糖酵解中间产物的测定
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华南农业大学实验报告
专业班次 11农学一班组别201130010110
题目糖酵解中间产物的测定姓名梁志雄日期
【实验原理】
利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用,使3-磷激甘油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂,用来保护3-磷酸甘油醛使不自发分解。然后用2,4—二硝基苯肼与3-磷酸甘油醛在碱性条件下形成2,4—二硝基苯肼—丙糖的棕色复
合物,其棕色程度与3-磷酸甘油醛含量成正比
【实验材料和试剂】
实验仪器:恒温水浴锅、离心机、电子天平
实验用品:试管、移液管、玻璃棒
实验材料与试剂:酵母、10%三氯乙酸、5%葡萄糖、0.75mol/L NaOH、0.002mol/L
碘乙酸、2,4-二硝基苯肼溶液、0.56mol/L硫酸肼
【实验步骤】
1、发酵过程观察取干燥试管3支,编号1~3,分别加入0.2g酵母,再按下表所示加入试剂
37摄氏度保温时用留在试管中的玻璃棒间断搅拌1~2次。
2、终止发酵和补加试剂 37摄氏度保温45min后,按下表所示添加试剂
表二
3、发酵液过滤上述3支试管分别过滤,取滤液用于显色鉴定
4、显色鉴定取3支试管,按下表所列顺序加入试剂,观察各管颜色的深浅,记录
【实验记录】
实验记录与上述表格中
【实验结论】
1、在步骤1中,三氯乙酸是一种蛋白酶的变性剂,可以是酵母中的所有的酶失活,
使糖酵解反应无法或只可很小程度上进行。在表一的1号试管中,由于加入了
三氯乙酸,使酵母中的酶失活,不能分解葡萄糖,所以不能产生气泡;至于2
号试管,由于加入了碘乙酸和硫酸肼,使糖酵解反应过程中的3-磷酸甘油醛累
积,但是它门不能使反应完全停留在生成3-磷酸甘油醛这个阶段,碘乙酸和硫
酸肼只是起到了延缓的作用,所以还是有部分葡萄糖被酵母菌分解生成CO2和
H2O,3号试管中做为空白对照,葡萄糖被酵母菌分解,产生大量CO2和H2O 2、步骤2中,在表二的2号和3号试管中分别加入三氯乙酸是让两试管中的葡萄
糖分解反应终止,加入试剂后立刻用玻璃棒搅拌是因为酶的作用很迅速;
3、步骤4的表四中,两次加入氢氧化钠主要都是为了使反应环境为碱性,使目的
反应可以发生