纤维蛋白原测定PPT讲稿

• 现有的方法大体上分三大类： • （1）物理化学测定法； • （2）免疫学测定法； • （3）基于凝血酶的作用，形成纤维蛋白的方法。
（1）物理化学测定法：这类方法又可分为盐析法 （包括用亚硫酸钠、硫酸铵或氯化钠盐析，用蛋
白质显色或比浊法测定），热变性沉淀法和电泳
法等几种。这类方法都比较简单、快速，尤其适
于急诊检验，但缺点是本法的特异性不强。所测
的不是有凝固功能的纤维蛋白原，可能包括部分 的降解产物和/或其它蛋白。而电泳法又太繁琐， 不适于常规工作。
• （2）免疫学测定法：将纯纤维蛋白原作为抗原免疫动物，
制成多克隆或单克隆抗体。然后用免疫胶乳、被动血凝或 反向血凝、单向免疫扩散、火箭电泳以及ELISA等方法测 定。优点是大部分方法简便，但缺点是所测的不仅是可凝 固的纤维蛋白原，可能包括了它的降解产物（因为它们有 共同抗原），也可能包括了障碍性纤维蛋白原 （dysfibrinogens即N端谷氨酸γ位未羧化的无功能的纤维 蛋白原,又称缺维生素K引起的蛋白质，PIVKA）。但免疫 法也有一个好处，就是可用来测定PIVKA。如果一个患者 总纤维蛋白原（用免疫学测定结果）不低，甚至增高，而 功能性（即可凝固性）纤维蛋白原却明显减少，即可判断 为存在PIVKA。肝病、维生素K缺乏等均可导致PIVKA升高， 有临床诊断价值。总的说来，免疫学方法用于临床常规实 验室仍存在一定问题。
生成纤维蛋白单体。在此过程中，由于释放了酸
性多肽，负电性降低，单体易于聚合成纤维蛋白
多聚体。但此时单体之间借氢键与疏水键相连， 尚可溶于稀酸和尿素溶液中。进一步在Ca+2与活 化的ⅩⅢ因子作用下，单体之间以共价键相连， 则变成稳定的不溶性纤维蛋白凝块，完成凝血过
程。肝功能严重障碍或先天性缺乏，均可使血浆 纤维蛋白原浓度下降，严重时可有出血倾向 。
纤维蛋白原测定课件
• 纤维蛋白原（Human Fibrinogen ）一种由
肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质，是纤 维蛋白的前体。分子量340，000，半衰期 4～6日。血浆中参考值2～4克/升。纤维蛋 白原由α、β、γ三对不同多肽链所组成，多 肽链间以二硫键相连。
• 在凝血酶作用下，α链与β链分别释放出A肽与B肽，
• 我们科室现在使用的SYSMEX-CA1500全自动
凝血仪与贝克曼 ALC-ELITE-PRO全自动凝血 仪都可以同时用Clauss法与PT-Der法对FIB进 行测定。其中贝克曼 的仪器可以在定标PT的 同时自动得到PT-Der法测定FIB的比浊曲线， 而SYSMEX的仪器则必须定标PT后使用仪器 测出标准品各种浓度下的OD值与Clauss法测 出的FIB值，然后自行设定曲线对应关系。
• 血浆纤维蛋白原水平的变化与凝血障碍、出血、
DIC、应激（因为它也是一种急性期蛋白）有关， 而且由于不断有文献报道它与冠心病，心肌梗塞 也有关系，因此临床上越发受到重视。不仅工作 量增大而且对方法准确性的要求也越来越高。但 至今WHO（世界卫生组织）、ICSH（国际血液学 标准委员会）仍未明确提出一个纤维蛋白原的标 准化或推荐方法，供临床常规使用。
• 因此结合实际因素，我们在工作中为了方
便节约时间与节约试剂成本可以使用PT-der 法来进行FIB的测定，但是对于PT-der法测 定后得到的异常结果标本必须用Clauss法进 行复查，这样才能得到比较可靠的结果。
• 克劳斯法 （ Clauss法） 是美国国家临床检
验标准Baidu Nhomakorabea员会 （NCCLS） 推荐的纤维蛋白 原常规测定方法。
• 现在的全自动凝血分析仪大部分在测PT时往往能
够同时报告纤维蛋白原。其原理和理论根据是： 当PT测定完成时，全部纤维蛋白原均变成纤维蛋 白（相当于Clauss法血浆中加入了凝血酶），其 形成的浊度与纤维蛋白的含量成正比。因此，不 需另加任何试剂，即可由浊度直接推算出纤维蛋 白原的含量。故本法又称为PT导出（或衍生）纤 维蛋白原测定法，简称PT-Der法。 由于此法使用 的是比浊法，因此受到测定杯透光性能与血浆状 态的影响比较大，对于溶血，黄疸，乳糜的标本， 此方法会出现较大的结果偏差。
• （3）基于凝血酶的作用，形成纤维蛋白的方法： • 凝血酶凝固法 （Clauss法） ，将凝血酶加到血浆
中，使纤维蛋白原变成纤维蛋白，使出现凝固。 在有足量的凝血酶时，与不同含量的纤维蛋白原 作用，其出现凝固的时间与纤维蛋白原含量呈负 相关。 本法的干扰因素主要是肝素。在高浓度时可造成 假的低值（可通过加入硫酸鱼精蛋白而消除）。
• PT-Der法与Clauss法结果对比
• 比较这两种方法，PT衍生法其结果是在检测PT过程
中演算而来的，更快速、简便，但其结果高于 Clauss法的检测结果，有时失去可靠性，特别是在 疾病状态下和溶栓治疗中。因为溶栓过程中，早、 中期FDPs产物X、Y片段可产生一定的浊度影响比浊， 而晚期产生的D、E片段虽不产生浊度变化，但影响 凝血酶时间(TT)的结果。当血浆FIB含量正常时，两 方法无显著差异或略高于Clauss法，但当FIB减低或 增高时，PT -der法往往略高。相比之下，Clauss法 在准确度与精密度以及检测速度方面都是很理想的 选择。