饲料中霉菌毒素检测技术PPT课件
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
在饲料中常见的、对人和动物健康造成潜在 危害的毒素主要有：黄曲霉毒素、玉米赤霉 烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、伏马毒素和脱 氧雪腐镰刀菌稀醇（呕吐毒素）等6种毒素
.
5
一、饲料中霉菌毒素的危害
4、霉菌毒素的主要危害
一是可以引起饲料的变质，产生异味，降低 其饲用价值，甚至完全让其失去商品价值
二是饲料被霉菌污染后，导致畜禽的急、慢 性中毒，免疫机能和生产性能下降，造成养 殖业效益的下降
饲料中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法 饲料中T-2毒素的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 配合饲料中T-2毒素的测定薄层色谱法
饲料中T-2毒素的测定高效液相色谱法
高效液相色谱法 高效液相色谱法（荧光） 薄层色谱法 高效液相色谱法
伏马毒素
NY/T1970-2010
饲料中伏马毒素的测定（伏马毒素B1和伏马毒素B2含量）
饲料中玉米赤霉烯酮的测定
饲料中玉米赤霉烯酮的测定 高效液相色谱法 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-质谱/质谱法 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 免疫亲和柱净化－高效液相色谱法 配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定薄层色谱法
饲料中呕吐毒素的测定高效液相色谱法
高效液相色谱法（荧光） 酶联免疫吸附法 薄层色谱法 液相色谱-串联质谱法 胶体金法 荧光光度法 免疫层析法 高效液相色谱法 高效液相色谱法（荧光） 薄层色谱法 酶联免疫吸附法 高效液相色谱法 液相色谱-串联质谱法
液相色谱串联质谱法 高效液相色谱法（荧光）
DB51/T 1082-2010 饲料中伏马毒素B1的测定. 高效液相色谱法
高效液相色谱法
7
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
2、霉菌毒素的主要检测方法
✓ 胶体金免疫层析法 ✓ 酶联免疫吸附法 ✓ 荧光光度法 ✓ 薄层色谱法 ✓ 高效液相色谱（荧光/紫外）法 ✓ 高效液相色谱串联质谱法
饲料中霉菌毒素检测技术
.
1
交流提纲
一、饲料中霉菌毒素的危害 二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法 三、ELISA法的操作要点及注意事项
四、 HPLC法在饲料霉菌检测中的应用
.
质量第一 公正科学 及时准确
2
一、饲料中霉菌毒素的危害
1、什么是霉菌毒素？
霉菌毒素是霉菌产生的次级代谢产物
酵母
次 级
抗生素
真菌
4、检测方案
初筛
胶体金
ELISA
批量样本
可疑样品
阳性样确证
√液
高
荧
质
效
光
联
液
分
.
用
相
析
10
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
5、检测流程
取样 GB/T14699.1 2005 饲料 采样
制样 GB/T20195 动物饲料试样的制备
萃取
净化（主要用于色谱法）
分析测试
.
11
三、ELISA法的操作要点及注意事项
三是残留于畜禽肌肉、内脏或乳中的霉菌毒 素通过食物链传递给消费者，给食品安全带 来更大的风险
.
6
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
1、饲料中主要霉菌毒素的检测标准一览表
霉菌毒素名称
标准号
标准名称
检测方法
黄曲霉毒素
GB/T 30955-2014 GB/T 17480-2008 GB/T 8381-2008 NY/T 2071-2011 NY/T 2550-2014 NY/T 2549-2014 NY/T 2548-2014 DB37/T 2617-2014 GB/T 28716-2012
霉菌
代 谢
产
物
霉菌毒
素
蕈菌
.
3
一、饲料中霉菌毒素的危害
2、霉菌毒素产生的原因
霉菌无处不在，它们可在农作物生长、收获、 运输和储存期间生长并产生毒素
农作物作为饲料原料在生产、销售、储存、运 输过程中如果受到霉菌污染也会发生霉变、遭 受霉菌毒素污染
.
4
一、饲料中霉菌毒素的危害
3、霉菌毒素的种类
现已报道的霉菌毒素大约有300种
高效液相色谱法（紫外） 薄层色谱法
高效液相色谱法
GB/T 30957-2014 饲料中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和柱净化－高效液相色谱法
高效液相色谱法（荧光）
赭曲霉毒素A
GB/T19539-2004 饲料中赭曲霉毒素A的测定
薄层色谱方法 酶联免疫吸附测定法
T-2毒素
DB51/T 1081-2010 GB/T 28718-2012 GB/T 8381.4-2005 DB51/T 1078-2010
1、酶联免疫吸附（ ELISA ）试验的定义及分类
定义：用酶标记抗原或抗体检测液体中未知抗体或抗原的方法。
分类：
➢ 间接法
知抗体
将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗检测液相中未
➢ 双抗体夹心法 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗检测液
相中的可溶性抗原
➢ 竞争法 将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体
检测液相中的可溶性抗原或抗体
准确度
高
பைடு நூலகம்
中
检测成本
昂贵
人员技术要求 专业技术背景 复杂的培训
便宜 无需专业背景，简单培训
样品要求
几乎可以处理任何样品
对样品基质要求高
5-10分钟 单种样品 无需仪器 低 便宜 无需专业背景，简单培训 对样品基质要求非常高
检测效率
可以进行多毒素检测
只能完成单一毒素检测
只能完成单一毒素检测
.
9
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
玉米赤霉烯酮
GB/T19540-2004 DB51/T 1080-2010
DB22/T 1618-2012
GB/T 30956-2014
脱氧雪腐镰刀菌烯醇 GB/T 8381.6-2005
（呕吐毒素）
DB51/T 1079-2010
饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和柱净化－高效液相色谱法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 半定量薄层色谱法 饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱-串联质谱法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 胶体金法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 免疫亲和荧光光度法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 时间分辨荧光免疫层析法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法
.
8
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
3、主要检测方法的特点比较
色谱方法
ELISA
样品处理
复杂，需要净化柱纯化操作 简单，只需萃取过滤
试纸条 简单，只需萃取过滤
检测时间 检测通量 仪器成本
30-60分钟
30-60分钟
单个样品，一种或多种毒素 多个样品，一个毒素
昂贵（HPLC,LC-MS/MS）
便宜 （酶标仪）
.
5
一、饲料中霉菌毒素的危害
4、霉菌毒素的主要危害
一是可以引起饲料的变质，产生异味，降低 其饲用价值，甚至完全让其失去商品价值
二是饲料被霉菌污染后，导致畜禽的急、慢 性中毒，免疫机能和生产性能下降，造成养 殖业效益的下降
饲料中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法 饲料中T-2毒素的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 配合饲料中T-2毒素的测定薄层色谱法
饲料中T-2毒素的测定高效液相色谱法
高效液相色谱法 高效液相色谱法（荧光） 薄层色谱法 高效液相色谱法
伏马毒素
NY/T1970-2010
饲料中伏马毒素的测定（伏马毒素B1和伏马毒素B2含量）
饲料中玉米赤霉烯酮的测定
饲料中玉米赤霉烯酮的测定 高效液相色谱法 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-质谱/质谱法 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 免疫亲和柱净化－高效液相色谱法 配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定薄层色谱法
饲料中呕吐毒素的测定高效液相色谱法
高效液相色谱法（荧光） 酶联免疫吸附法 薄层色谱法 液相色谱-串联质谱法 胶体金法 荧光光度法 免疫层析法 高效液相色谱法 高效液相色谱法（荧光） 薄层色谱法 酶联免疫吸附法 高效液相色谱法 液相色谱-串联质谱法
液相色谱串联质谱法 高效液相色谱法（荧光）
DB51/T 1082-2010 饲料中伏马毒素B1的测定. 高效液相色谱法
高效液相色谱法
7
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
2、霉菌毒素的主要检测方法
✓ 胶体金免疫层析法 ✓ 酶联免疫吸附法 ✓ 荧光光度法 ✓ 薄层色谱法 ✓ 高效液相色谱（荧光/紫外）法 ✓ 高效液相色谱串联质谱法
饲料中霉菌毒素检测技术
.
1
交流提纲
一、饲料中霉菌毒素的危害 二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法 三、ELISA法的操作要点及注意事项
四、 HPLC法在饲料霉菌检测中的应用
.
质量第一 公正科学 及时准确
2
一、饲料中霉菌毒素的危害
1、什么是霉菌毒素？
霉菌毒素是霉菌产生的次级代谢产物
酵母
次 级
抗生素
真菌
4、检测方案
初筛
胶体金
ELISA
批量样本
可疑样品
阳性样确证
√液
高
荧
质
效
光
联
液
分
.
用
相
析
10
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
5、检测流程
取样 GB/T14699.1 2005 饲料 采样
制样 GB/T20195 动物饲料试样的制备
萃取
净化（主要用于色谱法）
分析测试
.
11
三、ELISA法的操作要点及注意事项
三是残留于畜禽肌肉、内脏或乳中的霉菌毒 素通过食物链传递给消费者，给食品安全带 来更大的风险
.
6
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
1、饲料中主要霉菌毒素的检测标准一览表
霉菌毒素名称
标准号
标准名称
检测方法
黄曲霉毒素
GB/T 30955-2014 GB/T 17480-2008 GB/T 8381-2008 NY/T 2071-2011 NY/T 2550-2014 NY/T 2549-2014 NY/T 2548-2014 DB37/T 2617-2014 GB/T 28716-2012
霉菌
代 谢
产
物
霉菌毒
素
蕈菌
.
3
一、饲料中霉菌毒素的危害
2、霉菌毒素产生的原因
霉菌无处不在，它们可在农作物生长、收获、 运输和储存期间生长并产生毒素
农作物作为饲料原料在生产、销售、储存、运 输过程中如果受到霉菌污染也会发生霉变、遭 受霉菌毒素污染
.
4
一、饲料中霉菌毒素的危害
3、霉菌毒素的种类
现已报道的霉菌毒素大约有300种
高效液相色谱法（紫外） 薄层色谱法
高效液相色谱法
GB/T 30957-2014 饲料中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和柱净化－高效液相色谱法
高效液相色谱法（荧光）
赭曲霉毒素A
GB/T19539-2004 饲料中赭曲霉毒素A的测定
薄层色谱方法 酶联免疫吸附测定法
T-2毒素
DB51/T 1081-2010 GB/T 28718-2012 GB/T 8381.4-2005 DB51/T 1078-2010
1、酶联免疫吸附（ ELISA ）试验的定义及分类
定义：用酶标记抗原或抗体检测液体中未知抗体或抗原的方法。
分类：
➢ 间接法
知抗体
将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗检测液相中未
➢ 双抗体夹心法 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗检测液
相中的可溶性抗原
➢ 竞争法 将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体
检测液相中的可溶性抗原或抗体
准确度
高
பைடு நூலகம்
中
检测成本
昂贵
人员技术要求 专业技术背景 复杂的培训
便宜 无需专业背景，简单培训
样品要求
几乎可以处理任何样品
对样品基质要求高
5-10分钟 单种样品 无需仪器 低 便宜 无需专业背景，简单培训 对样品基质要求非常高
检测效率
可以进行多毒素检测
只能完成单一毒素检测
只能完成单一毒素检测
.
9
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
玉米赤霉烯酮
GB/T19540-2004 DB51/T 1080-2010
DB22/T 1618-2012
GB/T 30956-2014
脱氧雪腐镰刀菌烯醇 GB/T 8381.6-2005
（呕吐毒素）
DB51/T 1079-2010
饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 免疫亲和柱净化－高效液相色谱法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 半定量薄层色谱法 饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱-串联质谱法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 胶体金法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 免疫亲和荧光光度法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 时间分辨荧光免疫层析法 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法
.
8
二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
3、主要检测方法的特点比较
色谱方法
ELISA
样品处理
复杂，需要净化柱纯化操作 简单，只需萃取过滤
试纸条 简单，只需萃取过滤
检测时间 检测通量 仪器成本
30-60分钟
30-60分钟
单个样品，一种或多种毒素 多个样品，一个毒素
昂贵（HPLC,LC-MS/MS）
便宜 （酶标仪）