微生物学采样-细菌..
微生物检验标本的正确采集及注意事项
微生物检验标本的正确采集及注意事项正确采集临床微生物标本，直接影响到微生物培养鉴定结果。
可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗，为临床科学用药和成功的感染控制提供依据，是正确、合理使用抗菌药物，延缓细菌耐药，减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步，也是最重要的一步。
为此应正确采集各种细菌学标本。
一、血液标本的采集1、采集方法（1）75%酒精清洁局部皮肤。
（2）待皮肤干后，再用2%—2.5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒，范围不应小于5cm（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。
（3）皮肤碘酒干后（约1min），穿刺采集血液，采血量成人5-10ml，婴幼儿1-5ml。
（4）采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。
2、注意事项（1）怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5℃）采血可提高阳性率，但也要防止因等待而延误时机。
（2）对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。
切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。
（3）培养基与血液之比以10:1为宜，以稀释血液中的抗生素，抗体等杀菌物质；有人主张对接受抗菌药物治疗的病人，培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。
（4）近年研究表明，将血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。
（5）每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。
（6）疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人，以肘动脉或股动脉采血为宜，除在发热期采血外，并要多次采血（24h 3-4次）和增加采血量（可增加10ml）。
（7）采血后立即送检，如不能立即送检可置室温，而不能放置冰箱。
（8）如临床表现很似败血症，而血培养多次阴性者，提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。
二、骨髓的采集1、采集方法在病灶部位或髂前（后）上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml，注入血培养瓶内。
2、注意事项（1）骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞，因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。
微生物标本的采集方法(共52张PPT)
用2%碘酒从穿能刺点。向外除画圆非消无毒，法至消作毒区静域直脉径达穿5cm刺以上取，涂血擦穿，刺否皮肤则2遍，不待干应从留置导管内取血。
1、采样时间：消毒处理后4小时内进行采样
1◎、经日人常工记气录道：吸使引⑤用分后泌抽进物血行消前毒时应间累将积，标使签用超贴过1于000小血时培的应养加强瓶监测颈或更上换，建立标紫外签线消内毒使容用包登记括本，病每周人用7基5%本酒精信擦拭息灯管、并记录 其他使用中消采毒液血染菌时量：间≤1、00cf采u／m血l 部位。注意不要把标签贴在培养瓶条形码上，否则
无1、关采物样品时不间得段进：入在手消术毒室处，理洁后净，区操的作物前品进需行经采清样洁消毒处理方可进入
※ 抽血后未及时混匀血液凝固 不得检出致病性微生物
☂ Ⅰ类环境：洁净手术室Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ级：
手术用房各种物体表面在每日术前和术后湿式擦拭清洁、消毒；
☂手术器械、穿刺针等：无菌生长 ☂血培养次数和采血时间 四、对可疑中心静脉导管相关血流感染 经支气管镜直接吸引 无痰可用3%---5%NaCI 5ml雾吸约5min导痰
※ 储存环境标本来源4℃冰箱----痰、尿液、粪便、活检组织、 气枪冲洗物、导尿管、心包积液、脓和伤口分泌物等
※ 室温（25℃）---血液培养、脑脊液、泌尿生殖道、眼、耳、 鼻、喉、血管导管尖、体液、厌氧菌培养标本。
美国的理念
1970年以前，美国的医院定期对空气和环境表面（如地面、墙壁、台
面）进行培养。到了1970年，CDC和美国医院协会（AHA）主张 停止对环境的常规培养，因为医院感染发生率与空气或环境表 面中总的微生物污染水平不相关。且环境表面或空气中微生物 含量的允许水平也没有有意义的标准。1970---1975年，美国有 25%的医院减少了这种常规的环境培养工作--------一个已经持续 的趋势。
微生物日常工作流程
微生物日常工作流程
微生物实验室的日常工作流程包括样品采集、样品准备、细菌培养、菌落计数、细菌鉴定等步骤。
1. 样品采集
根据实验目的,从不同的源头采集样品,如空气、水、食物、患者等。
采集时要注意无菌操作,避免样品被外源污染。
2. 样品准备
将采集的样品进行留取、稀释等预处理,配制成适合微生物培养的状态。
3. 细菌培养
将处理后的样品接种到培养基上,置于恒温培养箱进行培养。
控制培养条件如温度、湿度等,为微生物生长创造最佳环境。
4. 菌落计数
培养结束后,观察培养皿上菌落的数量、大小、颜色等,进行定量记录。
5. 细菌鉴定
通过菌落形态特征、生化试验等方法,鉴定培养皿上生长的细菌属种。
6. 数据记录
将实验过程和结果详细记录,以便后期分析。
以上是微生物实验室的基本日常工作流程。
根据不同实验目的,流程中可能还包括抗生素敏感性测试、致病性检测等步骤。
微生物样品的取样方法及取样要求
微生物样品的取样方法及取样要求样品取样的要求1）在取样之前应确认货、证是否相符。
2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。
3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。
4）对采集的样品一般要求随机取样。
若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品，可以进行选择取样。
5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。
如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。
6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。
7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。
8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。
9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。
这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。
食品微生物学的取样点食品微生物的取样计划中常包括以下取样点：原料、生产线（半成品、环境）、成品、库存样品、零售商店、或批发市场、进口或出口口岸。
原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。
生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品，包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。
对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源，可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制，同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。
微生物取样方法
微生物取样方法举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按中条配制2采样（空气沉降法）布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37℃培养24小时。
4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。
结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2致病菌的检验沙门氏菌，参照进行金黄色葡球菌，参照进行4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2一般区域：细菌总数≤100个∕cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
微生物送检标本的采集指南
微生物送检标本的采集指南微生物学检验标本的正确采集、运送及处理,与细菌的培养;鉴定结果有十分密切的关系,对可疑烈性呼吸道传染病如SARS、炭疽、肺鼠疫等患者采集标本时,必须按国家规范化要求严格注意生物安全；医生、护士、检验人员均应重视微生物学检验标本正确采集的有关问题,并有责任向患者及其家属进行正确采集标本的宣传和指导;一微生物学检验标本采集、运送、验收和处理注意事项1.标本采集1申请单标记必须清楚姓名、性别、年龄、病例号、临床诊断、标本采集、采集时间、检查项目、抗生素应用情况等,以便实验室能够合理选择培养环境和培养基；2尽量在抗生素应用前采集标本,以提高阳性检出率和避免漏检；3标本采集应严格执行无菌操作；4咽拭、肛拭、伤口拭等拭子标本,应插入运送培养基送检；5痰、尿液伤口拭子等混有正常菌群的标本,不可放入肉汤培养基内送检；6采集标本的容器必须经灭菌处理,但不可用消毒剂;2.标本运送1标本采集后应尽快送到微生物实验室；2标本采集后在室温下超过2h未送达实验室,可视为不合格标本;3.标本验收1实验室只能接受和处理合格标本；2实验室对不合格标本退回必须说明原因,并应及时与临床联系;4.注意事项1微生物检验样本必须按要求采集转运,否则将影响检查结果,并给评价其意义带来麻烦甚至误导；2微生物样本极易被污染,污染的样本杂菌大量繁殖抑制病菌生长,条件致病菌也是致病菌,如污染条件致病菌将误导临床,造成对患者的损害以及经济和时间的浪费;3某些标本离体极易死亡,应在床边采取和接种或立即保温送至实验室检验;室温放置或延迟送检,可使检出的阳性率降低,不能使用冷藏的标本检验;4厌氧菌样本采取必须隔绝空气,混入空气的样本影响检验结果,不能使用;二微生物学检验标本采集和处理1.尿液标本采集和处理通常留取晨起第一次尿液此时尿液在膀胱内储存4h以上；尿液采集后要及时送检,并保证2h内接种；不能及时送检和接种时,尿液应置4～8度冰箱保存；冷藏标本应于8h内接种；淋球菌培养的标本不能冷藏怀疑沙门氏菌感染时,应于发病2w左右采集尿液,怀疑钩端螺旋体感染时,应于发病后2w采集尿液,上述世间此时阳性率高;尿液微生物学检验标本采集方法如下：1中段尿采集法：是临床上最多采用的方法,女性病人先以肥皂水或1：1000高锰酸钾水溶液冲洗外阴及阴道口；男性病人应翻转包皮冲洗,用1：1000新洁尔灭消毒尿道口,用无菌纱布擦干,让病人排尿,弃去前段尿,收集中段尿10—20ml,盛于无菌容器内,立即加盖送检;2导尿法：是一种无菌采集法,主要适用于手术后患者,取10-15毫升尿液于无菌容器内送检,但留置导尿管易造成医院内感染;3集尿法：尿液检查结核分枝杆菌时,可用一洁净容器,留取24h 的尿液,取其沉淀部分200-250毫升盛于清洁瓶内送检;4耻骨上膀胱穿刺法：将病人耻骨上皮肤消毒后,以无菌针筒作膀胱穿刺;此法主要用于尿液中厌氧菌的培养,故在取得尿液后,针头插于橡皮塞上送检;当儿童或婴儿采集中段尿困难或培养结果与患者病情有矛盾时,可考虑用此法采集尿液;5肾盂尿采集法：为确定菌尿是否来自肾脏,可用导尿管采集肾盂尿;首先充分冲洗膀胱,以最后一次冲洗尿作对照,后用导尿管插入输尿管,分别标记左右侧,收集3次尿；如果输尿管菌数比对照尿菌数多或第3次尿中菌数比第1次多,该菌尿可能来自肾脏;反之,如果第1次尿菌数多于第3次尿菌数,则可能来自膀胱;肾盂尿采集法一般应该请泌尿科医师协助进行,并确实做好标记,以防左右侧搞错;2.粪便标本采集和处理1）采集时间：①腹泻患者于急性期,尽量在用药前采集粪便：②伤寒患者于发病2w以后采集粪便；③怀疑霍乱时立即采集粪便送检;2）采集方法:①自然排便法：取新鲜粪便的粘液、脓血、或絮状物等有意义成分,2-3g或1-2ml,盛无菌容器内或置于保存液或增菌液内送检；若疑似霍乱者应置于碱性蛋白胨水中PH:;②直肠拭子法：难以获得粪便或排便困难患者及幼儿可采用此法,将拭子前端用无菌甘油或生理盐水润湿,然后插入肛门约4-5cm幼儿2-3cm,轻轻在直肠内旋转;擦取直肠表面粘液后取出,盛于无菌试管中或保存液中送检;3、痰及下呼吸道标本采集和处理1）自然咳痰法：①晨痰为佳；②先冷开水洗漱、清洁、口腔和牙齿；③再用力咳出呼吸道深部的痰,吐至无菌容器中；④痰量不得少于1ml；⑤痰咳出困难时可先雾化吸入NaCl溶液100g/L,加温到45℃使痰容易咳出;查结核分枝杆菌,应留取24小时痰;2）小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌,将拭子深入咽部,小儿因压舌板刺激引起咳嗽,喷出的肺或气管分泌物粘在拭子上即可送检;3）支气管镜、支气管穿刺、支气管肺泡灌洗等采集法,此采集法必须由医生操作;①气管导管法：用气管插管吸取下呼吸道痰液;②气管镜采集法：用气管镜在肺内病灶附近用导管吸取或用支气管刷直接取得;4）呼吸道标本采集方法：鼻咽拭子法,先用清水漱口,对光坐,头向上仰,口张大,用压舌板轻压舌根,用棉拭子在病人咽后壁,悬雍垂后侧涂抹数次,立即放入无菌试管中;注意事项：痰经过口腔,所以患者应用清水漱口数次,尽量排除口腔内大量杂菌;痰液标本要求涂片镜检：达到低倍镜视野中≤10个鳞状上皮细胞,以及≥25个白细胞方可送检;4、血液及骨髓培养标本1）血培养标本采集指征：对入院的危重患者未进行系统性抗生素治疗前,应及时进行血液培养,患者出现以下体征可作为血培养的重要指征：①发热≥38℃或低热≤36℃②寒热③白细胞增多>10×109/L,特别是在有“核左移”未成熟的或带状的白细胞增多时④粒细胞减少成熟的多核白细胞<1×109/L⑤血小板减少⑥皮肤黏膜出血⑦昏迷⑧多器官衰竭2）最常用的方法为血液增菌培养法;培养瓶分为需氧瓶和厌氧瓶两种;每瓶需要8-10ml;儿童瓶为需氧瓶每瓶需血液1～3ml;另外,脑脊液和胸腹水也可用血液增菌培养瓶,但仅需要儿童瓶,标本量与血液相同;①抗生素治疗前,严格无菌静脉采血8～10ml儿童1～4ml；不同时间或不同部位采取2-3份血液标本；②无菌注入专用培养瓶成人、儿童、需氧菌、厌氧菌、L型菌需要不同培养瓶中送检；③如已用抗生素不能停用时,可于48h内分别于下次用抗生素之前,采用不同时间的3份血液标本送检；④必要时可需氧菌、厌氧菌﹙占10％﹚和L型菌同时培养；⑤疑为心内膜炎时,为提高阳性检出率,可酌情不同部位、不同时间,多次采血或动脉采血进行培养；⑥必要时可取骨髓1～2ml,无菌注入专用培养瓶中送检; 注意事项：血液在正常情况下为无菌标本,应严格按照无菌操作,避免杂菌污染;一般病人在发病初期1～2天或发热高峰时采集血液标本,用一次性注射器在肘静脉采血,采血前局部皮肤应彻底消毒;对亚急性细菌心内膜炎等病人,应从肘动脉或股动脉采血为宜;5、脑脊液1采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液,最好是在应用抗生素之前采集脑脊液;2采集方法：无菌腰穿采集脑脊液3～5ml分装到3个无菌小瓶中各1～2ml;用于细菌和病毒检测时脑脊液量不少于1ml；用于真菌和抗酸杆菌检测脑脊液量不少于2ml;6、穿刺液培养标本1穿刺液培养标本包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等;2采集时间：一般在用抗生素等抗菌药物治疗之前,或在停止使用抗菌药物时候2～3d采集标本; 3采集方法①无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本；②标本采集量应＞1ml结核分支杆菌培养时应为1～5ml；③标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中立即送检；④可在盛器中先加入灭菌肝素然后在加入穿刺液,以防止穿刺液凝固肝素可抗凝5ml标本;7、胃液及胆汁培养标本抽取空腹胃液5ml,置无菌试管内送检；胆汁培养标本有十二指肠引流法或胆囊穿刺法或手术中留取胆汁,采集胆汁量为5ml,置无菌管内送检；胃液和胆汁采集后必须立即送检; 8、脓汁和病灶分泌物培养标本采集前局部消毒后无菌采取脓汁或病灶分泌物或组织;标本采集后立即置无菌管内送检;9、眼、耳、鼻、咽拭子培养标本 1 采集眼分泌物：先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭于拭干,再用无菌棉拭子采集分泌物; 2采集咽分泌物：先用清水漱口,用压舌板将舌下向外压,将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次,切勿接触口腔和舌粘膜;3采集耳、鼻或鼻咽分泌物：直接用拭子涂抹病灶部位,切勿接触周围或皮肤;标本采集过程中应注意避免粘膜上的正常菌群污染,标本采集后连同拭子一起置无菌管内送检; 10、泌尿生殖道培养标本1尿道分泌物：清洗尿道、采取尿道、溢出的脓性等分泌物,或用无菌拭子插入尿道2～4cm处轻轻转动后取出,置无菌试管中送检;2阴道、宫颈分泌物、通过阴道扩张器,用灭菌拭子采取阴道口或宫颈管1～2cm处分泌物,置无菌试管中送检;避免阴道分泌物污染拭子;3宫腔分泌物：在必要时用外套保护膜的灭菌导管抽取;4前列腺液：清洗尿道、冲洗膀胱后用前列腺按摩法采取前列腺液于无菌容器内送检; 5精液：送检者应5天未排精,清洗尿道后手淫或体外排精法,射精于无菌容器内送检; 6溃疡分泌物：灭菌生理盐水溶液清洗患处,用无菌拭子取其边缘或基底部的分泌物,置无菌试管中送检; 11、烧伤感染培养标本烧伤12h后无菌棉拭子操作采集标本；要注意从多个创面取样,烧伤严重感染时易发生败血症,创面取样同时应采集血样送做血培养必须同时做需氧菌培养和厌氧菌培养; 12、厌氧菌感染培养标本1标本采集①标本不能被正常菌群污染,采集时尽量避免接触空气,立即送检,严格遵守无菌操作；②血液及其他体液胸水、腹水、心包液、关节液、胆汁、脑脊液等注入厌氧血培养,立即送检；③深部脓肿,在病灶部位开放前取材,可用针管抽取,针头用无菌胶囊密封,也可用血气采集针抽取,立即送检；④抽取液体标本后,要尽快排除注射器内的空气;2标本运送①标本采集后不得冰箱储存,必须尽快半小时内送实验室；②运送方法：A注射器运送标本抽取后尽快排除空气或接种到专门的运送培养基中直接运送；B含运送培养基的无氧小瓶运送；C厌氧罐运送组织块；D大量液体标本运送时要装满标本瓶并立即驱氧,加盖运送；E一般不采用棉拭子法3建议使用微生物组合：①细菌学涂片：快速回报标本中可能的病原微生物②普通细菌培养：3天③厌氧培养：7天④真菌培养：5天⑤微生物分子生学检测：2天13、真菌感染培养标本1浅部真菌感染标本采集①皮肤：常规消毒皮肤,从皮肤癣菌皮损边缘刮取鳞屑,置无菌平皿内送检,皮肤溃疡则采集病损边缘脓汁或组织；②指趾指甲：消毒指趾指甲并去掉其表面部分,取可疑病变部分,用刀片修成小薄片5～6片置无菌容器内送检；③毛发：采集根部断折处,至少5～6根送检;2深部真菌感染标本采集①血液：无菌采血8～10ml,注入血培养瓶中,立即送检,如不能立刻送检时学培养瓶应放室温,但不可超过8～9h；②脑脊液采样量不少于3～5ml,分别注入两支无菌试管中送检一管做真菌培养和墨汁染色一管测隐球菌抗原和其他培养；③呼吸道及泌尿生殖道深部真菌感染标本采集同一般菌培养标本;14、皮肤主要指伤口、创面脓液等标本采集方法1对采集标本部位应首先清除污垢,再以碘酒或酒精消毒,防止皮肤表面污染菌混入影响检验结果,盛放标本器皿应无菌;2封闭性脓肿：病灶局部消毒后,以无菌干燥注射器穿刺抽取,将采集的脓液注入灭菌试管,对疑似厌氧菌的脓液,抽取脓液后立即排出注射器内的空气,同时将针头插入灭菌橡皮塞,防止空气进入;3开放性脓肿及脓性分泌物：先做局部消毒再用无菌棉拭子采取脓液及病灶深部分泌物,并置无菌容器内送检;4大面积烧伤的创面分泌物因创面的部位不同,细菌种类不同,故应用无菌棉拭子多部位采集脓液及分泌物,置于无菌试管;注意事项：烧伤12小时内的创面及分泌物中细菌检出率较低;15、空气培养标本采集方法1采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前进行采样; 2采样高度：与地面垂直高度80～150cm;3布点方法：室内面积≤30㎡,设一条线上取三点,即中心一点,两端各距墙1m处取一点；室内面积＞30㎡,设东、南、西、北、中5点,其中东、南、西、北距墙1m;4采样方法：用9cm直径普通培养琼脂平板在采样点暴露5分钟后时间培养;5标本保存：①采样后必须尽快送检;②在平皿上注明各采自哪个室及布点的位置如东或南,用胶布把平皿和平皿盖子固定好以免在时间途中平皿和平皿盖子分离而造成污染;③将封好的平皿装入自封袋,并将自封袋封好后送检;1.血液、骨髓、无菌体液：1严格消毒、避免体表正常菌群的污染;2应在抗生素使用之前抽血;如果病人已使用抗生素,应在下次用药前采血;3由于血液、骨髓、无菌体液含有极少量的病原体,就可以造成感染性疾病,而实验室检出率与病原体数量有关,并非只要有病原体就能检验出来,因此血液、骨髓、无菌体液等必须增菌才能获得满意结果;成人未使用抗生素治疗采集骨髓毫升,血液、胸腹水、关节液3-10毫升接种培养瓶；厌氧培养接种上述标本3-10毫升于厌氧培养瓶;4由于菌血症、败血症是间歇排菌,应在发热高峰时采血,对于感染性心内膜炎患者应增加采血次数,以提高阳性率;2.尿液：1导尿法：是一种无菌采集法,主要适用于手术后患者,取10-15毫升尿液于无菌容器内送检,但留置导尿管易造成医院内感染;2中段尿采集法：是临床上最多采用的方法,女性病人先以肥皂水或1：1000高锰酸钾水溶液冲洗外阴及阴道口；男性病人应翻转包皮冲洗,用1：1000新洁尔灭消毒尿道口,用无菌纱布擦干,让病人排尿,弃去前段尿,收集中段尿10—20ml,盛于无菌容器内,立即加盖送检;3肾盂尿采集法：为确定菌尿是否来自肾脏,可用导尿管采集肾盂尿;首先充分冲洗膀胱,以最后一次冲洗尿作对照,后用导尿管插入输尿管,分别标记左右侧,收集3次尿；如果输尿管菌数比对照尿菌数多或第3次尿中菌数比第1次多,该菌尿可能来自肾脏;反之,如果第1次尿菌数多于第3次尿菌数,则可能来自膀胱;肾盂尿采集法一般应该请泌尿科医师协助进行,并确实做好标记,以防左右侧搞错; 4膀胱穿刺尿采集法：将病人耻骨上皮肤消毒后,以无菌针筒作膀胱穿刺;此法主要用于尿液中厌氧菌的培养,故在取得尿液后,针头插于橡皮塞上送检;当儿童或婴儿采集中段尿困难或培养结果与患者病情有矛盾时,可考虑用此法采集尿液;5留尿法：尿液检查结核分枝杆菌时,可用一洁净容器,留取24h的尿液,取其沉淀部分200-250毫升盛于清洁瓶内送检;2、粪便标本采集和处理1采集时间：腹泻患者于急性期,尽量在用药前采集粪便；伤寒患者于发病2w以后采集粪便；怀疑霍乱3.痰液：正常人下呼吸道是无菌的,上呼吸道有正常菌群寄居;下呼吸道的分泌物必须通过上呼吸道,常受上呼吸道的正常菌群的污染;因此对于下呼吸道分泌物培养出来的结果必须分析、判断;一般要求病人清晨用无菌生理盐水漱口6次,再用冷开水漱口一次,用力咳深部的痰液于无菌容器内送检,避免口水的污染;对于痰液不能自主咳出,可采用高渗盐水雾化吸入排痰;4.皮肤、创面：首先按常规消毒皮肤,然后用无菌注射器抽吸皮下病变部分,或用无菌棉签取痂下脓性分泌物送检;5.生殖道分泌物：根据病人主述临床症状,采用不同方式取材：若病人白带呈淡黄色,稀水样,考虑滴虫感染,用无菌棉签取阴道分泌物于1毫升生理盐水内送检,注意保温,因为目前滴虫的检验主要看鞭毛摆动的动力;若病人白带呈“豆腐渣”样,瘙痒症状,用无菌棉签取“豆腐渣”样白带送检,选择不同的送检方式和检验方法可获得不同的检验结果,若怀疑淋病患者,对于男性急性患者,用一支棉签檫去尿道口脓液,轻轻挤压尿道口,再用一支棉签取其脓液送检；对于男性慢性患者或治疗后复查的患者,用一支棉签伸入尿道口2-4厘米,停留数秒钟,旋转取出,因为尿道口寄居的是鳞状上皮细胞,尿道 2-4厘米寄居的是柱状上皮细胞,这是淋球菌寄居的地方; 对于女性患者,用温水湿润的扩阴器,取阴道分泌物或宫颈分泌物,棉签停留数秒钟,让棉签充分吸附分泌物;从直肠取材时,应将棉签插入肛门厘米以上,碰到粪便,应换一个棉签重取;检查淋球菌性咽炎时,应从扁桃体及扁桃体窝取材;支原体检查：支原体是简单的原核细胞,没有细胞壁,缺乏许多细胞器,直接镜检没有意义,只有通过培养,取材显得重要,采集标本时,男性患者可用尿道拭子或清晨中段尿培养,女性推荐阴道拭子;衣原体检查：采取尿道标本,至少在排尿1小时后采集,对于男性尿道取材,棉拭子应伸入尿道2-4厘米因为衣原体寄生在粘膜柱状上皮细胞,而不是寄生在复层鳞状上皮细胞中,转动拭子以获得细胞；对于女性尿道取材,先用一个拭子檫净尿道口,再用棉拭子小伸入尿道2厘米,轻轻转动拭子取出,对于女性宫颈取材,用温水湿润的扩阴器扩张阴道,先用一个拭子檫净宫颈口,然后再用棉拭子小伸入宫颈内1-2厘米,用力摩檫采取宫颈细胞,不采用脓液作培养;直肠取材；可将拭子插入肛门括约肌,在肛门和直肠结合处沿肠壁转动,持续10-30秒,以吸取微生物,并避免粪便的污染;注意：尿液、精液、服过抗生素的病人标本以及新近用过某些阴道制剂、清洁剂等病人标本不宜作衣原体检查;血液标本的采集指南一、血液标本的正确采集方法：1、采血时间：1采血应尽可能在上午6-9时进行,如果不得不在其他时间急查一些项目,评价检验结果应注意以下昼夜节律变化;见附表2采血前病人应禁食12小时,采血前4小时禁止饮茶;3采血尽量安排在其他检查和治疗之前进行;2、采血姿势和止血带的使用：对于有些检验指标来说,卧位采血与坐、立位采血结果是有区别的;坐、立位与卧位相比,静脉渗透压增加,一部分水从心血管系统转移到间质中去;正常直立位时血浆总量比卧位减少12%左右;血液中体积大于4nm的成分不能通过血管壁转移到间质中去,使其血浆含量升高5-15%;常见的指标有：Hb、WBC、RBC、RBC比积、钙、AST、ALP、IGM、IGG、IGA、ALB、TP、CHOL、TG、LDL-CHOL、甲状腺素等;静脉压的改变又进一步导致血管活性物质的释放,直立位时,肾上腺素、血管紧张素和去甲肾上腺素都有7-70%不等的升高;止血带的使用也会改变静脉压力,从而引起与体位改变类似的检验指标的改变;建议：（1）采血时,应尽量统一采血姿势；比较检验结果时,要考虑姿势的影响;（2）应尽量在使用止血带在1分钟内采血；采血时,勿让患者反复做攥拳运动；看见回血,应马上松开止血带;（3）当需要重复使用止血带时,应使用另一上臂;（4）禁止在输液侧采血,这样采血对检验结果有很大的偏差;3、避免溶血：溶血通常被定义为：血细胞成分释放到血浆或血清中;血液由血浆和血细胞成分组成;很多指标在血细胞中的浓度比在血浆中要高很多如：乳酸脱氢酶、血红素、转氨酶、和钾等等;因此样本的溶血会严重干扰检验检测的结果;溶血又分为两种：显性溶血和非显性溶血;显性溶血：指样本经离心,血浆或血清呈现或深或浅的红颜色,这种红色是由红细胞中的血红素释放出来造成的;非显性溶血：血红素大于或等于300mg/L时才能被肉眼看见,同时血小板和白细胞的溶解并没有血红素的释放,这种肉眼不可见的溶血称非显性溶血;LDH、AST、ALT、K、HB、等值异常升高与临床病人症状不符时,应首先考虑非显性溶血原因.建议:1尽量不要在留置病人体内的动、静脉导管内采血;有资料表明,从导管采血比直接从静脉采血发生溶血的可能性要大4倍左右;若确需从导管中采血,为防止抗凝剂污染血样,应弃去相当于导管体积2倍的前几毫升血液;2静脉穿刺采血时,忌为增加血流而挤压穿刺部位而造成溶血发生; 3混匀含抗凝剂的试管时忌用力摇晃,造成溶血,正确的做法是轻轻地颠倒混匀3-4次即可;不含抗凝剂的真空采血管采完血样后禁止摇晃;所有采好的血样应竖直放置保存;4含有抗凝剂的试管采血量比例一定要严格按照规定采取,采血量不足而相对于试管中的抗凝剂来说,一是相对单位体积内的血样被抗凝剂稀释造成检验结果的偏低,另一方面由于渗透压的改变可能发生溶血;如果采血量超过规定比例,则达不到对血样的抗凝效果,出现血样凝固或有大量的小凝块,直接造成样本的不能检测或检测结果的不准确;4、建议临床上采血的顺序：1血培养2不含抗凝剂的试管干燥管3含枸椽酸盐抗凝剂的试管血沉、血交叉、凝血四项4含肝素抗凝剂的试管5含EDTA抗凝剂的试管血常规6含糖分解抑制剂的试管主要是测定乳酸和葡萄糖用。
关于微生物检验标本采集和运送
•
6.采用专用无菌容器收集标本。容器须灭菌处理，防止渗
漏，但不得使用消毒剂。标本中不可添加防腐剂。
•
7.采样后应立即送检，最好在2h内。如不能及时送检，应将标
本置于适当的储存环境待送，但不超过24小时。对可疑淋病奈瑟菌
、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌等对外界环境敏感的
苛养菌感染的患者标本应室温保存。当标本量小于1ml时应于15～
• 3.选择正确的解剖部位，并以适当的技术、方法与 容器收集足量的标本。
• 4.采样时应严格执行无菌操作，将污染可能降至最 低。
• 5.收集真正感染的病灶处的标本，且避免邻近区域 常居菌群的污染。
•
• 注意事项：
• 采样时机
•
抗生素使用前（停用抗生素3至5天或下次用药前）采样
• 采样方法
•
采集无菌部位的标本应严格无菌操作，非无菌部位尽量减少正
关于微Байду номын сангаас物检验标本 采集和运送原则
内容
• 1.微生物标本及常见致病菌 • 2.微生物检验标本采集和运送原则 • 3.图片展示：现场指导和培训
微生物标本及常见致病菌
• 1.血液标本血液标本的细菌培养是诊断菌血症 或败血病的基本方法。
• 正常人的血液是无菌的、如从患者血液中检出细 菌一般应视为病原菌(排除采集标本或具他操作 过程污染)，提示有菌血症或败血症，或心内膜 炎、心包炎、血源性骨髓炎。常见的病原菌主要 有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌(A、B群，肺 炎链球菌等)、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、 脑膜炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等 。
• 2.骨髓标本正常人的骨髓是无菌的。
• 若从患者骨髓中检出细菌(排除污染)，提示细菌 性骨髓炎或菌血症、败血症。常见病原菌同血液
临床微生物标本采集规范总结
定期对工作流程进行评估和审查，不断发现 问题并进行改进，以提高工作效率和质量。
06
总结反思与未来展望
本次总结内容回顾
标本采集流程梳理
详细回顾了临床微生物标本采集 的整个流程，包括采集前准备、 采集方法、标本运输和保存等环
节。
关键控制点分析
对标本采集过程中的关键控制点进 行了深入剖析，如无菌操作技术、 标本采集时机、采集量等因素对标 本质量的影响。
对于某些特殊项目，如细 菌培养、药敏试验等，也 应优先处理，以缩短检验 周期。
及时反馈问题并改进工作流程
反馈问题
分析原因
在接收和处理过程中发现的问题，应及时 反馈给相关科室和人员。
对反馈的问题进行分析，找出问题产生的 原因。
改进措施
持续改进
针对问题产生的原因，制定相应的改进措 施，并落实到实际工作中。
留取后应及时送检，以 免细菌繁殖影响检测结
果。
粪便标本采集要求
自然排便
应采集自然排出的粪便，避免用棉签或手指 从肛门内取便。
无菌容器
采集容器应无菌、干燥、不吸水，避免使用 纸巾或尿布等吸收性材料。
选择合适部分
应选择含有脓血、粘液等异常成分的部分， 若无异常则选择多部位取样。
及时送检
采集后应及时送检，一般不超过2小时，以 免标本干燥或变质。
标本质量控制体系的完善
随着对标本质量要求的不断提高，未来可能会建立更加完 善的标本质量控制体系，确保标本采集、运输、保存等各 个环节的质量可控。
THANKS
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规范标本运输和保存
制定详细的标本运输和保存规范 ，包括温度、光照等环境条件的 控制，确保标本在运输和保存过 程中保持质量稳定。
微生物标本检验的采集(共77张PPT)
【标本采集注意事项】
• ①采血培养应尽量在抗菌药物使用之前，在24h内采集2～3份血培养（一次静脉采血注 入到多个培养瓶中应视为单份血培养），每次2瓶。因为研究已证实，2～3份血培养足以 检测所有的菌血症和真菌血症。
• ②入院前2周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3天，每天采集2份。
• ③对间歇性寒战或发热的患者，应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h采集血液，或于寒 战或发热后1h采集。因为发热时血液中可能没有细菌。
•
皮肤消毒程序
• 严格按以下三步法进行：
• ①75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上。
•
②用一根碘酊或聚维酮碘（碘伏）棉签消毒皮肤，1～2%碘酊作用30s或碘伏作用
60s，从穿刺点向外以1.5～3cm直径画圈进行消毒
• ③75％酒精脱碘。
•
对碘过敏的病人只能用75%酒精消毒，消毒60s，待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺
支气管刷直接取得标本。 • 3.胃内采痰法：无自觉症状的肺结核病人尤其婴幼儿不会咳嗽，
有时将痰误咽入胃中，可采集胃内容物做结核分支杆菌培养。
• 4.管穿刺法：主要用于厌氧菌培养 • * 小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，用棉拭子深入咽部，小儿受到
刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上。
【标本采集注意事项】
【标本的送检地点】 • 检验科微生物室，非正常上班时间送检验
科急诊化验室。
* 标本运送过程中必须保证其安全，防止溢 出，避免细菌污染。
上呼吸道标本的微生物检验
一、检验项目 • 上呼吸道标本的细菌培养、真菌培养、真
菌涂片、结核菌涂片。 二、标本采集
【标本采集前的注意事项】
• 应在抗生素应用前或停药一周后采集标本 ，如不能停用抗生素，应于下次抗生素应 用前采集。
微生物取样方法
微生物取样方法举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制2采样（空气沉降法）2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37℃培养24小时。
4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法2.1细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。
结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×22.2致病菌的检验沙门氏菌，参照GB4789.4进行金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2一般区域：细菌总数≤100个∕cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1.采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
临床微生物标本的采集与送检
①一般要求常温下15-30分钟内接种培养皿，尤其是脑脊液和心包液；除了做结核杆菌、真菌培养的标本应在4℃下保存外，做其他项目的应常温保存。
②严格无菌穿刺。
③为了防止穿刺液的凝固，最好在无菌试管中预先加入灭菌肝素，再注入穿刺液
考虑到方便操作，建议常规血培养应尽量在使用抗菌药物前，于病人寒战或发热开始时30-60分钟内同时于不同部位采集2-3份血培养。
3.采血次数
①.留置深静脉导管且怀疑导管相关血流感染：
至少同时采集2套血培养，其中至少一套来自外周静脉，另一套从导管采集。（1套血培养定义：
从一个部位如静脉穿刺或静脉导管所获血液的培养，不论被接种在1个还是多个血培养瓶内都只能算是1套）
先以无菌生理盐水清洗外阴部或外生殖器，将无菌试管对准尿道口，待尿排出后送检注意事项严格进行无菌操作，因为尿液标本的采集和培养中最大的问题是污染杂菌通常应取晨起第一次尿液送检多数药物均通过尿液排泄，因此采集尿液应在用药前进行长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。导尿留取尿液时，集尿袋内的尿液和导尿管末端的尿液不能用于培养。
发热(≥38℃)或低温(≤36℃),寒战,白细胞增多,皮肤黏膜出血、昏迷、多器官衰竭,血压降低,C反应蛋白升高及呼吸加快,血液病患者出现粒细胞减少,血小板减少等,或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血液培养。新生儿可疑菌血症,应该同时做尿液和脑脊液培养。
2.采血时机：
据研究表明：
细菌通常在病人寒战和发烧前1小时进入血流，因此规范规定在病人发热高峰前1小时抽血。
（二）、微生物检查的标本采集、运送原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查。
环境菌落采样实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解并掌握环境菌落采样的基本原理和操作方法。
2. 学习使用无菌操作技术，确保采样过程中的无菌性。
3. 通过实验，认识不同环境中的微生物种类和数量，分析环境微生物的分布规律。
4. 提高对环境微生物学基本概念的理解。
二、实验原理环境菌落采样是微生物学实验中常用的方法，旨在从环境中获取微生物样本，并对其进行分离、培养和鉴定。
采样过程中，需要遵循无菌操作原则，避免外界杂菌的污染。
通过平板划线法或稀释涂布平板法，可以将样品中的微生物分散成单个细胞，从而获得纯种菌落。
通过观察和统计菌落数量，可以了解不同环境中的微生物种类和数量。
三、实验器材1. 无菌操作台2. 采样工具：无菌试管、无菌棉签、无菌镊子、无菌铲子等3. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖酵母膏培养基等4. 其他：酒精灯、接种环、培养箱、显微镜等四、实验步骤1. 采样准备（1）穿戴无菌操作服、手套和口罩。
（2）将采样工具放入无菌操作台，确保无菌状态。
（3）将培养基放入培养箱，预热至适宜温度。
2. 环境采样（1）选择采样地点，如土壤、水体、空气等。
（2）使用无菌采样工具采集样本，注意避免直接接触地面或水面。
（3）将采样工具放入无菌试管，密封并标记。
3. 样品处理（1）将采样工具上的样本涂抹在培养基表面。
（2）使用接种环将样本分散成单个细胞，形成单菌落。
（3）将接种后的培养基放入培养箱，培养一段时间。
4. 菌落观察与统计（1）使用显微镜观察菌落特征，如颜色、形状、大小等。
（2）统计菌落数量，了解不同环境中的微生物种类和数量。
（3）记录实验结果，包括采样地点、采样时间、菌落数量、菌落特征等。
五、实验结果与分析1. 采样地点与菌落数量通过实验，我们发现不同环境中的菌落数量存在差异。
例如，土壤环境中的菌落数量普遍高于水体环境。
2. 菌落特征实验中观察到的菌落特征多样，包括白色、黄色、绿色、红色等。
部分菌落呈点状、圆形、放射状等。
3. 微生物种类通过菌落特征和显微镜观察，我们初步鉴定出部分微生物种类，如细菌、真菌、放线菌等。
《微生物标本采集》课件
《微生物标本采集》课件目录•微生物标本采集概述•微生物标本采集前的准备•微生物标本采集方法与操作•微生物标本的保存与运输•微生物标本的质量评价与处理•微生物标本采集的注意事项与常见问题解答微生物标本采集概述微生物标本的定义与分类定义微生物标本是指从自然界或人体中分离出来的微生物或其代谢产物，用于研究、教学、诊断等目的。
分类根据来源和性质，微生物标本可分为细菌、真菌、病毒、寄生虫等几大类。
微生物标本采集的目的与意义目的获取具有代表性的微生物样本，为后续的实验研究提供可靠的物质基础。
意义微生物标本采集是研究微生物学、医学、环境科学等领域的基础工作，对于疾病的诊断、治疗、预防以及环境保护等方面具有重要意义。
要求选择合适的采样工具和方法，避免污染；采样后要及时标注样本信息，妥善保存和运输。
原则：无菌操作原则、典型性原则、适时采集原则、安全防护原则。
采集前需充分了解微生物的生物学特性及采样环境；采样时应严格遵守无菌操作规范，确保样本的纯净性；010*********微生物标本采集的原则与要求微生物标本采集前的准备了解患者的病情与病史详细询问患者症状、体征、既往病史以及治疗情况，为选择合适的标本采集部位和器材提供依据。
了解患者是否有传染病史、免疫状况以及近期是否使用过抗生素等药物，以避免对标本采集造成干扰。
对于疑似感染的患者，还需了解其感染部位、感染时间以及可能的感染源等信息。
选择合适的标本采集部位根据患者的病情和病史，选择最有可能检出病原体的部位进行标本采集。
对于不同种类的微生物，需选择不同的采集部位。
例如，对于呼吸道感染，可选择咽拭子、鼻咽拭子或痰液等标本；对于消化道感染，可选择粪便或呕吐物等标本。
在选择采集部位时，还需考虑患者的年龄、性别、生理状况等因素。
确保所有器材和试剂均在有效期内，并按照规范进行保存和使用。
同时，注意检查器材是否完好无损，以避免在采集过程中造成污染或误伤患者。
根据所选的标本采集部位和微生物种类，准备相应的采集器材，如无菌棉签、无菌注射器、无菌试管等。
检验科微生物学常见检测项目解读
检验科微生物学常见检测项目解读微生物学是生物学的一个重要分支，研究微生物的结构、生理、遗传、生态等方面的基本规律。
在临床检验中，微生物学的应用非常广泛，通过对微生物的检测可以准确判断疾病的病因以及治疗方案。
本文将详细介绍检验科微生物学常见的检测项目及其解读。
一、培养和鉴定1.细菌培养和鉴定细菌培养和鉴定是微生物学常见的一项检测项目。
通过对病原体细菌的培养和鉴定，可以确定致病菌的种类以及对抗生素的敏感性。
在细菌培养过程中，检验者需要取得适量的临床标本，如胸水、尿液、血液等，并进行相应的培养试验，最终通过鉴定技术确定致病菌的种类及其抗生素敏感性。
2.真菌培养和鉴定真菌培养和鉴定也是微生物学中常见的检测项目之一。
真菌是一类单细胞或多细胞真核生物，它们广泛存在于自然界中，有些真菌对人体造成感染。
在真菌培养和鉴定中，检验者同样需要获取合适的临床标本，并经过一系列培养和鉴定试验，最终确定致病真菌的种类和药敏结果。
二、微生物快速检测1.微生物快速培养技术随着科技的发展，微生物快速培养技术逐渐应用于临床检验。
相比传统的培养方法，快速培养技术可以在较短的时间内得到细菌或真菌的培养结果，从而提高了疾病的诊断速度和准确性。
常见的微生物快速检测技术包括PCR、MALDI-TOF等。
2.微生物RNA检测微生物RNA检测是一种通过检测细菌或真菌RNA分子来确定病原微生物种类的技术。
该技术具有高灵敏度和特异性，能够帮助医生迅速确定病原微生物，从而指导临床治疗。
在一些特殊感染疾病的诊断中，微生物RNA检测技术发挥了重要作用。
三、药敏试验1.药敏试验药敏试验是一种检测细菌对抗生素敏感性的方法。
在治疗感染性疾病时，合理选用敏感的抗生素对病原微生物进行针对性治疗至关重要。
通过药敏试验可以明确细菌对不同抗生素的敏感性，为临床用药提供科学依据。
2.耐药检测除了敏感性检测，耐药检测也是非常重要的项目。
近年来，随着抗生素的滥用和耐药菌株的增多，耐药检测显得尤为重要。
微生物取样方法
微生物取样方法举例一：一、空气采样及检验方法1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制2采样（空气沉降法）2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37℃培养24小时。
4检测频率：每周空气质量标准：生车间、熟车间、成品车间：低于100个半成品库、成品库：低于10个二、设备的采样与检验方法根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法2.1细菌总数的检验将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。
结果计算表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×22.2致病菌的检验沙门氏菌，参照GB4789.4进行金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2一般区域：细菌总数≤100个∕cm2三、人员手表面细菌污染情况的检验1. 采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
微生物样品的采集(精)
ICMSF的采样方法
有些实验室在每批产品中，仅采一个检样进 行检验，该批产品是否合格，全凭这个检样来决 定。ICMSF方法与此不同，它是从统计学原理来 考虑，对一批产品，检查多少检样，才能够有代 表性，才能客观地反映出该产品的质量而设定的。 ICMSF方法中包括二级法及三级法两种。二 级法只设有n、с及m值，三级法则有n、c、m及M 值。M即附加条件后判定合格的菌数限量。
4）ICMSF采样方案简介 国际食品微生物标准委员会（ICMSF） 所建议的采样计划是目前世界各国在食品微 生物工作中常用的采样方案。 ICMSF提出的采样基本原则根据： a)各种微生物本身对人的危害程度各有不 同。 b）食品经不同条件处理后，其危害度变 化情况：①降低危害度；②危害度未变；③ 增加危害度，来设定采样方案并规定其不同 采样数。
2
微生物样品的采样
• 样品的采样和取、制样是食品微生物检验的重要组成 部分。 • 要得到准确的检测结果，必需正确掌握采样技术、样 品传递、样品保存方法和样品的制备技术，保证样品 在从采样到制样整个过程中的一致性。如果样品的采 取、运送、保存或制备过程中操作不当，或者样品不 具有代表性，就会使实验室的微生物检验结果毫无意 义。 • 对采样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要 保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检 验过程在无菌操作的条件下完成。
根据表1中15种情况的举例，1-3可用三级法，45可用二级法来判定是否合格。 考虑到以上15种情况，分别设定不同的取样数 及检样污染数，在1-9例中检样需采5个（n=5），而 污染检样数设定为c=3，2，1。在10-15例用二级法 则不得检出该致病菌c=0。例如冷冻食品，细菌数按 例2，大肠菌按例5，金黄色葡萄球菌按例8，沙门氏 菌按例11的二级法判定。 对食品处理应酌情考虑，例如生肉火腿中的金 黄色葡萄球菌，被腐败菌所抑制，不易发生食物中 毒，适用例7和例8。烹调加工后的熟肉，对腐败菌 没有抵抗力，则易发生食物中毒，适用例9。加热盐 腌的火腿，水分活性为0.86以下，金黄色葡萄球菌 有增殖的可能性，因此适用例9。沙门氏菌水活性在 0、94以下不能繁殖，适用例11，如上所述，应根据 各种食品的危害度进行设定。
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注2：三级采样方案-n个样品中
允许全部样品中相应微生物指标检验值小于或等于m值； 允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M值之间； 不允许有样品相应微生物指标检验值大于M值。
4
按采样方案的结果判定
������
按三级采样方案设定的指标:
n=5, c=2, m=100cfu/g, M=1000cfu/g������
11
食源性疾病判定标准及处理总则 GB14938 —修订要点2
3.2分类 ������ 细菌性食源性疾病：摄入含有一定数量的 食源性致病菌或细菌毒素（如沙门氏菌、肉毒 毒素等）的食物，而引起的一类感染或中毒性 疾病。 ������ 病毒性食源性疾病：摄入含有一定数量的 病毒（如甲肝病毒、诺如病毒等）的食物而引 起的一类感染性疾病。 ������ 寄生虫性食源性疾病：摄入含有一定数量 的感染性寄生虫（如广州管圆线虫、旋毛虫等） 的食物而引起的一类感染性疾病。
9
4.3 各类食品的采样方法
4.3.3 散装食品或现场制作食品： ������ 根据不同食品的种类和状态及相应检验方法 中规定的检验单位，用无菌采样器现场采集5倍 或以上检验单位的样品，放入无菌采样容器内, 采样总量应满足微生物指标检验的要求。 4.3.4 食源性疾病及食品安全事件的食品样品： 采样量应满足食源性疾病诊断和食品安全事 件病因判定的检验要求。
10
食源性疾病判定标准及处理总则 GB14938 —修订要点1
3.1 术语 ������ 食源性疾病（foodbornedisease）:因摄入食物而导致 的感染性或中毒性疾病。 ������ 食源性感染（foodborneinfection）：摄入被细菌、病 毒或寄生虫污染的食物而引起的感染性疾病。 ������ 食物中毒（food intoxication ）:摄入被生物性毒素、 化学性毒物污染或含有天然毒性成分的食物而引起的急性中 毒性疾病。 ������ 食源性疾病暴发（foodbornedisease outbreak）：因 摄入相同食物而出现两例或两例以上症状相似病例的事件。 ������ 食源性疾病散发（foodbornedisease sporadic occurrence）: 单个病例罹患某种食源性疾病的事件，或两 个及多个病例在时间、地点的分布及病例相互之间并无关联 的单个事件。
5 5 5 5 5 5
1 1 2 0 1 0
10000 10 100 ０/25g 100/25g ０/25g
100000 100 1000 － 1000/25g －
a仅适用于以肉、禽、蔬菜为主要原料的速冻熟制品。
7
4.2.2 各类食品的采样
按相应产品标准的规定执行
4.2.3 食源性疾病及食品安全事件中食品样品的采样
4.2.3.1 由工业化批量生产加工的食品污染导致的食源性疾病或 食品安全事件，食品样品的采集和判定原则按4.2.1和4.2.2执 行。同时，确保采集现场剩余食品样品。 4.2.3.2 由餐饮单位或家庭烹调加工的食品导致的食源性疾病或 食品安全事件，食品样品的采集按GB14938中卫生学检验的要 求执行。
8
GB4789.1-?总则
4.3 各类食品的采样方法
4.3.1 即食类预包装食品： ������ 取相同批次的最小零售原包装，检验前要保持包装 的完整，避免污染。 4.3.2 非即食类预包装食品： 包装小于500g的固态食品或小于500mL的液态食品， 取相同批次最小零售包装； 大于500mL的液态食品，应在采样前摇动或用无菌棒 搅拌液体，使其达到均质后分别从相同批次的n个容器中 采集5倍或以上检验单位的样品； 大于500g的固态食品，应用无菌采样器从同一包装的 几个不同部位分别采取适量样品，放入同一个无菌采样容 器内, 采样总量应满足微生物指标检验的要求。
微生物学样品采集方法
1
良好的样品采集、保存、运送是微生
物检验质量保证最重要的前提条件。
采集的样品的质量常常决定了检验结
果，从而直接影响食物中毒的处理工作。
2
食品卫生微生物学检验—— GB4789.1-?总则
4 样品的采集
4.1 采样原则 ������ 4.1.1 根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、 微生物的危害程度等确定采样方案。 ������ 4.1.2 应采用随机原则进行采样，确保所采集的样 品具有代表性。 ������ 4.1.3 采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能 的外来污染。 ������ 4.1.4 样品在保存和运输的过程中，应采取必要的 措施防止样品中原有微生物的数量变化，保持样品的 原有状态。
3
4.2 采样方案������ 4.2.1 类型 二级采样方案设有n、c和m值 三级采样方案设有n、c、m和M值
n：同一批次产品应采集的样品件数 c：最大可允许超出m值的样品数 m: 微生物指标可接受水平的限量值 M: 微生物指标的最高安全限量值
注1：二级采样方案-n个样品中
允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值大于m值
若5个样品的检验结果均小于或等于m 值（≤100cfu/g） √������ 若≤2个样品位于m和M之间（100 cfu/g<X≤1000cfu/g） √������ 若3个及以上样品的检验结果位于m值和M值之间 X������ 若有任一样品的检验结果大于M值（>1000cfu/g） X
5
例1：婴幼儿配方粉微生物标准
NA NA
5000/g NA
6
加工卫生指标
菌落总数 肠杆菌
例2：速冻预包装面米食品－微生物指标
指标 项目
n c
生制品
m （cfu/g） M（cfu/g） n c
熟制品
m （cfu/g） M（cfu/g）
菌落总数 大肠菌群 霉菌计数 沙门氏菌 金黄色葡萄 球菌 单核细胞增 生性李 斯特 菌a
－ － － ５ 5 － ０ 1 ０/25g 1000/25g － 10000/25g
CODE OF HYGIENICPRACTICE FOR POWDERED FORMULAE FOR INFANTS AND YOUNG CHILDREN （2004－2007）
微生物/采样方案
致病菌
阪崎肠杆菌 沙门氏菌
n
c
m
M
30 60
5 10
0 0
2 2
0/100 g 0/25 g
500/g 0/25 g