高效液相色谱_串联质谱法直接定量分析植物酵素中多种氨基酸成分_郑重
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2015年3
月Ｖｏｌ．33Ｎｏ．3
Ｍａｒｃｈ2015
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
309 313
技术与应用
ＤＯＩ：
10．3724／ＳＰ．Ｊ．1123．2014．10010*通讯联系人．Ｅ－
ｍａｉｌ：ｌｉｕｚｑ＠ｃｉａｃ．ｊｌ．ｃｎ．基金项目：吉林省重点科技发展计划项目（20120901）；吉林省与中国科学院科技合作高技术产业化专项资金项目
（2013ＳＹＨＺ0008）．
收稿日期：
2014－10－20高效液相色谱－串联质谱法直接定量分析
植物酵素中多种氨基酸成分
郑
重1
，孙
琦3，石永伟2，曲佳乐2，宋凤瑞1，刘志强
1*（1．中国科学院长春应用化学研究所国家质谱中心（长春）
＆吉林省中药化学与质谱重点研究室，吉林长春130022；
2．吉林敖东大高酵素有限公司，吉林延边133700；3．吉林敖东药业集团股份有限公司，吉林延边133700）
摘要：利用高效液相色谱－串联质谱（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）方法直接分析植物酵素中多种未衍生化的氨基酸。样品用甲醇稀释5倍，超声提取30ｍｉｎ，离心10ｍｉｎ（速度为10000ｒ／ｍｉｎ），取上清液分析。采用色谱柱ＶｅｎｕｓｉｌＡＳＢＣ18（
250ｍｍˑ4.6ｍｍ，5μｍ）分离，以甲醇－乙酸－水混合溶液为流动相体系进行梯度洗脱，流速为0.5ｍＬ／ｍｉｎ，质谱喷雾电压为3ｋＶ，离子源温度为150℃，
去溶剂温度350℃，去溶剂气体流速为800Ｌ／ｈ。碰撞气氩气的流速保持压力为0.17Ｐａ。以被测物的提取离子流图峰面积进行定量，该分析方法的线性范围为0.5 200μｍｏｌ／Ｌ（ｒ2＞0.99），回收率为86％ 110％，
可对植物酵素中16种氨基酸成分进行定量分析。该方法操作简便快速、准确可靠，还适用于食品、药品及天然产物中多种氨基酸成分的定量分析。关键词：高效液相色谱－串联质谱；未衍生化氨基酸；植物酵素
中图分类号：Ｏ658文献标识码：Ａ文章编号：
1000－8713（2015）03－0309－05Ｄｉｒｅｃｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄｂｅｖｅｒａｇｅｏｆｐｌａｎｔｅｘｔｒａｃｔｕｓｉｎｇｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ
ＺＨＥＮＧＺｈｏｎｇ1，ＳＵＮＱｉ3，ＳＨＩＹｏｎｇｗｅｉ2，ＱＵＪｉａｌｅ2，ＳＯＮＧＦｅｎｇｒｕｉ1，ＬＩＵＺｈｉｑｉａｎｇ1*
（1．ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｉｎＣｈａｎｇｃｈｕｎ＆ＪｉｌｉｎＰｒｏｖｉｎｃｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＣｈａｎｇｃｈｕｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｐｐｌｉｅｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ130022，Ｃｈｉｎａ；2．ＪｉｌｉｎＡｏｄｏｎｇ－ＯｈｔａｋａＥｎｚｙｍｅＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｙａｎｂｉａｎ133700，Ｃｈｉｎａ；
3．ＪｉｌｉｎＡｏｄｏｎｇＭｅｄｉｃｉｎｅＩｎｄｕｓｔｒｙＣｒｏｕｐＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｙａｎｂｉａｎ133700，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒｕｎｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄａｍｉｎｏａｃｉｄｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄｂｅｖｅｒａｇｅｏｆｐｌａｎｔｅｘｔｒａｃｔ．Ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｄｉｌｕｔｅｄｗｉｔｈｍｅｔｈａｎｏｌｆｏｒｆｉｖｅｔｉｍｅｓ，ｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｖｉｂｒａｔｉｏｎｆｏｒ30ｍｉｎ，ａｎｄｈｉｇｈ－ｓｐｅｅｄｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅｄｆｏｒ15ｍｉｎａｔ10000ｒ／ｍｉｎ．Ｔｈｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｗａｓｓｅｐａｒａｔｅｄａｎｄｄｅｔｅｃ－ｔｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）．Ｔｈｅｃｈｒｏ－
ｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｌｕｍｎｗａｓＶｅｎｕｓｉｌＡＳＢＣ18（250ｍｍˑ4.6ｍｍ，5μｍ）．Ｔｈｅｅｌｕｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄａｔａｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ0.5ｍＬ／ｍｉｎｕｓｉｎｇｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｓｏｆｍｅｔｈａｎｏｌ－ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ－ｗａｔｅｒｍｉｘｔｕｒｅ．ＴｈｅＭＳｄｅｔｅｃ－ｔｏｒｗａｓｓｅｔａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｉｏｎｓｏｕｒｃｅｖｏｌｔａｇｅ3ｋＶ，ｉｏｎｓｏｕｒｃｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ150℃，ｓｏｌｖｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ350℃，ｇａｓｆｌｏｗｒａｔｅ800Ｌ／ｈ．Ｔｈｅｃｏｌｌｉｓｉｏｎｇａｓｗａｓａｒｇｏｎｗｉｔｈａｐｒｅｓｓｕｒｅｏｆ0.17Ｐａ．Ｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎａ－ｎａｌｙｓｉｓｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｗｉｔｈｐｅａｋａｒｅａｉｎｅｘｔｒａｃｔｅｄｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ．Ｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｉｅｓｗｅｒｅａｃｑｕｉｒｅｄｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ0.5－200μｍｏｌ／Ｌ（ｒ2＞0.99）ｆｏｒｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｗｅｒｅｂｅｔｗｅｅｎ86％ａｎｄ110％．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅ16ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔｅｄｂｅｖｅｒａｇｅｏｆｐｌａｎｔｅｘｔｒａｃｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｉｎｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓａｍｐｌｅｓｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｓｏｆｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，ｆｏｏｄａｎｄｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ．