平面色谱法hjt

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Rapid determination of thermo-stability of phospholipids by TLC
1.Thin-layer chromatography of standard PL samples Fig.1
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方便。 5．应用：药物杂质检查、纯度测定、定性及定量等。
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第五章 平面色谱法
• 定义：平面色谱法(plane chromatography)是在平面上 进行分离的一种色谱方法。
• 一、平面色谱法的分类和原理
分类
▪ 纸色谱法：滤纸为载体，纤维素的羟基与水结合形成液-液分配色谱 固定相，展开剂由于毛细作用沿滤纸向上运动。---分配色谱
▪ 薄层色谱法：将吸附材料均匀固定在载板上，由于吸附剂颗粒间的
• 1、理论塔板数 N=16(ds/W)2 ds:原点到斑点中心的距离 W：组分斑点的纵向宽度 • 2、塔板高度 H=ds/N=(Rf L)/N ds：原点到展开剂前沿的距离 N越大，H越小。
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（三）容量因子k’与比移值Rf的关系
• 容量因子： k’=ts/tm
ts 、 tm 分别为组分在固定相和展开剂中的保留时间
Description: The thermo-stability of phospholipids and lysophospholipids was determined by one dimensional thin-layer chromatography (TLC). A chloroformmethanol-28% aqueous ammonia solvent system (65:35:8, v/v) provided clear separation of major phospholipids (PL) and their lyso forms. The 5% (w/v) dodecamolybdophosphoric acid solution in ethanol was used as spray reagent. The thermo stability of phospholipids was evaluated by compare the spots density and area of PL samples with varying heat treatment.
第五章 平面色谱法
第一节 概 述
• 1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天 然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一 书，推动了这一技术的发展。
• 因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高，结果 直观，很快被用作定性和半定量的方法。
• 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展 了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪器化，并 实现了计算机化。
毛细作用，展开剂（流动相）上行。
-----吸附色谱
▪ 薄层电泳法：荷电组分样品负载于惰性支持介质（纸、纤维素、聚
丙烯酰胺凝胶等），在电场作用下进行分离。
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二、平面色谱法的基本流程
• 确定样品的预处理方法 • 选择吸附剂和展开剂 • 制备层析用薄板 • 点样 • 层析分离 • 显色 • 定性或定量分析 • 分析结果，给出结论
可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性；
• 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分
• 相对比移值Ris与组分、参考物性质及色谱条件有关，范 围可以大于或小于1
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（二）面效参数
与展开剂的速率常数、组分在展开剂中的扩散系数、吸附剂的平均 粒径及其粒度分布等因素有关。
保留值的定义：
Rf
tm ts tm
Rf
1 1 k'
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（四）分离参数
1、分离度(resolution; R) 两相邻斑点中心的距 离与两斑点平均宽度的比值 R=2(ds2-ds1)/(W1+W2) =2d/(W1+W2)
• ds1 、ds2 :分别为原点至两半斑点中心的 距离， W1、W2斑点的宽度。
一般薄层板的分离数为 7~10，高效薄层板可达10~20。SN是衡量分 离容量的重要参数。
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第二节 薄层色谱法
Thin Layer chromatography TLC
• 一、主要类型 • 二、吸附剂与展开剂 • 三、操作方法 • 四、定性与定量分析 • 五、高效薄层色谱法 • 六、薄层扫描法 • 七、应用实例
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三、平面色谱法参数
（一）定性参数 1. 动比相移移值动Rf距(r离eta之rd比ation factor; Rf) 溶质移动的距离与流
Rf
原点到组分斑点质量中心的距离
原点到溶剂前沿的距离
ds L
Rf范围：
0< Rf <1 Rf = 0.2~0.8（常用） Rf = 0.3~0.5（最佳）
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2.分离数(separation number; SN)
定义：相邻斑点分离度为1.177时，在Rf=0(原点)到Rf=1(溶剂前沿)之 间能容纳的色谱斑点数。
SN
L
1
W( 1 )o
W (
1
)1
2
2
W(1/2)0, W(1/2)1为实验测得的某组分色谱峰的半峰宽对ds作图外推至在原点处 和溶剂前沿处的半峰宽。
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概述
1．TLC定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法
2．操作过程： 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量)
3．分离机制：吸附* 、分配*、离子交换、空间排阻 4．特点；分离能力强、灵敏度高、展开时间较短、显色
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Rf1
d s1 L
L
ds2
ds1
Rf 2
ds2 L
图18Βιβλιοθήκη Baidu1
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2. 相对比移值Ris
Ris
R f（i） R f（s）
原点到组分斑点质量中心的距离 原点到参考物斑点质量中心的距离
di ds
✓ 讨论
• 参考物与被测组分在完全相同条件下展开