淀粉糊化度测定

淀粉糊化度测定自：

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C h i a n g a n d J o h n s o n,2007-09-07

试剂：

1.联甲苯胺（o-T o l u i d i n e）试剂：溶解 1.5g硫脲于940m l冰醋酸，

家60m l甲苯胺，存于有色玻璃瓶中。

2.乙酸钠缓冲液：溶解 4.1g无水乙酸钠与1L蒸馏水，用乙酸调p H

至 4.5。

3.葡萄糖淀粉酶溶液：将2g根霉葡萄糖淀粉酶（目录号

N o.A-7255,S i g m a C h e m i c a l C o.供货）分散于250m l乙酸缓冲液，用玻璃棉滤纸（W h a a t m a n N o.G F/A）迅速过滤，限2小时内使用。葡萄糖淀粉的特异活性是在p H4.5，温度40℃下生成28.4u m o l葡萄糖/m i n/m g蛋白。

操作规程：

1.制备淀粉部分糊化的样品。将20m g样品分散于50m l离心管中的

5m l蒸馏水中。

2.制备淀粉完全糊化的样品。将20m g样品分散于50m l离心管中的

3m l蒸馏水和1m l1N N a O H中。5分钟后加1m l1N H C l。

3.葡萄糖淀粉酶水解和测定葡萄糖。每个离心管加250m l葡萄糖淀粉酶溶液，40℃保温30m i n。加2m l25%的三氯乙酸钝化葡萄糖淀粉酶（并使该酶和其他蛋白沉淀），以16,000×g离心5m i n。

4.取0.5m l上清液于试管中，加入 4.5m l联甲苯胺（o-T o l u i d i n e）试剂，将试管置沸水中10m i n，用冷水冷却，加5m l冰醋酸，测定在63.n m 的吸收率。

按下式计算淀粉糊化度：

Y=100*（B-K）/(A-K)

K=A*(C-B)/(A-2B+C)

其中，A=全糊化淀粉的吸收率；

B=全糊化淀粉和经过30m i n的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率；C=部分糊化淀粉和经过60m i n的酶水解的完全淀粉混合物的吸收率；

K= 1%完整淀粉经过30m i n水解后的吸收率。这对每种淀粉或特定处理的淀粉是一个常数，常规分析中只需测=定一次。

这规程也可用来计算总淀粉%；用葡萄糖溶液（720u g/m l）制定标准曲线。按前法第

2步和第3步骤处理样品，根据标准曲线读取葡萄糖浓度。按下式计算淀粉含量：

淀粉总量%=葡萄糖*0.9*100/样品重（干基）