脂血对血浆胆固醇测定 (CHOD—PAP法)的干扰评价
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临床综合性设计性实验汇报
——脂血对血浆胆固醇测定 （CHOD—PAP法）的干扰评价
概述 目的
目 录
实验方案 原理 试剂与器材
CONTENTS
操作
实验 实验结果判定与分析
讨论与 讨论与感想
实验目的
08
思维
1. 通过实验设计，培 方法 养科学严谨的实验态 度,熟悉干扰评价方法。 2.通过构建脂血模型, 分析 探讨这种因素对胆固 醇测定的干扰并对干 3.阐明数据分析方法 扰效应进行评估，为 及结果解释，评价可 抵消或校正胆固醇测 能存在的干扰影响, 定的干扰提供依据, 提供相关的干扰报告， 提高血清胆固醇测定 对检测系统的特异性 的准确性。 参数进行验证。
B组 浓度 4.85 2.81 2.66 2.71 2.49 2.61 吸光度 0.011 0.518 0.355 0.351 0.354 0.359 0.396
C组 浓度 4.85 3.30 3.25 3.29 3.33 3.68 平均值 3.08 3.01 3.02 2.96 3.16 -2.28% -1.84% -3.68% 2.71% 干扰率
（1）测试材料：含 320mmol/L甘油三酯的脂血 清样品，约5ml（待定） （参考《干扰实验指南》常见内源性干扰物建议实验 浓度） （2）高浓度测试样品：未 处理的脂血的血清样品 （3）低浓度测试样品（对 照样品）：用超高速离心除 去脂肪，使用澄清的样品部 分作为对照样品。5mL（可 用生理盐水代替）
04
脂血标本，临床血清标 本，蒸馏水10mL。 一次性试管，试管架， 加样枪，一次性吸头， 烧杯，移液管，洗耳球， 滤纸，半自动生化分光 光度仪，恒温水浴箱。
试剂与器材
操作步骤 标本 制备 测定 步骤
01
分析
记录 检测 结果
数据 处理
标本制备（一）
01
脂血标本
临床血浆标本Hale Waihona Puke Baidu（8ml）
标本制备（一）
概述
各种脂蛋白所含胆固醇之总和，分为CE和FC。血清中胆固醇在LDL中最多，其次
是 HDL 和 VLDL， CM最少。 TC检测的是血液中各脂蛋白所含胆固醇的总和，代
表总体水平，只能反映人体内胆固醇的总体趋势，临床中需要结合其他检验项目 进行评估。临床常规方法推荐为酶法，常用COD-PAP法。应用最广的检测反应 是Trinder的过氧化氢显色反应，在POD的作用下，使4-AAP与酚发生氧化缩合 反应，产生最大吸收波长为470-550nm 的醌亚胺类化合物。干扰物是临床实验 室检测误差的一个重要来源，脂血主要是由于乳糜微粒增多对光有散射作用而产 生干扰。
01
脂血标本
标本制备（二）
01
（二）将干扰物高实验浓度样品与低实验浓度样 品定量混合，可得到干扰物浓度介于两样品之间 的一系列实验样品。已知，确定线性剂量相关关 系时需要5个浓度水平。具体制备方法见表：
测定步骤 1、为了排除方法精密度对结果的 影响，每个水平重复测定三次（可 根据现实条件适当改变，或两组）： 将实验系列样品每份分装三支，将 样品按干扰物浓度从低到高的顺序 编号命名为样品1、2、3、4、5、6， 分为3组：A组、B组、C组，每组均 含五份干扰物样品浓度即样品1、2、 3、4、5、6。
01
测定步骤
1 2 3 4 5 6
01
低
A组
1 2 3 4 5 6
B组
1 2 3 4 5 6
高
C组
实验结果记录
A组 吸光度 B S U1 U2 U3 U4 U5 0.015 0.506 0.332 0.331 0.325 0.326 0.338 浓度 4.85 3.12 3.11 3.06 3.07 3.19 吸光度 0.014 0.624 0.368 0.349 0.355 0.327 0.342 B组 浓度 4.85 2.81 2.66 2.71 2.49 2.61 吸光度 0.011 0.518 0.355 0.351 0.354 0.359 0.396 C组 浓度 4.85 3.30 3.25 3.29 3.33 3.68
试剂与器材
胆固醇测定酶试剂:Good缓冲液 （pH6.7）50mmol/L，胆固醇酯酶 ≥200U/L，胆固醇氧 化酶≥100U/L，过氧化物酶 ≥3000U/L，4-AAP0.3mmol/L， 苯酚5mmol/L；50mL 胆 固 醇 标 准 溶 液 （5.17mmol/L）：胆 固醇 200mg, 溶于异丙 醇 100mL，于 4℃备用， 或采用定值的参考血清 作为标准溶液；0.1mL
01
数据处理
01
1、干扰实验:计算
干扰值=干扰管测定值一基础管测定值 干扰率(%)=(干扰值÷基础值)x100%
干扰物加后浓度=（V干÷V总）干扰物加前浓度
2、干扰实验:结果判断 当干扰物引起的干扰率<允许偏倚Bias时则不会影 响测定结果的临床应用价值，可认为当干扰物浓 度低于该浓度时不影响测定结果。
原理
07
将干扰物(脂血)加入临床标本不含干扰物的 样本中按比例混合，制备一系列的浓度的待 测标本(一般5个浓度)。由于干扰物的存在， 对测定结果产生干扰，测定各标本中胆固醇 浓度，通过回归分析明确干扰物效应，确定 有临床意义的干扰物浓度水平。建立数学模 型，通过统计学处理评价确定干扰物的浓度 和干扰程度间的关系。
实验方案
07
1
1、根据国家 卫生和计划生 育委员会2013 年发布的《干 扰试验指南》 (WS/T4162013)，明确 干扰评价方案。
2
2、针对临床 常见的脂血 干扰因素制 备不同干扰 标本模型进 行千扰分析。
3
3、测定干扰 因素在不同浓 度时对胆固醇 测定的结果。 评价干扰因素 对肌胆固醇测 定的影响。
只有U5的干扰率(7.01%)>4.1%，产生了干
扰，而U1~U4可能是因为干扰物产生的干
54 %
扰小于了操作等因素带来的误差，使得干 扰率较低，可忽略。
讨论
1.本实验设置了ABC3组水平实验， 是为了减小操作对实验结果的影响， 由于是不同人操作，量的判定上有 所不同，所得实验结果不同，是正 常的。但B组结果较AC差异大，故舍 之。但是人为误差仍然存在，可能 影响实验结果。 2.在制备样本时，由于取了3管不同 血清，胆固醇不一样，操作人员可 能并没有完全将其混匀，影响了实 验结果。
数据处理 混合后的干扰物（甘油三酯）的浓度 U1 0mmol/L U2 8mmol/L U3 16mmol/L U4 24mmol/L U5 32mmol/L
数据处理
01
A组 吸光度 B S U1 U2 U3 U4 U5 0.015 0.506 0.332 0.331 0.325 0.326 0.338 浓度 4.85 3.12 3.11 3.06 3.07 3.19 吸光度 0.014 0.624 0.368 0.349 0.355 0.327 0.342
74%
03
54 %
感想
01 03
临床综合性设计性实验汇报
汇报完毕 谢谢大家
Fighting a race against time
数据处理 舍去B组后结果
A组 吸光度 B S U1 U2 U3 0.015 0.506 0.332 0.331 0.325 浓度 4.85 3.12 3.11 3.06 吸光度 0.011 0.518 0.355 0.351 0.354 C组 浓度 4.85 3.30 3.25 3.29 平均值 3.21 3.18 3.18 -0.93% -1.09% 干扰率
01
U4
U5
0.326
0.338
3.07
3.19
0.359
0.396
3.33
3.68
3.20
3.44
-0.31%
7.01%
实验结果：当甘油三脂的浓度为32mmol/ml时，产生正干扰
分析 干扰率>4.1%则有干扰 A、B、C3组值平均后求得的干扰值和干扰
01
率结果误差较大，分析整体数据，B组数
据与A组合C组数据差异较大，故舍之。后 平均A组和C组的数据求得干扰值和干扰率
——脂血对血浆胆固醇测定 （CHOD—PAP法）的干扰评价
概述 目的
目 录
实验方案 原理 试剂与器材
CONTENTS
操作
实验 实验结果判定与分析
讨论与 讨论与感想
实验目的
08
思维
1. 通过实验设计，培 方法 养科学严谨的实验态 度,熟悉干扰评价方法。 2.通过构建脂血模型, 分析 探讨这种因素对胆固 醇测定的干扰并对干 3.阐明数据分析方法 扰效应进行评估，为 及结果解释，评价可 抵消或校正胆固醇测 能存在的干扰影响, 定的干扰提供依据, 提供相关的干扰报告， 提高血清胆固醇测定 对检测系统的特异性 的准确性。 参数进行验证。
B组 浓度 4.85 2.81 2.66 2.71 2.49 2.61 吸光度 0.011 0.518 0.355 0.351 0.354 0.359 0.396
C组 浓度 4.85 3.30 3.25 3.29 3.33 3.68 平均值 3.08 3.01 3.02 2.96 3.16 -2.28% -1.84% -3.68% 2.71% 干扰率
（1）测试材料：含 320mmol/L甘油三酯的脂血 清样品，约5ml（待定） （参考《干扰实验指南》常见内源性干扰物建议实验 浓度） （2）高浓度测试样品：未 处理的脂血的血清样品 （3）低浓度测试样品（对 照样品）：用超高速离心除 去脂肪，使用澄清的样品部 分作为对照样品。5mL（可 用生理盐水代替）
04
脂血标本，临床血清标 本，蒸馏水10mL。 一次性试管，试管架， 加样枪，一次性吸头， 烧杯，移液管，洗耳球， 滤纸，半自动生化分光 光度仪，恒温水浴箱。
试剂与器材
操作步骤 标本 制备 测定 步骤
01
分析
记录 检测 结果
数据 处理
标本制备（一）
01
脂血标本
临床血浆标本Hale Waihona Puke Baidu（8ml）
标本制备（一）
概述
各种脂蛋白所含胆固醇之总和，分为CE和FC。血清中胆固醇在LDL中最多，其次
是 HDL 和 VLDL， CM最少。 TC检测的是血液中各脂蛋白所含胆固醇的总和，代
表总体水平，只能反映人体内胆固醇的总体趋势，临床中需要结合其他检验项目 进行评估。临床常规方法推荐为酶法，常用COD-PAP法。应用最广的检测反应 是Trinder的过氧化氢显色反应，在POD的作用下，使4-AAP与酚发生氧化缩合 反应，产生最大吸收波长为470-550nm 的醌亚胺类化合物。干扰物是临床实验 室检测误差的一个重要来源，脂血主要是由于乳糜微粒增多对光有散射作用而产 生干扰。
01
脂血标本
标本制备（二）
01
（二）将干扰物高实验浓度样品与低实验浓度样 品定量混合，可得到干扰物浓度介于两样品之间 的一系列实验样品。已知，确定线性剂量相关关 系时需要5个浓度水平。具体制备方法见表：
测定步骤 1、为了排除方法精密度对结果的 影响，每个水平重复测定三次（可 根据现实条件适当改变，或两组）： 将实验系列样品每份分装三支，将 样品按干扰物浓度从低到高的顺序 编号命名为样品1、2、3、4、5、6， 分为3组：A组、B组、C组，每组均 含五份干扰物样品浓度即样品1、2、 3、4、5、6。
01
测定步骤
1 2 3 4 5 6
01
低
A组
1 2 3 4 5 6
B组
1 2 3 4 5 6
高
C组
实验结果记录
A组 吸光度 B S U1 U2 U3 U4 U5 0.015 0.506 0.332 0.331 0.325 0.326 0.338 浓度 4.85 3.12 3.11 3.06 3.07 3.19 吸光度 0.014 0.624 0.368 0.349 0.355 0.327 0.342 B组 浓度 4.85 2.81 2.66 2.71 2.49 2.61 吸光度 0.011 0.518 0.355 0.351 0.354 0.359 0.396 C组 浓度 4.85 3.30 3.25 3.29 3.33 3.68
试剂与器材
胆固醇测定酶试剂:Good缓冲液 （pH6.7）50mmol/L，胆固醇酯酶 ≥200U/L，胆固醇氧 化酶≥100U/L，过氧化物酶 ≥3000U/L，4-AAP0.3mmol/L， 苯酚5mmol/L；50mL 胆 固 醇 标 准 溶 液 （5.17mmol/L）：胆 固醇 200mg, 溶于异丙 醇 100mL，于 4℃备用， 或采用定值的参考血清 作为标准溶液；0.1mL
01
数据处理
01
1、干扰实验:计算
干扰值=干扰管测定值一基础管测定值 干扰率(%)=(干扰值÷基础值)x100%
干扰物加后浓度=（V干÷V总）干扰物加前浓度
2、干扰实验:结果判断 当干扰物引起的干扰率<允许偏倚Bias时则不会影 响测定结果的临床应用价值，可认为当干扰物浓 度低于该浓度时不影响测定结果。
原理
07
将干扰物(脂血)加入临床标本不含干扰物的 样本中按比例混合，制备一系列的浓度的待 测标本(一般5个浓度)。由于干扰物的存在， 对测定结果产生干扰，测定各标本中胆固醇 浓度，通过回归分析明确干扰物效应，确定 有临床意义的干扰物浓度水平。建立数学模 型，通过统计学处理评价确定干扰物的浓度 和干扰程度间的关系。
实验方案
07
1
1、根据国家 卫生和计划生 育委员会2013 年发布的《干 扰试验指南》 (WS/T4162013)，明确 干扰评价方案。
2
2、针对临床 常见的脂血 干扰因素制 备不同干扰 标本模型进 行千扰分析。
3
3、测定干扰 因素在不同浓 度时对胆固醇 测定的结果。 评价干扰因素 对肌胆固醇测 定的影响。
只有U5的干扰率(7.01%)>4.1%，产生了干
扰，而U1~U4可能是因为干扰物产生的干
54 %
扰小于了操作等因素带来的误差，使得干 扰率较低，可忽略。
讨论
1.本实验设置了ABC3组水平实验， 是为了减小操作对实验结果的影响， 由于是不同人操作，量的判定上有 所不同，所得实验结果不同，是正 常的。但B组结果较AC差异大，故舍 之。但是人为误差仍然存在，可能 影响实验结果。 2.在制备样本时，由于取了3管不同 血清，胆固醇不一样，操作人员可 能并没有完全将其混匀，影响了实 验结果。
数据处理 混合后的干扰物（甘油三酯）的浓度 U1 0mmol/L U2 8mmol/L U3 16mmol/L U4 24mmol/L U5 32mmol/L
数据处理
01
A组 吸光度 B S U1 U2 U3 U4 U5 0.015 0.506 0.332 0.331 0.325 0.326 0.338 浓度 4.85 3.12 3.11 3.06 3.07 3.19 吸光度 0.014 0.624 0.368 0.349 0.355 0.327 0.342
74%
03
54 %
感想
01 03
临床综合性设计性实验汇报
汇报完毕 谢谢大家
Fighting a race against time
数据处理 舍去B组后结果
A组 吸光度 B S U1 U2 U3 0.015 0.506 0.332 0.331 0.325 浓度 4.85 3.12 3.11 3.06 吸光度 0.011 0.518 0.355 0.351 0.354 C组 浓度 4.85 3.30 3.25 3.29 平均值 3.21 3.18 3.18 -0.93% -1.09% 干扰率
01
U4
U5
0.326
0.338
3.07
3.19
0.359
0.396
3.33
3.68
3.20
3.44
-0.31%
7.01%
实验结果：当甘油三脂的浓度为32mmol/ml时，产生正干扰
分析 干扰率>4.1%则有干扰 A、B、C3组值平均后求得的干扰值和干扰
01
率结果误差较大，分析整体数据，B组数
据与A组合C组数据差异较大，故舍之。后 平均A组和C组的数据求得干扰值和干扰率