蔗糖酶活力测定

一、目的

了解植物组织中提取蔗糖酶的方法，掌握蔗糖酶活力测定的原理。二、原理

本实验以Nelson 方法测定酶活力，其原理是：蔗糖酶可将非还原性的蔗糖水解为葡萄糖和果糖，而葡萄糖作为还原糖含有的自由醛基，在碱性溶液中将Cu 2+ 还原，还原糖本身被氧化成羟酸；砷钼酸试剂与氧化亚铜生成蓝色复合物（砷钼蓝），在510nm 波长下有正比于还原糖浓度的光密度，从而确定蔗糖酶的活力，该法测定的范围为25~200μg。

三、主要仪器及试剂

四、操作步骤

1．标准曲线制作

（1）取9 个具塞试管，按表1 加样：

（2）向每管中加1mL Nelson 试剂，盖上塞子，置沸水浴中20 min。冷至室温，向每管中加1 mL 砷钼酸试剂。

（3）5 min 后，向每管中加7mL 蒸馏水，混匀。

（4）在510 nm 下测定光密度，以还原糖葡萄糖为横坐标，以OD510nm 值为纵坐标，制作标准曲线。

2．酶活力测定

取2g 小麦苗，加入2mL 乙酸缓冲液，在冰浴中用研钵研磨成糊状，12 000r/min 离心10min，留取上清液用于酶活测定。取2 支具塞刻度试管，向每个试管中加入乙酸缓冲液0.8ml，0.5 mmol/L 蔗糖溶液0.2mL，适当稀释的酶液1mL，以同样处理但不加酶液者为空白对照，室温下放置10min。然后向每管中加1mL Nelson 试剂，置沸水

浴中20min。冷却至室温，向每管中加1mL 砷钼酸试剂，5min 后，向每管中加7mL 蒸馏水，510 nm 下比色，测定光密度OD510nm。五、实验结果

活力计算：在室温、pH4.5 条件下，每分钟水解产生1μmol 葡萄糖所需的酶量，定义为酶的1 个活力单位（U）

酶活力的影响

教师：XXX

实验类型：基础

学时：10(参考)

内容：

一、实验目的

初步掌握用正交表设计实验方案并用数理统计方法处理实验数据的步骤和注意事项。

二、实验原理

酶的催化作用受多种因素的影响。欲求某因素对酶活力的影响，通常是固定其它因素，测定该因素不同水平下的酶活力。这是将多因素化

为单因素处理的简单比较法。

三、试剂与器材

分光光度计、恒温水浴、秒表、沸水浴等。DNS试剂、pH4.6 0.2ml/L 的醋酸buffer、0.2mol/L蔗糖液、各种pH缓冲液

四、操作方法

①讲授正交实验设计法的基础知识及使用注意事项

②用正交表进行实验并对实验结果进行极差分析和方差分析

③求出蔗糖酶的最适温度和最适pH值

五、关键步骤与注意事项

①被考察因素以外的实验条件必须保持稳定

②方差分析的计算要用电脑编程

六、思考题

1、设计试验方案时，应遵循的原则是什么？

2、正交试验设计法与简单比较法、全面试验法相比较，有何优缺点？提示：本文用正交实验设计法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响属于实验设计文章，主要