蛋白质免疫印迹技术课件

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抗原和免疫原性 • 抗原（antigens，Ag）是指能够刺激机体免疫活性细胞 产生抗体或致敏淋巴细胞，并在体内或体外发生特异性 反应的物质。
• 常见的抗原有蛋白质、多糖、磷脂、脂多糖、结合蛋白 质、核酸、激素等有机物。
• 抗原具有两方面的特性：免疫原性（immunogenicity） 和免疫反应性（immunoreactivity）。
自身免疫性疾病
免疫监视
清除突变或畸变细胞 防止肿瘤发生 杀伤病毒感染细胞
肿瘤或病毒持续性 感染
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• 当外源异体物质，如细菌、病毒、蛋白质、多糖 等进入动物机体后，可以激活机体免疫系统，产 生对外源物质的排除作用，从而保护机体免受外 源物质的侵害。
• 机体的这一特异免疫应答功能的细胞基础是淋巴 细胞。
• 随着免疫生物学的发展，人们发现在高等动物体内 存在着具有免疫功能的组织结构（即免疫系统）。
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淋巴组织
免疫活性细胞
免疫活性介质
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免疫系统功能的生理和病理表现
功能名称
生理功能 病理表现
免疫防御
清除病原微生物及其它抗原性异物
超敏反应（强） 免疫缺陷病（弱）
免疫自稳
清除损伤或衰老细胞
• 免疫原性（immunogenicity）是指抗原刺激机体引起免疫应 答的能力。
• 免疫反应性（immunoreactivity）是指抗原与相应免疫应答 产物(即抗体)在体内或体外发生特异性结合反应的能力。
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抗原的分类
• 抗原可以分为完全抗原和半抗原。
• 完全抗原：具有免疫原性和免疫反应性的抗原称为 完全抗原（complete antigen）
• 人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对 RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的 蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电 泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法
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三、蛋白免疫印迹的应用
• 免疫印迹法 (immunoblotting test,IBT)，亦称酶联免 疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB
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（一）多克隆抗体的概念
• 抗原通常是由多个抗原决定簇组成的。 • 由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接
• 是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相 结合的杂交技术。
• 具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点。
• 是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方 法。
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蛋白质免疫印迹检测技术
一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器 四、操作步骤 五、实验结果与分析 六、思考题
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• 免疫应答的类型
（一）固有性免疫应答（innate immune response)
又称先天性免疫应答，非特异性免疫应答：是机体 在种系发育和进化过程中形成的免疫防御功能。
（二）适应性免疫应答（adaptive immune response）
又称获得性免疫应答，特异性免疫应答，是机体出 生后通过与抗原物质接触后所产生的一系列防御功能。 （具有特异性、多样性、记忆性、耐受性、自限性）
血清作试验，所以体外抗原抗体反应亦称为血清学反应 （serologic reaction）。
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二、印迹法（blotting）
• 印迹法是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的 探测反应来检测样品的一种方法。
• 1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜 （NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段 的方法，称为Southern 印迹法。
• 是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。可发 生于体内（in vivo），也可发生于体外（in vitro）。
• 体内反应可介导吞噬、溶菌、杀菌、中和毒素等作用； • 体外反应：可出现凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应
及中和反应等各种不同的反应类型。 • 因抗体主要存在于血清中，在抗原或抗体的检测中多采用
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一、实验目的
• 学习掌握动物抗血清的制备原理及技术 • 通过实际操作学会动物抗血清的制备 • 掌握Western－blotting的基本原理 • 熟悉Western－blotting的实验操作
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二、实验原理
• 第一部分 动物的常规免疫及抗血清的制备 • 第二部分 Western－blotting 检测抗血清
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第一部分 动物的常规免疫及抗血清的制备
• 将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间，动 物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清 称为免疫血清。
• 优质免疫血清的产生，主要取决于抗原的纯度和免疫 原性，以及动物应答的能力。此外，尚需考虑免疫途 径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因 素。
• 免疫球蛋白依据其理化性质及生化性质的不同， 分为五种类型： IgG、 IgA、 IgM、 IgD和IgE。
• 人体血清中IgG含量最多， IgA次之， IgM较少， IgD和IgE微量。
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• 抗原抗体反应（antigen-antibody reaction）
实验二 蛋白质免疫印迹技术
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一、免疫学
• 研究抗原物质的结构和功能； • 免疫应答产物的结构和功能； • 抗原刺激机体产生免疫应答的规律。
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• 免疫学的研究范围很广，与很多相关学科交织在一 起，并且发展成了很多学科，如免疫生物学、免疫 遗传学、血液免疫学、肿瘤免疫学等。
• 半抗原：只具有免疫反应性而无免疫原性的抗原称 为半抗原（hapten），也称为不完全抗原 (incomplete antigen)。与蛋白质结合后成为完全 抗原。半抗原能与相应的抗体或致敏淋巴细胞发生 特异性结合反应。绝大多数多糖和所有类脂都属于 半抗原。
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抗体的种类
• 抗体（antibodies，Ab)是专门对抗抗原特异结 构的球蛋白，故也称为免疫球蛋白 （immunoglobulins, Ig)。存在于血清、体液 中，是构成机体免疫作用的主要物质。