三氯乙酸浸提的总氮测定方法

附录A三氯乙酸浸提的总氮测定方法

A.1 原理

利用三氯乙酸作蛋白质沉淀剂，将酶解饼粕中的蛋白质和肽链较长的肽沉淀，并将其中的活性小肽和游离氨基酸用酸溶解出来，经离心、过滤、消化、蒸馏、用凯氏定氮法测水溶性总氮。

A.2 试剂及仪器

100ml烧杯，20ml移液管，30ml量杯，干过滤装置，15%三氯乙酸溶液（TCA溶液），4000 r/min的离心机。

A.3 方法

A.3.1 将待测样品经过研磨过80目筛，准确称取样品3.6g于100ml烧杯中，加入15%（三氯乙酸）溶液30ml，混合均匀。将溶液转入100ml容量瓶内定容，在4000 r/min下离心10 min 后，取全部上清液，用干的滤纸过滤，同时设定空白。

A.3.2 取滤液20ml置于1000ml烧瓶内，加浓硫酸15ml，置于消化炉上小心加热，待泡沫消失后加热270℃～320℃之间，消煮两小时后，冷却后每半小时滴加双氧水1ml左右，直至溶液透明为止，继续加热两小时，冷却备用。取50ml的2%硼酸溶液加入指示剂2～3滴吸收液。往1000ml烧瓶内加400ml水，再加入40%NaOH溶液150ml，塞好瓶盖，在密闭条件下蒸馏至馏出液为中性时取下吸收器（一般吸收液到150 ml～200ml时为中性）。

A.3.3 吸收液用0.1mol/L盐酸标准溶液滴定变红为终点，记录消耗的体积，同时测定空白。然后计算出总氮的含量。

A.3.4 三氯乙酸浸提的氮数值以%表示，按公式(A.1）计算：

C(V-V0)×0.014×100×5

三氯乙酸浸提的氮（%）=--------------------------------……………………………(A.1）

M×（1-N）

式中：

V——滴定样品消耗盐酸的体积，ml

V0——滴定空白消耗盐酸的体积，ml

C——盐酸的标准浓度，mol/l

0.014——和1.0ml盐酸标准液相当的氮的质量，g

5——样品吸取倍数

M——样品质量，g

N——样品的含水量。