临床检验方法学评价

评价标本的选取
应该选取与与临床标本具有相似性质的材料。如果可能的话 最好选用稳定的冷冻保藏的混合血清。必要时也可以使用稳定的 商品化的人血清基质质控品。
标本浓度的确定
通常推荐两个浓度的标本，当然也可以使用更多浓度的标本。 在本方案中对两个不同浓度的标本分别进行评价。两个浓度值应 尽可能跨越测量范围的大部分。如果使用两个浓度以上，另外的 浓度值尽可能与实验室使用的医学决定水平相接近。如果想要与 厂商说声明的精密度值做比较，那么就应该选取与厂商所采用的 浓度接近的值。
概念： 空白限（limit of blank, LoB):空白样品杯观察到的最大检测结果。 检出限（limit of detection, LoD):样品中分析物的最小量，可以在规定 的可能性条件下予以检出，虽然也许还不能被量化为实际的值。 定量限（limit of quantitation,LoQ):样品中分析物的最小量，在规定的 可接受精密度和正确度下被定量地确定。 正确度（truness）：大量检测结果的均值和可接受参考值的一致性程度。 正确度通常以偏倚表示。
（三 ）标本的测定 整个实验必须有室内质量控制，失控时不能进行比对实验。比
对标本最好在相同时间内进行测定，一般应在2小时内完成检测。标 本按1、2、3、4、5、6、7、8顺序排列先测一遍，然后将顺序倒过 来进行第二次检测。
（四） 数据的上报和离群值的检验
比对结果应以两种方式上报，一种为打印结果，另一种为Excel格式的电 子版结果。
不精密度分为批内不精密度、批间不精密度、天间不精密度、
总不精密度。临床医师只关心总不精密度，而实验室工作人员便 于分析问题，把总不精密度拆分为几项。
精密度评价方案： 试剂和校准品的选取 标本的选取 标本浓度的确定 标本数量 持续时间
试剂和校准品的选取
在整个评价过程中可以选取同一批号的试剂和校准 品，但是这样会低估该实验室的精密度，最好使用使用 不同批次的试剂和校准品，以更加客观地反映该实验室 的精密度。
为了正确地反映所评价方法的真实精密度，就需要足够的数据。 每天应分析两批。
如果因为质控或其他原因需要弃去一批测定，那么应该在找到原因 并且在纠正错误之后重测一批。 每个浓度的每批次测定应测定两次。 每批都应进行质控品的测定以确定数据的可接受性。 每批测定应改变标本和质控品的顺序。
为了更好地反映实际操作情况，如果可能的话，每批测定至少包括 10份病人标本。 每天每批次之间的间隔时间至少为2小时。
LoD=LoB+DS,β Ds,β=中位数-第5百分位数的值=0.0280.01=0.018
LoD=0.018+0.012=0.030
3.定量限(LoQ)的确立：
预期样本浓度 样本数 X±S
Bias CV（%） TE
0.012
12
0.12±0.003 0
28.6
57.2
0.021 0.030
12
现在一般推荐临床检测方法的批内SD应小于1/4TE，天间SD应小于 1/3TE。
在实际使用过程中，一台仪器上可能进行许多项目的检测，决不能 以一项检测的精密度评价结果代替所有项目的评价结果。
美国临床实验室标准委员会(NCCLS)，现更名为临床实验室标 准研究院（CLSI），为临床定量测定方法精密度的评价出版了EP5文件，该文件经多次修改，于1999年正式批准，2004年在次修改， 发布为EP-5A2文件。
0.18±0.003 14.3 15.4
45.1
12
0.29±0.003 3.3 10.7
24.7
0.039 0.048
12
0.39±0.004 0
9.6
19.2
12
0.50±0.004 4.2 7.3
18.8
TE=Bias+2CV
四、线性范围的确立
概念：
线性范围：检测系统结果具有可接受线性的范围，即：非 线性误差小于规定的误差。
⑴方法内离群点的检验 按以下公式分别计算每个标本用比较方法和实验方法两次重复测定的差值 的绝对值， ΔXi=|xi1-xi2| ΔYi=|yi1-yi2| 这里i代表标本号，总共的标本数量为N。按以下方法计算上述绝对值的平 均值，
⑵方法间离群值的检验
（五）散点图的绘制
（六 ）X数据范围是否足够宽的估计
临床检验方法学评价
山西医科大学第一医院检验科
杨泽华
新的临床项目开展通常需要进行一下工作：
方法学性能的评价 1.精密度评价： 2.准确度评价： 3.最低检测限 4. 线性范围 5.试剂的稳定性 6.抗干扰性能 7.参考区间
诊断性能： 1.灵敏度 2.特异性
一、定量检测方法的精密度评价
临床上对病人标本测定时，通常只是测定一次就发报告，这就是在临床 检验中为什么将方法、仪器或检测系统的精密度作为其性能的第一位的原因。
持续时间
至少20天（不包括有离群值的测量日）
本次讲座以血清ADA的测定为例来说明
仪器的熟悉阶段
其中包括：仪器的操作、保养、标本的制备、试剂的配置、定标、仪器 工作状态的监测等。仪器应在本实验室安装使用足够长的时间以熟悉各 种问题的解决办法。
对于决大多数仪器，5天时间就足够了。根据仪器的复杂程度以及操作 者的技能，该时间可长可短。
线性：提供的检测结果和检测样品中分析物浓度呈比例的 能力。
意义：对于病情观察和疗效评估具有重要意义。
依据文件：EP-6A 多项回归：y=a+b1x（一次多项式或线性拟合） y=a+b1x+b2x2(二次多项式） y+=a+b1x+b2x2+b3x3(三次多项式)
以BECKMAN DxC800和ROCHE MODULAR P模块HDL-C测定比对为例来说明。
（一） 首先确立比较方法和实验方法 以Roche生化分析系统作为比较方法（Comparative method） (X)， Beckman DxC800 作为实验方法（Test method）(Y)。
（二） 标本的选取 实验时间至少做5天，时间长一点更好；至少做40份标本 （如每天至少做8份病人标本），多一点更好。尽可能使 50%的实验标本分析物的含量在参考区间外、可报告内， 各个标本分析物含量越宽越好，进行双份测定，最后取平 均值用于结果的计算。使用当天采集的标本，一份标本不 够时可以将浓度相近的两份标本混合。
（七） 回归方程的计算
（八） 计算偏倚的估计值及其相应的95%可信区间
（九） 结果的解释
三、临床检验项目检测限的建立 ：
意义：一些项目的灵敏度对于临床具有重要的指导价值，比如肿瘤标志物、毒物、 感染性疾病标志物、hsCRP、cTnI、TSH等，检测灵敏度是这些项目的重要性能指标。
以TSH检测试剂盒的发展为例： 第一代TSH检测试剂盒：为采用离心沉降技术的放免试剂，分析灵敏度为1-2mIU/L； 由于灵敏度太低，对甲亢的诊断意义不大； 第二代TSH检测试剂盒：采用固相放射免疫技术，分析灵敏度为0.1-0.2mIU/L；由 于具有较好的灵敏度，因此在甲亢的诊断中开始发挥作用； 第三、四代TSH检测试剂盒；都使用了化学发光免疫技术，分析灵敏度分别可达 0.01-0.02mIU/L和0.001-0.002mIU/L，比第一代试剂盒提高了2-3个数量级，使其 成为甲亢诊断的首选指标。
CLSI的文件有以下三种形式： 标准（Standard） 指南（Guideline） 报告（Report）
多数CLSI文件可在2个水平上达成一致，即提议 （Proposed），此类文件编号为P。批准（Approved），编 号为A。根据评价或数据收集的需要，部分文件也可以介于 上述两者之间，即暂定（tentative）。还有一类委员会报 告，则是尚未通过一致化的文件，编号为R。
依据CLSI发布的EP17-A文件进行。
基本步骤：
1.确定LoB的程序
至少进行60次空白测定，数据如果是正态分布，则 LoB=X+1.645S;如数据为非正态分布，则 LoB=Pct100-α。 2.确定LoD的程序
选择4到6个浓度为LoB1到4倍LoB的低浓度样本， 至少获得60个重复测定结果。如果是正态分布，则 LoD=LoB+CβS；如果是非正态分布LoD=LoB+DS,β 3.确定LoQ的程序
对3到5个不同样品至少作5批，至少40次检测结果。
实例：HBsAg检测限的确立 1.空白限的确立(LoB)
0.003 0.003 0.004 0.004 0.005 0.005 0.005 0.005 0.004 0.004 0.003 0.004 0.010 0.010 0.011 0.013 0.006 0.013 0.015 0.008 0.007 0.006 0.005 0.005 0.003 0.004 0.004 0.007 0.003 0.005 0.005 0.003 0.003 0.004 0.004 0.003 0.007 0.005 0.005 0.005 0.003 0.003 0.005 0.004 0.003 0.005 0.004 0.003 0.003 0.003 0.003 0.004 0.003 0.003 0.005 0.003 0.004 0.004 0.004 0.005
实验室准备用一个检测系统或测定方法进行测 定标本前，应和原有检测系统或者公认的参考方法 一起检测一批病人标本，对测定结果进行统计分析， 用以估计新方法的偏倚，如果偏倚在允许范围内， 说明使用新方法代替原有检测系统不会引入明显的 偏倚，可以在临床使用。
美国临床实验室标准研究院（CLSI），原来为NCCLS，致 力于制定一系列评价临床方法的文件。CLSI是一个全球性、多 学科、非赢利性的标准化和教育性团体，旨在促进医疗卫生领 域中的标准化进程和应用。
仪器精密度的初步评价
目的
熟悉仪器的操作
初步判断仪器的性能
确立离群值判断的界限
如何进行
在熟悉评价程序之后，对同一标本进行20次测定，最好进行两个浓度的标本 的测定。计算SD和CV，如果与预期的差距较大，应与厂商联系，直到问题解决为 止。
初步评价结果
二、利用病人标本进行方法学比对和偏倚的估计
第95百分位数应为95.5秩号的观察结果： LoB=（0.013+0.011)/2=0.012
2.检出限(LoD)的建立：
0.008 0.010 0.011 0.010 0.010 0.008 0.008 0.013 0.015 0.013 0.019 0.013 0.019 0.019 0.019 0.016 0.022 0.015 0.018 0.015 0.024 0.018 0.018 0.015 0.032 0.028 0.034 0.025 0.029 0.025 0.028 0.028 0.035 0.031 0.029 0.028 0.032 0.036 0.039 0.040 0.042 0.045 0.038 0.038 0.036 0.042 0.040 0.045 0.045 0.049 0.048 0.049 0.052 0.048 0.049 0.054 0.058 0.053 0.053 0.045
评价程序的熟悉
由于评价实验中一些步骤在常规标本检测中并不碰到，为了避免这些步骤对精 密度评价实验的干扰，在正式评价之前应实际进行一段时间的实验。这有助于 对评价方案的熟悉。此步骤应进行到轻松地获取5天次的实验结果为止。
在评价方案的熟悉阶段快要结束时，应进行精密度的初步评价。进行20次测定， 理想情况下，进行两个或多个浓度的测定。
目前CLSI公布的与方法学评价有关的文件主要有： EP（Evaluation protocol ）5-A 临床化学精密度 评价批准指南。 EP6-A 定量分析方法的线性评价 EP7-A 临床化学干扰实验 EP9-A2 用患者标本进行方法学比较和偏倚评估 EP10-A2 定量实验方法的初步评价 EP14-A 基质效应的评价
如果厂商要确立一个测定项目的精密度，应该选取高、低、 接近医学决定水平的三个浓度分别进行评价。如果这三个浓度的 精密度或者相对精密度一致，那么这三个浓度的结果就足以说明 问题。如果在这三个浓度处所获得的结果不一致或者有较大的差 异，那么为了更加全面的反映方法的性能，就应该选取