高效液相色谱分析简介教材

mn
100
Ai
n
100
Ai
不用校正因子
适用条件：各组分灵敏度相近（或if1' 均相等） i
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（2）外标法
外标法也称为标准曲线法。 特点及要求： 外标法不使用校正因子，准确性较高， 操作条件变化对结果准确性影响较大。 对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的 快速分析。
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二、高效液相色谱法的特点
feature of HPLC
特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
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三、流程及主要部件
process and main assembly of HPLC
1.流程
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2.主要部件
(1) 高压输液泵
（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外 检测器时，流动相不应有紫外吸收。
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色谱分析法
•定量分析方 法
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1. 峰面积的测量
色谱峰面积的准确测算是色谱定量分析准确的基础
（1）峰高（h）乘半峰宽（Y 1/2）法：近似将色谱峰当作等 腰三角形。此法算出的面积是实际峰面积的0.94倍：
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(4) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
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(5) 液相色谱检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
（3）内标法
内标物要满足以下要求：
（a）试样中不含有该物质；
（b）与被测组分性质比较接近；
（c）不与试样发生化学反应；
（d）出峰位置应位于被测组分附近，且无组分峰影响。
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3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂， 若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使 保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳> 环己烷>己烷>煤油(最小)
A = 1.064 h·Y1/2 （2）剪纸称重法 （3）复制谱图剪纸称重法 （4）圆盘积分仪 积分法 （5）色谱数据处理机和色谱数据工作站
色谱峰面积自动积分，要注意积分参数设置，使自动 积分结果合理。
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2. 定量校正因子
由于在同一检测器上不同组分灵敏度不同，要准确定 量必须把色谱峰面积用适当的系数校正到一个统一可比的 水平上，就必须引入校正因子。
试样中各组分质量与其色谱峰面积成正比，即：
m i = fi ·Ai 绝对校正因子：比例系数f i ，单位面积对应的物质量：
f i =m i / Ai 相对校正因子f ’i ：即组分的绝对校正因子与标准物质的绝 对校正因子之比。
f
' i
fi fs
mi / Ai ms / As
mi As ms Ai
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4. 选择流动相时应注意的几个问题
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。要经过过滤和脱气处 理。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏 柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定 相等。
（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉 淀并在柱中沉积。
Байду номын сангаас
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3. 常用的几种定量方法
（1）归一化法：
ci %
m1
mi m2
mn
100
f
' i
Ai
n
(
f
' i
Ai
)
100
特点及要求：
i 1
归一化法简便、准确； 进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大； 仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。
简化归一化法：
ci
%
m1
mi m2
general process and main assembly of HPLC
2020/7/19
一、液相色谱仪器
high performance liquid chromatograph
2020/7/19
一、液相色谱仪器
high performance liquid chromatograph
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液相色谱流动相
mobile phases of LC
1. 流动相特性
（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动 相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；
（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正 相柱。
（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液 液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上 的出峰顺序相反。
主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
（动画）
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(3) 进样装置
流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示：
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2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇 、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
高效液相色谱分析简介
化学化工学院 分析化学教研室
2020/7/19
色谱分离过程
进 样 器
2020/7/19
检测器
高效液相色谱分析法
high performance liquid chromatograph
—HPLC
一、高效液相色谱仪
HPLC 二、高效液相色谱法的特点
feature of HPLC 三、流程及主要部件