骨碎补中总黄酮的提取、含量测定及抗氧化活性研究的答辩
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清除率（%）=( A0-Ai)/A0×100% 式中：A0以蒸馏水为空白实验的吸光度；
Ai为加入不同浓度黄酮粗提取液的吸光度。
黄酮清除·OH能力的测定
采用邻菲罗啉法 同静浓置在度，6个的于2黄551酮0mL粗n容m提处量取测瓶溶定中液吸一1光次m度加LA，入i。89.以8mm蒸mom馏lo/l水L/L为FeH空S2OO白24启，，动9测反m定m应o吸l1/光Lh水，度杨用A0酸。蒸各馏2水m定L，容不， 清除率（%）=( A0-Ai)/ A0×100%
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图6 提取浓度与清除率的关系曲线
由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对 清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
4.结论
（1）采用乙醇热回流提取法，从骨碎补中提取总黄酮。 （2）在单因素实验基础上，通过正交试验设计，研究得到骨碎补中总黄酮提取
2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩
毕业生： 指导教师：
报告内容
CONTENTS
研究背景及意义 实验部分
结果与讨论
结论
1.研究背景及意义
黄酮类化合物是一类分布很广的多酚类天然产物，几乎存在于所有的绿色 植物中，具有多种明显的药理活性。
目前对骨碎补总黄酮的研究主要在抗炎、抑制疼痛等方面。同时黄酮也是 一种很强的抗氧化剂，可有效清除体内的超氧阴离子自由基，这种抗氧化作用 可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。
的最佳工艺条件：乙醇浓度60%、料液比1:30、提取时间3 h、提取温度60℃。 在此条件下，用紫外分光光度法测得总黄酮的含量为3.51%。 （3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中总黄酮抗氧化活性。并且骨 碎增加补而中加黄强酮。类化合物在实验浓度范围内清除O2-·、·OH效果都随黄酮浓度的
欢迎各位老师提问和指导
提取温度对提取率的影响
4.0
3.5
总 黄酮含量 (%)
3.0
2.5
2.0
40
50
60
70
80
90
提取温度 (℃)
图2 提取温度与总黄酮含量的关系曲线
由图2可知：40℃到60℃总黄酮含量有较大的增长, 但60℃到 90℃黄酮含量减小。而60℃时总黄酮含量最大。故最佳提取温度 为60℃。
料液比对提取率的影响
黄酮清除O2-·自由基能力的实验结果
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清除率 (%)
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1.0
图5 提取浓度与清除率的关系曲线
由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清 除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
黄酮清除·OH自由基能力的实验结 果
清除率 (%)
3.3
3.2
3.1
3.0
2.9
2.8
2.7
2.6
2.5
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1.5
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3.5
提取时 间 (h)
图4 提取时间与总黄酮含量的关系曲线
由图4可知：黄酮含量随着提取时间的增加而增大，当超过 3 h时，总黄酮含量反而降低。故选用3 h为宜。
正交试验结果
比较左表中4因素的R 值的大小，可以看出A因素， 即乙醇浓度为最重要因素。 四因素对黄酮提取量影响 的主次顺序为乙醇浓度>浸 提时间>浸提温度>料液比， 并且最佳的提取工艺条件 为：乙醇浓度60%、料液 比1:30、提取时间3 h、提 取温度60 ℃，即A1B2C3D2。
2.实验部分
黄酮的提取工艺
采用乙醇热回流法提取。 工艺流程：
骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→ 乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取 液
乙醇浓度对提取率的影响
单
提取温度对提取率的影响
因
素
实
料液比对提取率的影响
验
提取时间对提取率的影响
正交试验设计
为了全面考查影响因素，设计了4因素3水平的正交试验，试验因素水平 见下表：
骨碎补总黄酮的抗氧化活性研究
黄酮清除O2-·自由基能力的测定
采用邻苯三酚自氧化法 取50 mmol/L Tris-HCI缓冲溶液(pH=8.2)4.5
mL，与4.1 mL蒸馏水混匀后在25 ℃水浴中保温20 min，分别加入0.1 mL的不同浓度的黄酮样品液， 取出后立即加入在25 ℃预热过的3 mmol/L邻苯三 酚0.3 mL，迅速摇匀后倒人比色杯，420 nm下测 定吸光度Ai。以蒸馏水为空白作为对照，测定吸光 度A0。 清除率的计算：
3.26
3.24
总 黄酮含量 (%)
3.22
3.20
3.wk.baidu.com8
3.16
1:20
1:30
1:40
1:50
1:60
1:70
料液比 (mL/g)
图3 料液比与总黄酮含量的关系曲线
由图3可知：随着料液比的提高，黄酮得率上升，但超过1:30 后上升趋势不明显，料液比为1:30最好。
提取时间对提取率的影响
总 黄酮含量 (%)
其中：A0为空白实验的吸光度； Ai为不同浓度反应液的吸光度。
3.实验结果与讨论
乙醇浓度对提取率的影响
3.30
3.25
总 黄酮含量 (%)
3.20
3.15
3.10
3.05
40
50
60
70
80
90
乙醇浓 度 (%)
图1 乙醇浓度与总黄酮含量的关系曲线 由图1得知:随着乙醇浓度的增加，黄酮的得率升高。当浓度 大于60％时，得率的有所降低。故最佳乙醇浓度为60％。
Ai为加入不同浓度黄酮粗提取液的吸光度。
黄酮清除·OH能力的测定
采用邻菲罗啉法 同静浓置在度，6个的于2黄551酮0mL粗n容m提处量取测瓶溶定中液吸一1光次m度加LA，入i。89.以8mm蒸mom馏lo/l水L/L为FeH空S2OO白24启，，动9测反m定m应o吸l1/光Lh水，度杨用A0酸。蒸各馏2水m定L，容不， 清除率（%）=( A0-Ai)/ A0×100%
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图6 提取浓度与清除率的关系曲线
由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对 清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
4.结论
（1）采用乙醇热回流提取法，从骨碎补中提取总黄酮。 （2）在单因素实验基础上，通过正交试验设计，研究得到骨碎补中总黄酮提取
2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩
毕业生： 指导教师：
报告内容
CONTENTS
研究背景及意义 实验部分
结果与讨论
结论
1.研究背景及意义
黄酮类化合物是一类分布很广的多酚类天然产物，几乎存在于所有的绿色 植物中，具有多种明显的药理活性。
目前对骨碎补总黄酮的研究主要在抗炎、抑制疼痛等方面。同时黄酮也是 一种很强的抗氧化剂，可有效清除体内的超氧阴离子自由基，这种抗氧化作用 可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。
的最佳工艺条件：乙醇浓度60%、料液比1:30、提取时间3 h、提取温度60℃。 在此条件下，用紫外分光光度法测得总黄酮的含量为3.51%。 （3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中总黄酮抗氧化活性。并且骨 碎增加补而中加黄强酮。类化合物在实验浓度范围内清除O2-·、·OH效果都随黄酮浓度的
欢迎各位老师提问和指导
提取温度对提取率的影响
4.0
3.5
总 黄酮含量 (%)
3.0
2.5
2.0
40
50
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70
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提取温度 (℃)
图2 提取温度与总黄酮含量的关系曲线
由图2可知：40℃到60℃总黄酮含量有较大的增长, 但60℃到 90℃黄酮含量减小。而60℃时总黄酮含量最大。故最佳提取温度 为60℃。
料液比对提取率的影响
黄酮清除O2-·自由基能力的实验结果
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清除率 (%)
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0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
图5 提取浓度与清除率的关系曲线
由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清 除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
黄酮清除·OH自由基能力的实验结 果
清除率 (%)
3.3
3.2
3.1
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2.9
2.8
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2.0
2.5
3.0
3.5
提取时 间 (h)
图4 提取时间与总黄酮含量的关系曲线
由图4可知：黄酮含量随着提取时间的增加而增大，当超过 3 h时，总黄酮含量反而降低。故选用3 h为宜。
正交试验结果
比较左表中4因素的R 值的大小，可以看出A因素， 即乙醇浓度为最重要因素。 四因素对黄酮提取量影响 的主次顺序为乙醇浓度>浸 提时间>浸提温度>料液比， 并且最佳的提取工艺条件 为：乙醇浓度60%、料液 比1:30、提取时间3 h、提 取温度60 ℃，即A1B2C3D2。
2.实验部分
黄酮的提取工艺
采用乙醇热回流法提取。 工艺流程：
骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→ 乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取 液
乙醇浓度对提取率的影响
单
提取温度对提取率的影响
因
素
实
料液比对提取率的影响
验
提取时间对提取率的影响
正交试验设计
为了全面考查影响因素，设计了4因素3水平的正交试验，试验因素水平 见下表：
骨碎补总黄酮的抗氧化活性研究
黄酮清除O2-·自由基能力的测定
采用邻苯三酚自氧化法 取50 mmol/L Tris-HCI缓冲溶液(pH=8.2)4.5
mL，与4.1 mL蒸馏水混匀后在25 ℃水浴中保温20 min，分别加入0.1 mL的不同浓度的黄酮样品液， 取出后立即加入在25 ℃预热过的3 mmol/L邻苯三 酚0.3 mL，迅速摇匀后倒人比色杯，420 nm下测 定吸光度Ai。以蒸馏水为空白作为对照，测定吸光 度A0。 清除率的计算：
3.26
3.24
总 黄酮含量 (%)
3.22
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3.16
1:20
1:30
1:40
1:50
1:60
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料液比 (mL/g)
图3 料液比与总黄酮含量的关系曲线
由图3可知：随着料液比的提高，黄酮得率上升，但超过1:30 后上升趋势不明显，料液比为1:30最好。
提取时间对提取率的影响
总 黄酮含量 (%)
其中：A0为空白实验的吸光度； Ai为不同浓度反应液的吸光度。
3.实验结果与讨论
乙醇浓度对提取率的影响
3.30
3.25
总 黄酮含量 (%)
3.20
3.15
3.10
3.05
40
50
60
70
80
90
乙醇浓 度 (%)
图1 乙醇浓度与总黄酮含量的关系曲线 由图1得知:随着乙醇浓度的增加，黄酮的得率升高。当浓度 大于60％时，得率的有所降低。故最佳乙醇浓度为60％。