注射用阿奇霉素细菌内毒素检查方法学验证

注射用阿奇霉素细菌内毒素检查方法学验证

【摘要】本实验对阿奇霉素的细菌内毒素检查方法进行研究，建立快速准确的细菌内毒素检查法。按《中国药典》2010版附录ⅪE细菌内毒素检查方法进行。利用不同厂末生产的鲎试荆进行干扰试验，全面考察阿奇霉素对细茼内毒素控查的干扰作用，以确定最佳试验条件。阿奇霉素可以采用稀释方法排除干扰。本细茵内毒素检查结果安全、可靠。

【关键词】阿奇霉素；细菌内毒素；研究

阿奇霉素为半合成的十五员大环内酯类抗生素。阿奇霉素在甲醇、丙酮、氯伤、无水乙醇或稀盐酸中易溶，在水中几乎不溶[1-6]。阿奇霉素适用于化脓性链球菌引起的急性咽炎、急性扁桃体炎；肺炎链球菌、流感嗜血杆菌以及肺炎支原体所致的肺炎；敏感细菌引起的鼻窦炎、中耳炎、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作；敏感细菌引起的皮肤软组织感染；沙眼衣原体及非多种耐药淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宫颈炎[7-12]。本实验对阿奇霉素的细菌内毒素检查方法进行研究，建立快速准确的细菌内毒素检查法。

1.材料与方法

1.1材料

（1）仪器Ms3digital旋涡混合器（北京赛美思仪器设备有限公司），净化工作台（北京卓川电子科技有限公司），DK一600S电热恒温水槽（南京先欧仪器制造有限公司），DMH一1电热干燥箱（南京易普易达科技发展有限公司）。

（2）试剂鲎试剂（北京百星高科技术开发有限公司）；鲎试剂2（湛江博康海洋生物有限公司）鲎试剂3（上海坤肯生物化工有限公司）；鲎试验用水（上海坤肯生物化工有限公司）；细菌内毒素工作标准品（中国药品生物制品检定所）；pH调节剂（上海坤肯生物化工有限公司）。

1.2方法

（1）试验准备所有容器、用具都必须经过处理，去除外源性内毒素，玻璃用具的灭菌处理为180℃2小时或250℃30分钟以上，塑料用具须确证不干扰实验结果。

（2）鲎试剂灵敏度复核按《中国药典》2010版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核。上海坤肯生物化工有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、北京百星高科技术开发有限公司三个厂家的鲎试剂均符合规定。1.2.3阿奇霉素细菌内毒素检查干扰试验

1.3干扰预试验

阿奇霉素细菌内毒素检查干扰本品，加鲎试验用水进行供试品溶液和供试品阳性对照溶液的配制。供试品溶液配制：取三个批号的供试品，分别用用鲎试验用水10mL充分振摇使溶解。制备成0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.42mg/mL、0.83mg/mL、1.67mg/mL、3.33mg/mL六个浓度，并用pH调节剂调节pH值至6～8。细菌内毒素工作标准品溶液稀释方法：用lmL的鲎试验用水溶解1支细菌内毒素工作标准品，用旋涡混合器连续混合十分钟，再用鲎试验用水稀释成4λ、2λ，进行下一步稀释前，至少混和三十秒。供试品阳性对照溶液的配制：制备成0.1mg/mL+2λ、0.2mg/mL+2λ、0.42mg/mL+2λ、0.83mg/mL+2λ、1.67mg/mL+2λ、3.33mg/mL+2λ六个浓度。试验过程：取上海坤肯生物化工有限公司、湛江博康海洋生物有限公司、北京百星高科技术开发有限公司三个厂家的鲎试剂，先分别加人0.1mL 鲎试验用水溶解，再分别加入0.1mL供试品和供试品阳性各浓度稀释液，混匀后，于三十七摄氏度保温六十分钟，同时设阴性和阳性对照，每个浓度平行做2管。三个批号供试品溶液，三个厂家的鲎试剂结果均为浓度为3.33mg/mL未凝固；浓度为1.67mg/mL未凝固；浓度为0.83mg/mL未凝固；浓度为0.42mg/mL未凝固；浓度为0.2mg/mL未凝固；浓度为0.1mg/mL未凝固.三个批号阳性对照溶液，三个厂家的鲎试剂结果为浓度为0.1mg/mL均凝固；浓度为0.2mg/mL凝固；浓度为0.42mg/mL凝固；浓度为0.83mg/mL凝固；浓度为1.67mg/mL凝固；浓度为 3.33mg/mL未凝固。。实验浓度选择含阿奇霉素为1.67mg/mL的稀释液。

1.4供试品的干扰试验

为进一步确证供试品溶液对0.25EU/mL的鲎试剂是否存在干扰作用，分别用鲎试验用水和供试品1.67mg/mL稀释液进行实验，将细菌内毒素工作标准品配制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ浓度的系列内毒素溶液。供试品2.5mg/mL稀释液的制备：取上述三个批号的供试品，分别用鲎试验用水稀释成含吉西他滨1.67mg/mL的供试液。用鲎试验用水与1.67mg/mL供试液分别将细菌内毒素工作标准品稀释成0.5EU/mL、0.25EU/mL、0.125EU/mL、0.0625EU/mL四个浓度，作为细菌内毒素标准品溶液和细菌内毒素供试品溶液。取上述三个厂家的鲎试剂，每支分别加0.1毫升鲎试验用水溶解，加入2λ、λ、0.5λ、0.25λ浓度的系列内毒素溶液和供试液各1毫升，于三十七摄氏度保温六十分钟。供试品批号为131001，鲎试剂厂家为上海坤肯生物化工有限公司，细菌内毒素浓度0.5EU/mL 凝聚，细菌内毒素浓度0.25EU/mL凝聚，细菌内毒素浓度0.125EU/mL一支凝聚其他未凝聚，细菌内毒素浓度0.0625EU/mL未凝聚，E值均为0.2EU/mL，无干扰作用；供试品批号为131001，鲎试剂厂家为湛江博康海洋生物有限公司和北京百星高科技术开发有限公司，细菌内毒素浓度0.5EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.25EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.125EU/mL均未凝聚，细菌内毒素浓度0.0625EU/mL均未凝聚，E值均为0.2EU/mL，均无干扰作用供试品批号为131002、131003，三个鲎试剂厂家，细菌内毒素浓度0.5EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.25EU/mL均凝聚，细菌内毒素浓度0.125EU/mL均未凝聚，细菌内毒素浓度0.0625EU/mL均未凝聚，E值均为0.2EU/mL，均无干扰作用。

2.结果

供试品浓度为经稀释至1.67mg/mL浓度使用λ=0.25EU/mL鲎试剂检验时.证实可消除其对检验的干扰，无干扰作用。本细茵内毒素检查方法安全、可靠。[科]

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