ImageLab中文操作手册
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volume 的pixels密度总和来进行背景值的扣抵。 - Global（Global background subtraction）通过整张胶（或膜）的背景平均的密度来进行 背景值的扣抵。
（2）选择成像区域（Choose the Imaging Area） （3）选择成像曝光时间（Choose Image Exposure Time）
（4）选择显示设定（ Choose Display Options , Highlight saturated pixels and Image Color） 2. 图像自动分析（Analyze Image）-- STEP 2. DETECT LANES AND BANDS
5. 定量工具（Quantity Tools） （1）相对定量（Relative Quantity Tab）
从图像中选择已知的标准品（reference band）及其标准品浓度（以绿色R表示），其 分析结果可从Analysis table观察。
（2）绝对定量（Absolute Quantity Tab）
时，点击
按钮舍弃其它不适合的图像来完成获取图像的程序。也可在 SAM 获取图
像的过程中或之后来保存需要的所有图像，直接点选右键单点缩图窗口内的图像即可进行存
盘保留下来。在决定获取图像的数量时，记住增加 SAM 图像会导致背景信号的平均。当较
多的图像被获得时，在背景强度水平附近的弱的信号将会变得难以识别。如果辨别最弱的信
而 SAM 设定的影像显示对话窗口，在您选择
按钮后再点选
按钮，窗口会显示相关进度图标来说明整体图像获取的时间。在
250 秒获取第一个图像，同时一个小的缩略图会出现在窗口的下方，以此类推整个过程将持
续到获取所有的图像。
就像前面做过的那样，通过移动鼠标在图像上，您能判定强度值。您也可以通过使用位 于程序窗口左边的图像转换窗口（Image Transform）中的调节划片改变图像的表观。在 SAM 程序中的任何地方您都能通过点击缩略图查看图像。若确定调整到符合您要求的图像
7. 定量工具（Volume Tools）
按下
选择较适
合的 Band 型态, 选取想要定量分析的 Band 位置, 并在 Band 上点击左
键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白, 并分别定义其定
量依据（如 kb，ppm，mg/ml…）建议用 Rect Tool 方形，先框出适当
的方形，并用复制方式将分析的 Band 框出（Ctrl+C+左键/即可复制，
二、使用 Image Lab 软件进行化学发光图像获取流程
1. 建立图像获取程序：
在 凝 胶 成 像 （ Gel Imaging ） 对 话 框 中 选 择 Chemi （ 化 学 发 光 ） 应 用 程 序
(1) 在成像区域（Imaging Area）对话框中的下拉式选单中选择合适的样品大小（非必需， 可之后通过 Position Gel 选择）
- 可以藉由Rolling Disk参数设定（1-99 mm）来去除背景值。 （2）Bands Tab
通过 Detect Bands 进行自动搜寻 Bands 功能或手动进行增加 （Add）、删除（Delete）及（Adjust）等参数调整。
4. 分子量分析工具（Molecular Weight Analysis Tools） 此工具可由已知的标准品测算相对的分子量或碱基对（base pairs）。
（A）针对所有的Lanes（All Lanes）进行大小调整（Resize）、（Adjust）及 删除 （Delete）等参数调整。
（B）针对单一Lane（Single Lane）进行增加（Add）、弯曲（Bend）、移动 （Move）、宽度（Width）及删除（Delete）等参数调整。
（C）利用Lane Background Subtraction进行背景值的扣抵，并可点选（Apply to selected Lane）针对单一Lane进行调整。
通过选择已知标准品浓度的bands（至少两个以上,以R表示），并 设定合适的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标bands的绝对浓度 （回归参数设定如Linear(较常用)、Point-to-Point或Cubic spline）。
Regression
Method Linear Point-to-Point Cubic Spline
号很重要，我们推荐在合适的时间下获得单一的成像。
三、建立全自动图像获取及分析程序（Creating Protocols）
1. 启动分析精灵窗口 -- STEP 1. GEL IMAGING
（1）按照应用（NucleicAcid/Protein/Blots）选择相关的程序（Choose an application）
设定Analyze Molecular Weight Settings的分子量标准品（Molecular Weight Standard）类型，所有Bio-Rad的各类标准品（包括核酸、蛋白）均已预存。当然，您也可 以根据您的实验设置您自定义的分子量标准品。并同时设定分子量标准品的泳道及回归方 式。 4. 报告输出设定（Report Settings）-- STEP 4. SPECIFY CONTENT OF REPORTS
设定DETECT LANES AND BANDS的参数（Low Band Detection Sensitivity（Low sensitivity = 25）、High Band Detection Sensitivity（High sensitivity = 75）或自行设定灵 敏度。 3. 分子量分析（Analyze Molecular Weight ）--STEP 3. ANALYZE MOLECULAR WEIGHT
Image Lab™ 中文操作手册
Fast and Reliable
Image Lab全自动图像获取和分析软件用于Molecular Imager ChemiDoc™ XRS+、 Molecular Imager Gel Doc™ XR+ 和 Criterion Stain FreeTM 成像系统，可应用于凝胶电泳 和转印膜的数字成像和分析，而自动化的工作流程能加速图像获取步骤及参数优化，并针对 调整好的凝胶或转印膜影像进行系统性分析，进而得到所需的分析数据结果。
2. 手动曝光
(1) 选择手动设定曝光时间（Manually set exposure time）并在读秒框中输入 10 秒。
(2) 选择 Highlight saturated pixels 。 (3) 把胶置于透射箱的中心位置。
(4) 在程序窗口中点击
按钮。
(5) 观察显示器中样品的实时图像，打开照胶系统的门并移动样品直到位于视野的中心区 域。
(2) 选择成像曝光（Image Exposure）方法，可以人为评估曝光时间并以手动设定（Manual Exposure），或是使用信号累积模式（Signal ccumulation Mode，SAM）来进行操作。
在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光的确定，因为您想获得一个充分 利用了相机大的动态范围的图像。过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被 识别；过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和（也就是说，超出了相机准确报告信号的 能力）。如果这是您第一次用 ChemiDoc XRS+分析化学发光样品，您需要在使用手控或信 号累积模式（SAM）之前决定一个合适的成像时间框架。获得这个信息的最好的方式是取 得一个相对短的手工曝光并利用 Image Lab 里的工具估计最适的曝光时间。
Minimum number
of standard 2 2 5
Minimum number with
Force Through Option 1 1 4
6. 注释工具（Annotation Tools）
可以通过 Add Annotations 工具增加文字批注及箭头批注，并可 调整批注相对位置（Alignment）、文字属性、颜色及旋转方向等参数
5. 结果（Results Overview）及报告（Report）
（1）数据显示信息（Displaying Data） （2）分析表格设定（Analysis Table Options）
（3）Lane 信息（Lane Profile） （4）标准曲线（Standard Curve）
四、建立图像分析程序（Creating Images Analyzing Protocols）
1. 图像分析（Analyzing Images） （1）分析工具Analysis Tool Box （A）自动分析（Auto Analysis）
点选
进入Detection Settings窗口
设定Detect lanes and bands的参数（Low Band Detection Sensitivity（Low sensitivity = 25）、High Band Detection Sensitivity（High sensitivity = 75）或自行设定灵 敏度），接着再设定 Molecular Weight Analysis Settings的Molecular Weight Standard、 Standard Lanes及Regression Method参数。
一、软件操作界面
主窗口工具列
分析工具列
状态列
启动精灵 程序桌面
1. 主窗口工具列
档案管理 2. 显示工具列
分析数据 Results Data
图
放
缩
像
大
小
显
示
设
定
全
亮
改
转
图
窗
度
变
换
像
口
明
图
信
大 小
暗 度 转 换
像 色 彩
3D成 息 模 式 像
3. 分析工具列 （1）图像工具（Image Tools） （2）泳道及条带工具（Lane and Band Tools） （3）分子量工具（MW Molecular Weight） （4）自动定量工具（Quantity Tools） （5）注释工具（Annotation Tools） （6）手动定量工具（Volume Tools）
3. 信 号 累 积 模 式 （ Signal Accumulation Mode ， SAM）
如果预估方法不足以精确满足您的目的，请选择 SAM 按钮，然后按 Setup 按钮。一个新的对话框会跳出 来，其包含有可输入细分的成像时间的领域。
在这个例子中，我们已经输入了小于和大于我们原 始的 300 秒曝光估计时间，因为我们有理由相信准确的 成像时间将会在这些时间之中。我们总共想要 5 个成 像，推测其中一个将会与最佳成像极为接近。一个您的 SAM 设定的图像显示出现在对话框里。
2. 图像工具（Image Tools） 可进行水平或垂直翻转、左右旋转90℃或自由旋转
（Rotate）、裁剪（Crop）、反转（Invert Data）及迭合 （Merge）。
3. Lanes及Bands工具（Lane and Band Tools）
（1）Lane Tab 使用自动（Automatic）或手动（Manual）搜寻Lane功能
或 Ctrl+C 复制/Ctrl+V 粘贴）。
在Band上点击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白。
（1）Volume Background Subtraction - Local（Local background subtraction）通过我们所圈选的unknown volume 和 standard
(6) 可 利 用 照 相 机 的 变 焦 滑 板 小。
调节成像区域的大
(7) 选择
按钮获得你的第一个图像。
若所需的图像出现在计算机的显示器上，确认图像中是否包含红色的饱和区域。若有饱 和区域存在，请重新以较短的曝光时间来获取图像。若无饱和区域存在，则可移动鼠标置于 最暗的条带之上，在较低的右下角 Image Lab 窗口中观察信号的强度数值。如图中显示强 度为 1994，照相机能记录的最大值的 32 分之一 （最大值为 65,535）。用你的最初的 10 秒曝光再乘以 30 就可在照相机的最大动态范围附 近成像你的样品。若你只需针对单一图像的成像时间进行评估，可直接在手动曝光区域中输 入 300。
（2）选择成像区域（Choose the Imaging Area） （3）选择成像曝光时间（Choose Image Exposure Time）
（4）选择显示设定（ Choose Display Options , Highlight saturated pixels and Image Color） 2. 图像自动分析（Analyze Image）-- STEP 2. DETECT LANES AND BANDS
5. 定量工具（Quantity Tools） （1）相对定量（Relative Quantity Tab）
从图像中选择已知的标准品（reference band）及其标准品浓度（以绿色R表示），其 分析结果可从Analysis table观察。
（2）绝对定量（Absolute Quantity Tab）
时，点击
按钮舍弃其它不适合的图像来完成获取图像的程序。也可在 SAM 获取图
像的过程中或之后来保存需要的所有图像，直接点选右键单点缩图窗口内的图像即可进行存
盘保留下来。在决定获取图像的数量时，记住增加 SAM 图像会导致背景信号的平均。当较
多的图像被获得时，在背景强度水平附近的弱的信号将会变得难以识别。如果辨别最弱的信
而 SAM 设定的影像显示对话窗口，在您选择
按钮后再点选
按钮，窗口会显示相关进度图标来说明整体图像获取的时间。在
250 秒获取第一个图像，同时一个小的缩略图会出现在窗口的下方，以此类推整个过程将持
续到获取所有的图像。
就像前面做过的那样，通过移动鼠标在图像上，您能判定强度值。您也可以通过使用位 于程序窗口左边的图像转换窗口（Image Transform）中的调节划片改变图像的表观。在 SAM 程序中的任何地方您都能通过点击缩略图查看图像。若确定调整到符合您要求的图像
7. 定量工具（Volume Tools）
按下
选择较适
合的 Band 型态, 选取想要定量分析的 Band 位置, 并在 Band 上点击左
键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白, 并分别定义其定
量依据（如 kb，ppm，mg/ml…）建议用 Rect Tool 方形，先框出适当
的方形，并用复制方式将分析的 Band 框出（Ctrl+C+左键/即可复制，
二、使用 Image Lab 软件进行化学发光图像获取流程
1. 建立图像获取程序：
在 凝 胶 成 像 （ Gel Imaging ） 对 话 框 中 选 择 Chemi （ 化 学 发 光 ） 应 用 程 序
(1) 在成像区域（Imaging Area）对话框中的下拉式选单中选择合适的样品大小（非必需， 可之后通过 Position Gel 选择）
- 可以藉由Rolling Disk参数设定（1-99 mm）来去除背景值。 （2）Bands Tab
通过 Detect Bands 进行自动搜寻 Bands 功能或手动进行增加 （Add）、删除（Delete）及（Adjust）等参数调整。
4. 分子量分析工具（Molecular Weight Analysis Tools） 此工具可由已知的标准品测算相对的分子量或碱基对（base pairs）。
（A）针对所有的Lanes（All Lanes）进行大小调整（Resize）、（Adjust）及 删除 （Delete）等参数调整。
（B）针对单一Lane（Single Lane）进行增加（Add）、弯曲（Bend）、移动 （Move）、宽度（Width）及删除（Delete）等参数调整。
（C）利用Lane Background Subtraction进行背景值的扣抵，并可点选（Apply to selected Lane）针对单一Lane进行调整。
通过选择已知标准品浓度的bands（至少两个以上,以R表示），并 设定合适的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标bands的绝对浓度 （回归参数设定如Linear(较常用)、Point-to-Point或Cubic spline）。
Regression
Method Linear Point-to-Point Cubic Spline
号很重要，我们推荐在合适的时间下获得单一的成像。
三、建立全自动图像获取及分析程序（Creating Protocols）
1. 启动分析精灵窗口 -- STEP 1. GEL IMAGING
（1）按照应用（NucleicAcid/Protein/Blots）选择相关的程序（Choose an application）
设定Analyze Molecular Weight Settings的分子量标准品（Molecular Weight Standard）类型，所有Bio-Rad的各类标准品（包括核酸、蛋白）均已预存。当然，您也可 以根据您的实验设置您自定义的分子量标准品。并同时设定分子量标准品的泳道及回归方 式。 4. 报告输出设定（Report Settings）-- STEP 4. SPECIFY CONTENT OF REPORTS
设定DETECT LANES AND BANDS的参数（Low Band Detection Sensitivity（Low sensitivity = 25）、High Band Detection Sensitivity（High sensitivity = 75）或自行设定灵 敏度。 3. 分子量分析（Analyze Molecular Weight ）--STEP 3. ANALYZE MOLECULAR WEIGHT
Image Lab™ 中文操作手册
Fast and Reliable
Image Lab全自动图像获取和分析软件用于Molecular Imager ChemiDoc™ XRS+、 Molecular Imager Gel Doc™ XR+ 和 Criterion Stain FreeTM 成像系统，可应用于凝胶电泳 和转印膜的数字成像和分析，而自动化的工作流程能加速图像获取步骤及参数优化，并针对 调整好的凝胶或转印膜影像进行系统性分析，进而得到所需的分析数据结果。
2. 手动曝光
(1) 选择手动设定曝光时间（Manually set exposure time）并在读秒框中输入 10 秒。
(2) 选择 Highlight saturated pixels 。 (3) 把胶置于透射箱的中心位置。
(4) 在程序窗口中点击
按钮。
(5) 观察显示器中样品的实时图像，打开照胶系统的门并移动样品直到位于视野的中心区 域。
(2) 选择成像曝光（Image Exposure）方法，可以人为评估曝光时间并以手动设定（Manual Exposure），或是使用信号累积模式（Signal ccumulation Mode，SAM）来进行操作。
在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光的确定，因为您想获得一个充分 利用了相机大的动态范围的图像。过短的图像曝光时间可能使高于膜背景的微弱信号不能被 识别；过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和（也就是说，超出了相机准确报告信号的 能力）。如果这是您第一次用 ChemiDoc XRS+分析化学发光样品，您需要在使用手控或信 号累积模式（SAM）之前决定一个合适的成像时间框架。获得这个信息的最好的方式是取 得一个相对短的手工曝光并利用 Image Lab 里的工具估计最适的曝光时间。
Minimum number
of standard 2 2 5
Minimum number with
Force Through Option 1 1 4
6. 注释工具（Annotation Tools）
可以通过 Add Annotations 工具增加文字批注及箭头批注，并可 调整批注相对位置（Alignment）、文字属性、颜色及旋转方向等参数
5. 结果（Results Overview）及报告（Report）
（1）数据显示信息（Displaying Data） （2）分析表格设定（Analysis Table Options）
（3）Lane 信息（Lane Profile） （4）标准曲线（Standard Curve）
四、建立图像分析程序（Creating Images Analyzing Protocols）
1. 图像分析（Analyzing Images） （1）分析工具Analysis Tool Box （A）自动分析（Auto Analysis）
点选
进入Detection Settings窗口
设定Detect lanes and bands的参数（Low Band Detection Sensitivity（Low sensitivity = 25）、High Band Detection Sensitivity（High sensitivity = 75）或自行设定灵 敏度），接着再设定 Molecular Weight Analysis Settings的Molecular Weight Standard、 Standard Lanes及Regression Method参数。
一、软件操作界面
主窗口工具列
分析工具列
状态列
启动精灵 程序桌面
1. 主窗口工具列
档案管理 2. 显示工具列
分析数据 Results Data
图
放
缩
像
大
小
显
示
设
定
全
亮
改
转
图
窗
度
变
换
像
口
明
图
信
大 小
暗 度 转 换
像 色 彩
3D成 息 模 式 像
3. 分析工具列 （1）图像工具（Image Tools） （2）泳道及条带工具（Lane and Band Tools） （3）分子量工具（MW Molecular Weight） （4）自动定量工具（Quantity Tools） （5）注释工具（Annotation Tools） （6）手动定量工具（Volume Tools）
3. 信 号 累 积 模 式 （ Signal Accumulation Mode ， SAM）
如果预估方法不足以精确满足您的目的，请选择 SAM 按钮，然后按 Setup 按钮。一个新的对话框会跳出 来，其包含有可输入细分的成像时间的领域。
在这个例子中，我们已经输入了小于和大于我们原 始的 300 秒曝光估计时间，因为我们有理由相信准确的 成像时间将会在这些时间之中。我们总共想要 5 个成 像，推测其中一个将会与最佳成像极为接近。一个您的 SAM 设定的图像显示出现在对话框里。
2. 图像工具（Image Tools） 可进行水平或垂直翻转、左右旋转90℃或自由旋转
（Rotate）、裁剪（Crop）、反转（Invert Data）及迭合 （Merge）。
3. Lanes及Bands工具（Lane and Band Tools）
（1）Lane Tab 使用自动（Automatic）或手动（Manual）搜寻Lane功能
或 Ctrl+C 复制/Ctrl+V 粘贴）。
在Band上点击左键两下可将样品定义为标准品、未知样品或背景空白。
（1）Volume Background Subtraction - Local（Local background subtraction）通过我们所圈选的unknown volume 和 standard
(6) 可 利 用 照 相 机 的 变 焦 滑 板 小。
调节成像区域的大
(7) 选择
按钮获得你的第一个图像。
若所需的图像出现在计算机的显示器上，确认图像中是否包含红色的饱和区域。若有饱 和区域存在，请重新以较短的曝光时间来获取图像。若无饱和区域存在，则可移动鼠标置于 最暗的条带之上，在较低的右下角 Image Lab 窗口中观察信号的强度数值。如图中显示强 度为 1994，照相机能记录的最大值的 32 分之一 （最大值为 65,535）。用你的最初的 10 秒曝光再乘以 30 就可在照相机的最大动态范围附 近成像你的样品。若你只需针对单一图像的成像时间进行评估，可直接在手动曝光区域中输 入 300。