Agilent1260 高效液相色谱法培训

六通阀（动图）
旁路位置
主路位置
主路压力—旁路压力=3～5bar
高效液相色谱仪
自动进样系统容易出现哪些问题：
1：认为因素（多） 样品位置不对；上样瓶污染；样品盘、针 座污染；样品瓶装样太满；序列表输入错 误；未启动洗针功能或无洗针液瓶等。
2：仪器因素（少） 漏液（针座）。
高效液相色谱仪
高效液相色谱仪
十八烷基硅烷键合硅胶，完全球型、表面光滑的多孔硅胶，
具有非常高的表面键合覆盖率。适用pH2.00-9.00。以硅胶 为载体的普通键合固定相的使用温度通常不超过35℃。
高效液相色谱仪
ODS（C18）柱：
正？反？
ODS-1：未经封尾处理。
ODS-2：经封尾处理。表面硅醇基；防拖尾， 分离碱性化合物尤为重要。
荧光检测器FLD 蒸发光散射检测器ELSD 示差折光检测器 电化学检测器 质谱检测器 ……
高效液相色谱法
样品制备：
超声、回流、索氏提取、浸泡、减压回收溶 剂、过滤、离心、萃取、溶解……
注意：1、准确称量。 2、器具清洁。 3、防止用错试剂试液等。 4、防止操作过程中的样品损失和污染。 5、防止混淆（样品、试剂、溶液等） 6、量取、移取、定容、、、
高效液相色谱仪
样品制备：
高效液相色谱仪
等度洗脱用单通道（漂移，热效应） 硫酸稀释 乙酸铵-水 进样体积（峰宽）
阐述高效液相色谱法原理；举例说明
高效液相色谱仪
安捷伦1260
高效液相色谱仪
• 流动相瓶 不吸附不释放 新瓶 ——酸液浸泡
• 溶剂过滤头
高效液相色谱仪
流动相、试液、对照溶液配制：
复核！！！
称量、PH调节是否准确？ 器具是否清洁？ 试剂、溶剂是否用对？ 混合比例是否正确？ 数量是否够用？
注：流动相的pH 值应控制在2～8 之间。当pHBiblioteka 高效液相色谱法何远攀
2019/11/02
色谱法来源
1906年Tswett 研究植物色素分离时提出色谱法概念； 他在研究植物叶的色素成分时，将植色谱物叶子的 萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入 石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离 形成各种不同颜色的谱带。按光谱的命名方式，这 种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无 色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义， 但仍被人们沿用至今。
柱温箱G1316A
建议温度控制范围：20～35℃ 维持温度稳定，保证保留时间的重现性 条件优化：温度影响保留时间，分离度，柱效等。
高效液相色谱仪
色谱柱组成：
色谱柱一般由柱管、填料、卡套（密封圈）、 筛板（过滤片）、接头、螺帽等组成。
使用色谱柱厂家匹配的连 接头，防止漏液和损坏！
高效液相色谱仪
色谱柱 制备型 分析型 常用内径4.6mm,柱长10～30mm,粒径 3.5或5μm。 C-18（ODS）；C-8；氨基柱。
ODS-3 ：为新一代的 C18 反相填料。它的基 质是一种新型的高纯硅胶。这种硅胶不仅纯 度高达 99.999% , 而且颗粒球形对称度好, 表 面均匀光滑。从而使硅胶的理化性质更加均 一, 载体机械强度大, 键合度及柱效更高。
高效液相色谱仪
检测器： 紫外-可见分光检测器VWD
紫外灯（强度、波长、燃烧时间、点火次数）、压力。
在色谱法中，静止不动的一相（固体或液体）称为 固定相（stationary phase） ；运动的一相（一般是 气体或液体）称为流动相（mobile phase）。
原理
色谱法分离原理？
吸附、分配、离子交换、分子排阻等
色谱法分离方法？
纸色谱（分配）、薄层色谱（吸附）、柱色谱（分配、吸附）、 气相 色谱（气固、气液）、高效液相色谱（分配、离子交换、吸附）等
值大于8 时，可使载体硅胶溶解；当pH 值小于 2 时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
高效液相色谱仪
• 流动相抽滤设备
抽滤目的？
• 超声脱气
高效液相色谱仪
流动相 A：水 B：甲醇 C：有机相 D：水相 10%异丙醇
高效液相色谱仪
在线真空脱气机
高效液相色谱仪
四元比例阀
混合效果好 保留时间段
高效液相色谱仪
高效液相色谱仪
泵头
高效液相色谱仪
泵头（带密封圈清洗SEAL WASH）：
高效液相色谱仪
• 排气Purge阀
过滤小白头
高效液相色谱仪
打开冲洗Purge阀 以水为流动相 流速5ml/min 结果：系统压力大于10bar.
高效液相色谱仪
自动进样系统
高效液相色谱仪
高效液相色谱仪