水稻成熟胚不同接种方式对愈伤组织诱导的影响

河北农业科学,2009,13(5):34-36,85

J ou rnal ofH eb eiAgri cu lt u ral Sciences

编辑 白瑞霞

水稻成熟胚不同接种方式对愈伤组织诱导的影响

吕孟雨,王海波*

,高义平

(河北省农林科学院遗传生理研究所,河北省植物转基因中心,河北石家庄 050051)

摘要:采用4种不同的接种方式,对3个水稻品种的成熟胚进行了愈伤组织诱导试验。结果表明:在胚上纵切1刀,将种子接种在培养基上的接种方式,愈伤组织诱导率最高、出芽率最低,且愈伤组织质量最好,可以在短时间内获得大量胚性愈伤组织,建立悬浮系,其愈伤组织在较短的时间即可分化出再生植株,是1种简单、方便、效果好的诱导水稻愈伤组织的理想方法。关键词:水稻;成熟胚;接种方式;组织培养

中图分类号:S511 文献标识码:A 文章编号:1008 1631(2009)05 0034 03E ffects of Inocu l ation M et hods of R ice M ature E m bryo on Callus Induction LV M eng yu ,WANG H a i bo *

,GAO Y i pi ng

(Institute of G enetic and Physiology of H ebei A cade m y of A gri cult ure and Forestry Sci ences ,H ebe i Center of P lant G e net i c T ransfor mation ,Shijiazhuang 050051,China)

Abstract :T he m ature e mbr yos of three rice variet i es were i noc ulated by four m ethods for callus induct i on The results sho w ed that the i noculat i on m et hod of cutt i ng the e mbr yo and inoculati ng the seed on the m ediu m was a ideal m ethod for i nducing rice callus easil y ,conveniently and effect i vely w ith the highest callus i nduction r ate ,the lo west shooti ng rate

and the best callus A lar ge number of e mbryogenic calli could be obtained and t he plants could be regener ated i n a short

t m i e usi ng th i s m ethod

K ey words :R ice ;M ature e mbryo ;

I noculat i on m ethod ;T i ssue c ulture

收稿日期:

2009 04 15

作者简介:吕孟雨(1963-),男,河北晋州人,研究员,硕士,主要从事生物技术研究。

通讯作者:王海波研究员,博士。

关于水稻组织培养,前人有过许多研究,已有用根尖、节、盾片、叶鞘、胚芽鞘、花药、胚囊、幼胚、叶片和幼穗等[1]组织成功进行离体再生培养的报道,但上述取材多受季节和环境限制,难以满足常年试验的要求。越来越多的研究者开始以水稻成熟种子作为受体材料,期待从成熟种胚中诱导出高质量的愈伤组织[2]

。郑

文静等

[3]

以成熟胚、幼胚、幼穗及花药为外植体,进行

水稻组织培养,考察同种培养条件下4种外植体的愈伤组织诱导率和诱苗率,并调查各种方法所获后代的有利变异率,结果显示,以成熟胚为外植体时,愈伤组织诱导率最高。以有生活力的成熟种子进行培养,由于在选择培养时间上具有较大的灵活性,在操作上也具有简便性,因而应用得较多

[1]

。水稻遗传转化主要以具有强增

殖能力和高分化能力的愈伤组织为受体转移外源有利基因,因此,建立高效、稳定的组织培养转化体系是遗传转化的首要环节和重要基础[1,4~6]。一般随继代培养时间的延长,植物愈伤组织再生植株变得困难且变异比例提高。建立快速、高效的愈伤组织诱导方法,可以随时提供大量优质的试验材料,以便进行植物转基因、原生质体培养和诱变等试验。

毛建军等

[7]

研究比较了N 6、M S 和NB 培养基在日

本晴成熟胚组织培养中的效果,结果表明,3种培养基中,NB 培养基对愈伤组织的诱导效果最好,转化效率最高,获得了转基因水稻植株。针对以往利用水稻成熟胚为外植体诱导愈伤组织时,均采用直接接种消毒的种子或接种剥离的完整胚,诱导愈伤组织

[1~3,5,7~16]

,本研

究增设2个切胚处理的接种方式,对3个水稻基因型进行愈伤组织诱导和植株再生试验,通过分析比较不同成熟胚接种方式的愈伤组织诱导率和愈伤组织质量,旨为了解水稻成熟胚离体培养的表现特点与规律,以寻找高效诱导胚性愈伤组织的方法,为方便、快捷、大量建立水稻体细胞无性系奠定基础。

1 材料与方法

1 1 试验材料

供试材料为中花11号、中花15号和日本晴3个水稻品种的成熟种子。1 2 试验方法

1 2 1 外植体消毒 选择成熟、饱满、无病斑的水稻种子,剥去颖壳。在超净工作台上用0 1%的H g C l 2溶液表面消毒15m i n ,无菌水漂洗5次。用镊子和解剖刀取出种子或成熟胚,将其接种于诱导培养基上,每个三角瓶接种10粒种子或成熟胚,重复3次。1 2 2 接种方式 采用4种接种方式:

(1)用解剖刀

在胚上纵切1刀,将种子接种在培养基上(处理 );(2)用解剖刀将成熟胚从种子上剥离,再用解剖刀切