实验三+细菌的形态观察

微生物实验不同于其他生物学实验，无菌操作非常重 要，在做微生物实验的整个过程中，要树立无菌概念， 消毒、灭菌等过程要彻底，否则，实验很难成功。 要防止病从口入，养成爱清洁，讲卫生，防疾病的良 好生活习惯。
请确保油镜镜头擦 拭干净！
革兰氏染色原理
• 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 • 细菌细胞壁的结构
G+的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构 组成、壁厚、类脂含量低，经乙醇脱色细胞壁 脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性
降低，从而使结晶紫-碘复合物不易被洗脱而保
留在细胞内，呈初染液结晶紫的紫色。
G–细胞壁含肽聚糖层较薄，类脂含量高，
（2）防止细菌的扩散 细菌广泛存在于自然界，生存能力很强。在科学研究 和一般性实验中，若以细菌特别是以病原菌为材料时， 要特别小心，在接种和培养的各个环节要防止细菌扩 散，接种工具要灼烧彻底，用过的菌种要灭菌后再洗 刷，接种完毕操作人员的手要严格消毒，必要时，操 作人员要戴手套、袖套、口罩乃至采取全身性防护措 施。 （3）体会
乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，细胞壁透性增
大，使结晶紫-碘复合物易被洗脱，经番红复染
后，而使细胞染上复染液的红色。
芽孢染色的原理
细菌的芽孢壁厚、不易着色，用着 色力强的染色剂孔雀绿通过加热或延长 染色时间而使菌体和芽孢着色，已着色 的菌体水洗后可脱色，已着色的芽孢不 易被洗脱，再经番红复染后，芽孢仍保 留初染液的绿色，而菌体和芽孢囊被染 成复染液的红色。
实验三 细菌的形态观察
一、实验目的
1. 学习并掌握细菌的简单染色、革兰氏染 色以及芽孢染色法 2. 初步认识细菌的形态特征 3. 巩固油镜的使用方法和无菌操作技术
二、实验原理
简单染色原理：
微生物细胞中含有大量的蛋白质等两性电 解质：在酸性溶液中结合质子带正电；在碱性 溶液中给出质子而带负电。等电点一般在 pH=2~5。所以，在中性、碱性或弱酸性溶液中， 微生物细胞通常带负电荷。碱性染料在电离时， 染色部分带正电荷，容易与带负电荷的菌体结 合使之着色。经染色后的菌体细胞与背景形成 鲜明的对比，在显微镜下很容易观察。
三、实验材料
• 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌（24h培养物） • 革兰氏染色液一套
• 仪器及其他：显微镜、酒精灯、接种针、 载玻片等
四、实验步骤
1.简单染色（枯草杆菌）
涂片 干燥 固定 水洗 染色（结晶 干燥
紫染色1min）
镜检并绘图
枯草芽孢杆菌
2.革兰氏染色（大肠杆菌和金黄色葡
萄球菌 ） 涂片 初染：涂面上滴加结晶紫 染1分钟 水洗至无紫色 媒染: 用哥氏碘液冲去残水，覆盖涂面1分钟 水洗 脱色：滴加95%酒精流洗脱 色约30秒 立即水洗 复染： 滴加番红染液染3分钟 水洗后用 吸水纸吸干 镜检：观察染色结果 并绘图。
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
3 枯草杆菌芽孢的观察
芽孢染色步骤
预习下次实验的准备

放线菌的插片培养
接种位臵
上次实Βιβλιοθήκη Baidu习题解答
通过本次实验，在防止培养基的污染与防止细菌 的扩散方面，你学到些什么？有什么体会？
(1) 防止培养基的污染 培养基营养丰富，微生物无时不在，无处不有，已 灭菌的培养基，要防止试管塞、瓶塞脱落，一旦脱落 或松动，都可能导致培养基污染；另外试管塞、瓶塞 要用双层不报纸扎紧，以防脱落；已裂口的试管、三 角瓶或其他器皿，不能用作制备培养基的容器。
• 制片（涂片、干燥、固定） 染色（孔雀绿
加热染色5min或静止延长染色20 min）
水洗脱色
番红复染5min
水洗
干燥后镜检绘图
五、实验结果
• 绘制两种菌革兰氏染色结果
• 绘制枯草杆菌芽孢染色结果
六、问题与讨论
1.要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操 作？哪一步是关键？为什么? 2.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪 些环节？ P28，2（1） 3.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？ P28，2（2） 4.说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观 察到细菌芽孢？P 32，2（1）