧芳，郑文龙，王玉亮，冯小路，周选围
（上海交通大学 农业与生物学院；复旦-交大-诺丁汉植物生物技术研发中心，上海 200030）
摘 要: 优化色谱条件，利用高效液相对天然生长的南方红豆杉、中国红豆杉和东北红豆杉枝条中的 3 种紫杉烷类物质含量
进行了检测和分析。结果表明：3 种红豆杉中，紫杉烷类化合物总含量的高低依次为：东北红豆杉为 0.427 mg·g-1、南方红豆杉为
1 材料和方法
1. 1 材料 1. 1. 1 材料 南方红豆杉 （Taxus chinensis var. mairei）采集自安徽石台县珂田乡仙寓山；中国红豆 杉（Taxus chinensis（Pilger）Rehd.）采集自 陕 西 省 佛 坪县长角坝乡沙坝村；东北红豆杉（Taxus cuspidata Sieb. et Zucc.）黑龙江省鸡西市桦木林场，采集树龄 均在 100 年左右，使用部位为枝条。 1. 1. 2 试剂 甲醇、乙睛为色谱纯、水为高纯水； 其余试剂如氯仿、石油醚均为分析纯；紫杉醇、巴卡 亭 Ш、10-DAB 标准品购自上海融禾医药科技有限 公司，纯度> 98%。