细胞房的使用和操作规范 - 复件

细胞房的使用及操作制度
一、操作人员制度
1.新进细胞房操作前，必须首先了解细胞培养的基本要求，进行必要的培训。

培训考核合格后授予其细胞室使用权限。

2.为保持无菌室清洁，进入无菌室必须在缓冲间更换专用拖鞋、工作服、戴好
帽子和口罩。

3.进入细胞间后随手关门。

缓冲间拉门与无菌室拉门不能同时开放，否则失去
缓冲间作用。

4.无菌室室内禁止不带口罩开口说话，禁止大声喧哗。

5.专用工作服、拖鞋禁止在室外穿用，定期清洗并消毒，请勿将其带出无菌室。

6.个人配制的试剂需标明试剂名称、配制日期及配置人，冰箱内试剂摆放位置
都要固定化，并作好标记。

禁止交叉乱用，乱放，造成可能的污染扩大，所有人员未经本人许可不得使用他人的物品和位置。

7.个人用灭菌物品必需注明消毒人、物品名称、消毒日期。

灭菌后物品放在指
定位置，高压灭菌物品可存放7-14天，过期不能再用，需重新包装灭菌。

二、无菌操作
1.实验人员的无菌准备
1)实验前应用肥皂洗手。

2)更换专用拖鞋、工作服、戴好帽子和口罩。

3)75%酒精消毒手掌、手背。

2.操作台中的无菌操作(此处为操作考核中需要注意的要点内容)
1)生物安全柜使用前用经紫外照射灭菌30分钟，实验人员打开通风在通风
条件下进行实验操作。

2)在通风条件下，先点燃酒精灯（点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，
液面应占瓶高1/3-2/3），再用酒精棉擦拭超净台桌面（尽可能的大于自己所用台面），同时保持工作区域的宽敞。

注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%以上的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。

3)超净台虽经紫外照射除菌，但操作时仍应靠近酒精灯火焰。

4)操作时应尽量减少手臂的运动，尽可能避免左右手交叉（近手操作）：把
需要有用的工具和试剂尽可能放在手边，以酒精灯为界，左手用的东西放在酒精灯的左边，右手用的东西放在右边。

例如，一个右手操作者要从试剂瓶里吸取液体，则移液枪应放在右手，而枪头与试剂瓶都应放在左手边。

5)带入操作台中的物品，应注意：经高压灭菌烘干的物品以及各种装培养基、
缓冲盐等的瓶子、试管架、胶塞等应先用75%酒精擦拭或喷洒后再放入超净台。

进入操作台操作前的手掌手背以及将要放入培养箱的培养瓶，培养板和培养皿都应用喷洒75%酒精。

6)要养成用镊子操作的习惯：拿取饭盒中的各类物品，尽可能用镊子去夹取；
对于小的物品，如瓶盖、枪头、EP管，应避免用手直接去拿取。

7)保持试剂瓶与桌面成约45℃时打开盖子或移取液体：这样可以尽量减少
空气的污染以及在移液时产生最少的气溶胶。

8)在打开试剂瓶、拿取瓶盖、镊子及玻璃移液管等时都要用火烧下：灼烧不
是为了灭菌，只需在火焰上燎1~3秒即可。

灼烧一下瓶口和移液管等，使颗粒固定在表面和制造一个向上的气流，以减少掉落颗粒的数量。

培养基等试剂长时间不用时需要盖上瓶盖。

9)打开的瓶子，应放在酒精灯火焰旁，瓶盖反放朝上。

禁止在打开试剂瓶包
括瓶盖的正上方进行实验操作（包括跨越敞开的开试剂瓶上方去拿取东西）。

禁止手触碰到瓶口或瓶盖。

10)将移液枪头中的液体打入培养瓶和离心管时应是悬空打入。

将培养瓶中
的液体倒入废液缸以及将枪头打入废液缸时，培养瓶和枪头需要与废液缸保持一定的距离。

当枪头的尖端碰触到任何非灭菌物品包括瓶口螺纹的外缘时，必须重新换取新枪头。

当液体泼溅时应该立即用75%的乙醇擦拭该区域。

11)用PBS清洗细胞后需用移液枪吸净培养瓶中剩余的PBS，以免造成对胰
酶的稀释；加入培养基终止胰酶消化后也需用移液枪吸净培养瓶中剩余的培养基以减少胰酶对细胞的损伤。

12)实验结束后，将操作台中的个人物品拿出操作台，并将公共物品摆放整
齐，用酒精棉擦拭桌面，将废液缸中的废弃物倒入垃圾桶，向废液缸内喷
入酒精消毒后放入操作台内。

打开安全柜的紫外灯。

3.培养箱的使用规则
1)培养箱专供细胞培养用，严禁放入其他物品，以防污染。

2)从培养箱取放物品前，用75％酒精清洁双手（或手套）。

培养瓶皿放入
培养箱前，用75％酒精消毒表面，尽量缩短开门时间和减少开门次数。

当培养箱的门处于打开状态时禁止说话。

3)细胞培养板或培养皿请勿堆砌过高，以防打翻。

从培养箱拿取细胞时轻
拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。

未经允许，禁止翻看、移动他
人细胞或样品，如有特殊需要的，请联系实验室负责人协调。

4)如不慎有培养基洒出，需及时清理消毒并更换底部托盘中的灭菌水，以
防污染，同时通知仪器负责人。

5)普通培养中的细胞，若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生
长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。

6)原代细胞需放置在原代培养专用培养箱培养，不得放置于其他培养箱。

7)培养箱在使用时，室内温度要保持在28℃以下，特别是夏天需要24小
时开空调，否则设备会超温报警。

二氧化碳气瓶分压阀的读数应为
0.04-0.06；二氧化碳气瓶总阀正常读数为5-6，低于该数值说明余量不多，
需尽快更换新的气瓶；未经允许请勿调节安全阀。

8)如果报警显示Add Water，表示设备里的水套缺水，应用蒸馏水并使用附
件提供的漏斗一直加到设备不报警为止，如果显示Replace HEPA，只是
提醒需要更换箱内高效过滤器，不是表示设备有问题，如果不想更换可
以照常使用。

9)实验人员应经常注意检查培养箱温度、CO2气体量是否相符设定值。

密
切注意培养箱内的增湿盘，定期更换无菌水并进行消毒。

密切注意培养
箱内情况，如出现霉变、菌斑、支原体和衣原体感染或其他明显染菌迹
象，应立即通知管理员及其它使用者。

4.显微镜使用规则
1)显微镜使用前应保持载物台的清洁。

2)使用显微镜观察完细胞后，应将显微镜的灯泡亮度开到最小。

离开细胞
房时或较长时间不需使用时，应及时关上电源，延长灯泡寿命。

尽量避
免频繁开关显微镜电源。

5.冰箱、试剂等相关操作规则
1)从冰箱取放物品动作要迅速，关门时要检查门是否关好。

严禁长时间敞
开冰箱门。

2)各人存放于冰箱内的培养液、生化试剂、样品要注明姓名、配制日期、
样品名称，特殊试剂需获得细胞房管理人员同意后方能放置。

不得使用
他人的培养液或其他生化试剂。

3)分装好的血清长时间保存于-20℃，使用前放于4℃预解冻。

原则上解冻
好的血清应全部配成含血清的培养基备用，若有剩余，则暂存于4℃并
尽快使用。

尽量不要使用他人开过的血清，以免交叉污染。

4)细胞室内的冰箱空间有限，尽量仅放置使用频率较高的试剂。

请勿将
一些闲置试剂，污染试剂长期放置在细胞室。

5)工作人员会定期对冰箱进行清理，发现未封口、无标记、过期试剂等
违规物品将全部清除出去，并且查找试剂配置人给予警告。

6.进入细胞室物品控制
1)所有进入细胞室的物品需经过灭菌处理，酒精表面消毒。

2)严禁将可能含有污染物或病原菌的实验物品带入细胞室。

3)细胞室内仅放置少量实验必须耗材即可，不得整箱搬入，出现洁净室内
物品堆积状况。

4)细胞室内储物柜的物品放置由相关管理人员安排，并做标记。

三、细胞培养、换液、消化传代
每个人在第一次接触一种新的细胞株时，应对其细胞形态、生长速度有个明确的认识，这个过程可能需要一周左右（指熟练的人）。

细胞形态的观察可以先参考一些资料，比如ATCC网站上或一些文献中的照片。

体外培养的细胞，按其生长方式主要分为贴壁细胞与悬浮细胞两大类。

这两大类细胞在细胞换液与传代时的方式截然不同。

1.培养基颜色的观察
培养基的pH直接影响到细胞的生长状况，大多数细胞的最适pH为7.4左右。

pH6.5以下为柠檬黄
pH6.5为黄色
pH7.0为橙色
pH7.4为红色
pH7.6为酚红
pH7.8为紫色
2.血清的使用
血清可以提供细胞生长所必需的生长因子和营养元素。

我们常用的血清为小牛血清，培养基中血清的浓度为10%。

具体选择什么样的血清及血清的浓度，应根据细胞生长的特点而定，有些细胞可能需要胎牛血清，而有些细胞特别是转化后的细胞，对于血清的需要量是很低的，在0.5%左右。

A：血清一般在-20℃保存；
B：体积较大的血清，融化后应分装后，-20℃保存；
C：对于未灭活的血清，在常温下溶解后，56℃水浴中灭活30min，再分装于-20℃保存。

3.细胞换液
细胞何时换液，依赖于细胞生长速度、细胞密度等。

一般情况下，2~3天更换一次。

同时也可以根据培养基的颜色进行判断。

培养瓶从孵箱中拿出来后，最好竖立着放，不要平放（培养基易冲出瓶盖，导致染菌），包括在超净台中的操作。

1)贴壁细胞
A:倒掉旧的培养基；
B:用PBS清洗：加入PBS，轻轻摇荡，倒掉（这步并非必须的，
视细胞生长情况而定，一般在消化传代后第一次换液时，最好用
PBS清洗）；
C:加入新的培养基（一般中小号培养瓶，4~6ml左右）。

2)悬浮细胞
A:培养瓶中培养基不多时：直接加入新培养基（培养瓶可以竖立着
放）；
B:培养瓶中培养基过多时：将细胞连同培养基一起转移到离心管中，
1000rpm，5min；倒掉上清液，加入新的培养基到离心管中，吹打
成细胞悬液，转移到培养瓶中继续培养。

4.细胞消化传代
贴壁细胞一般采用消化传代法；部分贴壁生长细胞（半贴壁细胞）可直接吹打即可传代；悬浮细胞可采用直接吹打或离心后传代。

贴壁细胞：
A：倒掉培养基；
B：加入PBS清洗（必须，清洗掉含血清的培养基，一方面可以节约消化液，又能尽快的消化细胞，并且好控制消化时间）；
C：加入消化液以覆盖住细胞为准，不宜过多，37℃孵箱中消化3~5min左右；
D：显微镜下观察，发现细胞质回缩、细胞间隙增大后（细胞变圆），立即加入2ml含血清的培养基终止消化，弃去；
E：重新加入2ml含血清的培养基，用移液管或移液枪吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，吹打时应从瓶底一边开始到另一边，
以确保瓶壁上细胞均被吹打下来。

（吹打不宜过猛，避免过多的泡
沫形成）
F：吹打均匀，细胞计数后，吸取合适数量的细胞悬液，至新培养瓶中，再补足培养基（50ml培养瓶可加4-6ml培养基）。

悬浮细胞：操作同上述悬浮细胞换液，仅是在细胞计数后，将合适数量的细胞悬液，分配到新培养瓶中。

注意：不应待细胞长得特别满的情况下，消化细胞，因为这时细胞的活力并非最好。

应选择在对数生长期的细胞（密度大约为80%-90%）进行消化传代或冻存。

四、细胞计数
1.血球计数板的使用
血球计数板一般有二个小室，每个室中细刻9个1mm2大正方形（见下图），其中上下左右4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为0.1mm。

血球计数板上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0×10-4ml。

使用时，计数4大正方形内之总的细胞数目，求平均值，再乘以104，即为每ml
溶液中细胞数目，再乘以稀释倍数，即可得出母液中细胞的浓度。

2.计数
A：用酒精棉将计数板与盖玻片擦干净；
B：盖玻片平稳地盖在计数板的中间，盖玻片与计数板的边缘相距
0.5cm左右；
C：用移液枪取20μl左右细胞悬液，滴加到盖玻片与计数板的边缘空隙处，让液体通过毛细管现象自然吸附进盖玻片下计数板的小
室中；
D：显微镜下统计4个方格中的细胞数目，求平均值，即可得到细胞悬液中细胞浓度，（比如：四个方格中的细胞数分别是15、18、17
和14，平均为16，那么细胞浓度为16×104=1.6×105个/ml）。

E：或者吸10μl细胞悬液到一离心管中，加入10μl台盼蓝染液（0.4％）或苯胺黑，活细胞不会被染色，加入染液后就可以在显微镜下区
别活细胞和死细胞。

如细胞密度太高，可稀释后计数。

（细胞悬液的细胞数）/ml＝（四个大格子细胞数/4）×104×稀
释倍数
F：用完后用纸或酒精棉擦净计数板上的液体。

注意：
A:计数时应注意一个原则“压上不压下，压左不压右”，也就是说计数时，如果将方格上方边缘线上细胞统计了，那么方格下方边缘线上
的细胞就不用统计了。

如下图，如果上面压边线的白色球统计了，
那么下方压边线的黑色球就不用统计在内了。

B:吸取的液体不宜过多，否则计数不准，要靠盖玻片下毛细管作用将液体填充到小室中。

C:细胞一定要吹打均匀后才可计数。

3.试剂的配制
4％台盼蓝母液：称取4克台盼蓝，加入少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100毫升，用滤纸过滤，4℃保存。

使用液：使用时，用PBS稀释母液至0.4％即可。

五、细胞的复苏与冻存
1.细胞复苏
1)将水浴锅的温度设定为37℃，当水浴锅中的水的温度达到37℃时；
2)从-70℃或液氮罐中迅速取出所需细胞冻存管，放入水浴锅的水中，快
速摇晃，使其尽可能快的融化（最好控制在1min左右）；
3)完全融化后，立即从水中取出。

取一离心管，向离心管中加入4ml的
培养基后把1ml冻存的细胞加入，1000rpm，离心5min；
4)将离心管中上清液倒掉，加入培养基，轻轻吹打；
5)再将细胞悬液转移至培养瓶中，加入充足的培养基，吹打均匀，孵箱
培养。

（此时可以用台盼蓝染色后记录下细胞的存活率，细胞存活率=
（细胞总数-死亡细胞数）/细胞总数，一般要大于70%。

2.细胞冻存
1)取对数生长期的细胞（细胞密度约为90%左右），用PBS清洗一遍，
加入消化液，消化，含血清培养基终止消化后，离心。

2)在超净台中，倒掉上清液，加入冻存液（培养基：血清：DMSO=7:2:1），
吹打均匀，将细胞悬液转移至冻存管中（体积不宜过满，加入冻存液
时需要缓慢加入，且冻存液要在4度冰箱预冷，因为DMSO加入血
清后会放热，在高温条件下DMSO对细胞的毒性大）。

3)用胶布封好冻存管接口处，在冻存管中表明细胞名称、细胞代数、冻
存日期、操作人名字。

4)将冻存管放入4℃冰箱30min，再转移至-20℃，放置2h，最后转移
至-70℃存放（有条件的话，在-70℃过夜后，可将细胞转移至液氮中
长期保存）。

也可将冻存管用棉花包裹后，放入泡沫盒中，直接放入
-70℃。

总之，冻存时掌握一个原则，慢冻（降温速度为1～3℃/min）。

两种方法可对比使用。

附表1
无菌技术核对表
工作区域
细胞培养通风橱设置是否正确？
细胞培养通风橱所在区域有无气流和直接出入通道？
工作台面是否整洁？是否仅仅放置了实验所需物品？
开始工作前用70%乙醇擦拭工作台面了吗？
是否定期对培养箱、冰箱、冰柜及其他实验室设备进行清洁和消毒？
个人卫生
您洗手了吗？
您穿戴个人防护设备了吗？
如果您留了长发，您把头发扎在后面了吗？
您是用移液器操作液体吗？
试剂和培养基
您采用适当的方法对实验室中配制的所有试剂、培养基和溶液进行灭菌了吗？
在将容器、培养基、培养板和培养皿放入工作台面之前，您用70%乙醇擦拭其外部了吗？
试剂瓶、培养瓶及其他容器不使用时盖紧了吗？
是否已将所有培养板均放入无菌重复密封袋中？
是否有试剂外观浑浊？是否被污染了？试剂中有漂浮颗粒吗？有难闻气味吗？有颜色异常吗？如果出现上述情况，是否已对其进行去污并丢弃？
操作
您操作时否缓慢、谨慎、注意无菌技术了？
在将移液器、试剂瓶和培养瓶放入细胞培养通风橱之前，用70%乙醇擦拭其表面了吗？
是否将盖子口朝下放置在工作区域？
您是使用无菌玻璃吸管或者一次性无菌塑料吸管操作液体吗？
无菌吸管是否仅仅使用一次以免交叉污染？
您是否注意到避免使吸管尖端碰触到任何非灭菌物品包括瓶口螺纹的外缘？
发生液体泼溅时是否立即吸干并用70%乙醇擦拭该区域？
以上核对表列出了一些建议和方法，指导您切实使用无菌技术。

有关无菌技术的深入介绍，请参阅《动物细胞培养：基本技术手册：基本技术手册（Freshney,2000）》
细胞房的维护及仪器操作规程
一、日常检查项目：
1）气流压力表（＞10Pa）监测：主要是观察操作间屏障系统是否正常工作，如正常状态操作间是出于正压状态，操作间门外的气流压力表值应＞10Pa。

2）气瓶气压检查（CO2/N2）：主要是观察气体量的使用情况，主要观察总压力表，如果气量充足，压力值一般为5MPa左右
3）培养箱报警情况：主要是观察培养箱状态是否正常，如不正常则会出现红色的报警提示，如漏水、高温、低压等提示。

4）生物安全柜报警情况：主要是观察生物安全柜状态是否正常，如不正常红色报警提示，如气流故障、照明及紫外灯故障灯
5）紫外灯及日光灯等异常情况：主要观察紫外及日光灯能否正常开启，使用过程中是否有频繁闪烁等故障现象
6）冰箱异常情况:主要观察冰箱使用过程中，是否有高温等报警提示
二、每周清洁/检查项目
1）缓冲间地面吸尘：请先吸尘器（放于238房间）及洗头擦干净后再拿入缓冲间。

2）缓冲间地面消毒：请用专用拖布，浸泡于2%新洁尔灭消毒液后，擦拭地面。

3）缓冲间物品消毒：请用专用抹布，浸泡于1%新洁尔灭消毒液后，擦拭实验物品（如冰箱、烘箱、水浴锅、液氮罐、不锈钢架、实验台面等物品）。

4）水浴锅换水：请将用过一周后的水倒掉，然后加入新的纯化水。

5）液氮罐液氮量检查：轻轻打开液氮罐外盖，仔细观察液氮液面是否完全浸没冻存盒顶部，应确保储备罐中有足量的液氮（请戴防冻手套操作）。

6）操作间地面消毒：请用专用拖布，浸泡于2%新洁尔灭消毒液后，擦拭地面。

7）缓冲间物品消毒：请用专用抹布，浸泡于1%新洁尔灭消毒液后，擦拭实验物品（如生物安全柜、培养箱、离心机、天平、不锈钢架等物品）
8）培养箱水盘换水：将用过一周后的水倒掉，更换新的灭菌水1500ml左右。

三、仪器设备操作规程
供气瓶操作规程
1）供气瓶介绍:
2）气瓶开启步骤：
1.首先将减压阀手柄拧松，即朝“OFF”方向拧松，确保减压阀是关闭状态，
甚至可以将减压阀手柄拧下来。

2.再开总开关，可看到总压力表的压力值应该在5Mpa左右，请保持在5
Mpa左右以内
3.再将减压阀手柄即朝“ON”方向慢慢拧紧，边拧边看二级压力表的压力值
变化，越朝“ON”方向拧紧，二级压力表的压力值越高，一定要将压力值控制在<0.1Mpa以内。

以防压力过大，将培养箱的过滤膜冲破！
二级压力表
总压力表
Thermo生物安全柜操作规程（1300A2型）
□操作步骤
⏹将仪器电源线插入电源插座；
⏹按on键约3秒仪器开机；
⏹将操作窗抬至指定位置，风机自检；
⏹打开日光灯电源；
⏹操作工作完成后，将操作窗往下拉到指定位置；
⏹按UV约3秒至紫外灯亮；
⏹打开紫外灯开关进行消毒灭菌。

消毒完成后，紫外灯自动熄灭；
⏹长按on键至面板不显示，仪器进入待机状态。

Thermo水套培养箱操作规程（3111型）
□培养箱条件设置
⏹温度：37℃
⏹CO2浓度：5%
⏹相对湿度：约为95%
⏹如果个别细胞培养需要特殊条件，请与仪器负责人联系
□使用注意事项与日常维护
⏹培养箱专供细胞培养用，严禁放入其他物品，以防污染；
⏹细胞培养板或培养皿请勿堆砌过高，以防打翻；
⏹如不慎有培养基洒出，需及时清理消毒并更换底部托盘中的灭菌水，
以防污染，同时通知仪器负责人；
⏹二氧化碳气瓶分压阀的读数应为0.04-0.06；二氧化碳气瓶总阀正常读
数为5-6，低于该数值说明余量不多，需尽快更换新的气瓶；未经允
许请勿调节安全阀；
⏹培氧箱在使用时，需定期检查增湿盘内是否缺水，如果缺水请务必加
灭菌蒸馏水；
⏹培养箱使用时应把减压阀出气压力调到0.06Mpa,最大不能超0.1Mpa；
⏹如果报警显示Add Water,表示设备里的水套缺水,应用蒸馏水并使用附
件提供的漏斗一直加到设备不报警为止；
⏹如果显示Replace HEPA,只是提醒需要更换箱内高效过滤器,不是表
示设备有问题,如果不想更换可以照常使用；
⏹如果不用二氧化碳，请把二氧化碳设定到零点，否则过15分钟后会
报警；
⏹培养箱在使用时，室内温度要保持在28℃以下，特别是夏天需要24
小时开空调，否则设备会超温报警；
⏹可用70％酒精或中性不含氯的消毒剂给培养葙培养室作定期的常规
消毒；
⏹培养箱如果长期不使用，请切断电源和CO2，把增湿盘拿出来并且把
箱内擦干净。

Thermo水套缺氧培养箱操作规程（3131型）
□参数设定
⏹温度设定：按“Mode”键使“Set”下指示灯亮，按“←”“→”键使显示
“TEMP XX.X C”，按“↓”“↑”键使显示所需设定的目标温度（如
37.0℃），按“Enter”确定。

按“Mode”键3次使“RUN”下指示灯亮。

⏹CO2浓度设定：按“Mode”键使“Set”下指示灯亮，按“←”“→”键使显
示“CO2XX.X”，按“↓”“↑”键使显示所需设定的目标浓度（如5%），
按“Enter”确定。

按“Mode”键3次使“RUN”下指示灯亮。

⏹高温报警设定：按“Mode”键使“Set”下指示灯亮，按“←”“→”键使显
示“OTEMP XX.X C”，按“↓”“↑”键使显示所需设定的目标温度（如
38.0℃），按“Enter”确定。

按“Mode”键3次使“RUN”下指示灯亮。

⏹O2浓度设定：按“Mode”键使“Set”下指示灯亮，按“←”“→”键使显示
“O2XX.X”，按“↓”“↑”键使显示所需设定的目标浓度（如2%），按
“Enter”确定。

按“Mode”键3次使“RUN”下指示灯亮（如果将O2浓度
设定到21%，可当成普通CO2培养箱使用）。

⏹O2浓度校准：按“Mode”键使“CAL”下指示灯亮，按“←”“→”键如显
示O2CAL@20.7%，按“Enter”确定，机器显示“OPEN DOOR“，打开
门，机器显示“CALIBRATING”等两分钟。

当机器再次显示“O2CAL@
20.7%”校准完成。

按“Mode”键3次使“RUN”下指示灯亮。

XDS-1B倒置显微镜操作规程
□开机
⏹观察将待观察对象置于载物台上；
⏹调节双目目镜距离，舒适为宜；
⏹调节光源；
⏹选择合适倍数的物镜
⏹旋转物镜转换器选择合适大小的物镜（切勿直接扳动物镜）；
⏹通过依次调节粗/细准焦螺旋得到清晰的成像。

□关机
⏹取下观察对象，推拉光源亮度调节器至最暗，关闭电源开关。

⏹在使用显微镜观察样品后，对接触样品部分进行清洁，防止造成
污染
⏹登记使用记录
□日常维护及注意事项
⏹所有镜头表面必须保持清洁，落在镜头表面的灰尘，可用吸耳球吹去；
当镜头表面沾有油污或指纹时，可用脱脂棉蘸少许无水乙醇和乙醚的混合液（3:7）轻轻擦拭；
⏹勿用棉团、干布块或干镜头纸擦试镜头表面，否则会刮伤镜头表面，严
重损坏镜头；
⏹勿用水擦试镜头，否则会在镜头表面残留水迹，可能滋生霉菌，严重损
坏显微镜；
⏹尽量远离易燃物品，尤其是电源开、关时，避免着火；
⏹不允许随意拆卸仪器。