猪血中高纯度血红素的提取工艺
冰醋酸法提取猪血红素的研究
冰醋酸法提取猪血红素的研究胡睿琦;王建敏;王楠;于洋【摘要】[目的]合理利用动物血液,优化冰醋酸提取猪血红素的方法.[方法]试验以新鲜猪血为原料,采用冰醋酸法提取新鲜猪血中的血红素,考察冰醋酸的添加量、反应温度、反应时间、氯化钠添加量等因素对血红素提取的影响.[结果]试验表明,冰醋酸法提取猪血红素的最佳工艺为:冰醋酸添加量为血球4倍,氯化钠添加量为血球的2.4％,反应时间30 min,反应温度为95℃,此条件下提取的血红素含量为40.2％.[结论]研究可为猪血资源的合理开发利用提供理论依据.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)016【总页数】3页(P5211-5213)【关键词】血红素;冰醋酸法;提取【作者】胡睿琦;王建敏;王楠;于洋【作者单位】辽宁医学院,辽宁锦州121001;辽宁医学院,辽宁锦州121001;辽宁医学院,辽宁锦州121001;辽宁医学院,辽宁锦州121001【正文语种】中文【中图分类】S879.9动物血液总量一般为体重的5%～8%，其中含有20%的干物质，而蛋白质含量高达90%，是一巨大的蛋白资源。
然而，我国许多屠宰场将牲畜屠宰后的血液主要用于制作菜肴、血粉、血罐头和血酱油等低附加值的产品，还有相当一部分的血液直接排入环境，这样既浪费了宝贵的蛋白质资源，又严重污染了环境。
合理利用动物血液，可提高经济效益，减少环境污染，同时有益于人类身体健康[1-3]。
从血液中提取的血红素是一种安全、稳定的天然色素，同时也是人类良好的补铁剂，现已逐渐用于食品行业的着色剂[4]。
当今工业上采用冰醋酸法提取血红素[5]，此法是俄国学者Schalteieff最早用于实验室提取、分离血红素的一种方法[6]，它是利用冰醋酸、氯化钠和血共热得到血红素结晶。
利用冰醋酸从猪血球中提取血红素的方法中，国内外很少见到有关冰醋酸的添加量、反应温度、反应时间、氯化钠添加量等因素对血红素提取影响的报道。
一种从猪血中提取高纯度血红素铁制备益血晶颗粒中间物的工艺[发明专利]
![一种从猪血中提取高纯度血红素铁制备益血晶颗粒中间物的工艺[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/ac216c68cc22bcd127ff0cb7.png)
专利名称：一种从猪血中提取高纯度血红素铁制备益血晶颗粒中间物的工艺
专利类型：发明专利
发明人：许云,肖雄,刘瑾,胡锐敏
申请号：CN202011449969.9
申请日：20201212
公开号：CN112574222A
公开日：
20210330
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种从猪血中提取高纯度血红素铁的方法，所述方法，步骤如下：1)新鲜的猪血经过自然凝固；2)多功能胶体磨破碎匀浆；3)离心机离心；4)醋酸法制备；5)高速管式离心与连续自动喷淋洗涤纯化后得到高纯度血红素铁。
申请人：江西济民可信药业有限公司,江西金水宝制药有限公司
地址：336000 江西省宜春市袁州区医药工业园
国籍：CN
代理机构：北京华科联合专利事务所(普通合伙)
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非抗凝猪血提取血红素的工艺优化研究
非抗凝猪血提取血红素的工艺优化研究赵金红;许金鹏;李朝品【摘要】Objective:To introduce and optimize the extraction technology of heme from the whole blood of swine free of anticoagulation.Methods:Optimization of the extraction technology of heme was performed using L9 (34) orthogonal design in reference to homogenate duration, amount of double-distilled water input, volume of hydrochloric acid acetone solution to hemolysate and the mixing time before extracting. Results: The average production was 10.6 g for per kilogram of the blood, and the purity arrived at 90.8％. The final optimum parameter included homogenate duration of 5 min, equal amount of double-distilled water, ratio of hydrochloric acid acetone solution to hemolysate(5∶1 ) and 10min of mixture before extraction. Conclusion: It is feasible and simple to extract the heme from the non-anticoagulated whole blood of swine.%目的:建立并优化非抗凝猪血提取血红素的工艺.方法:采用L9(34)正交试验法,从匀浆时间、匀浆后双蒸水加入量、盐酸丙酮溶液与溶血液的体积比(V盐酸丙酮:V溶血液)、搅拌抽提时间4个主要影响因素对非抗凝猪血提取血红素的工艺进行优化.结果:提取血红素的平均产量为10.6 g/kg非抗凝血,纯度为90.8%;确定的最佳提取工艺参数是:匀浆5 min,匀浆后加入等体积双蒸水,V盐酸丙酮:V溶血液＝5:1,搅拌抽提10 min.结论:利用非抗凝猪血提取血红素切实可行,工艺简单.【期刊名称】《皖南医学院学报》【年(卷),期】2011(030)002【总页数】3页(P106-108)【关键词】血红素;非抗凝猪血;正交试验【作者】赵金红;许金鹏;李朝品【作者单位】皖南医学院,人体寄生虫学教研室,安徽,芜湖,241002;安徽中医学院第一附属医院,检验科,安徽,合肥,230031;皖南医学院,人体寄生虫学教研室,安徽,芜湖,241002【正文语种】中文【中图分类】R914.5血红素又称铁卟啉,由原卟啉Ⅸ与一个铁离子络合而成,广泛存在于动物的血液、肌肉和某些植物组织中,是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素C、过氧化氢酶和过氧化物酶等的辅基。
猪血中高纯度血红素的提取工艺
猪血中高纯度血红素的提取工艺【摘要】目的：确立最佳溶血方法，建立高产量、高纯度血红素提取工艺。
方法：新鲜抗凝猪血为原料，比较了水溶胀法、乙醇法以及超声波法对红细胞溶血效果，以盐酸丙酮配比，盐酸丙酮与溶血液体积比对猪血中血红素提取的影响。
结果：确立超声波法进行红细胞溶血，36.5%浓盐酸与丙酮的体积为1%的血红素抽提液，与溶血液的体积比为5∶1抽提10分钟，最终可从新鲜猪血中得到红素6.0 g/L，纯度达99.8%。
结论：用超声法溶血效果明显优于水溶胀法、乙醇法，溶血率达100%；36.5%浓盐酸与丙酮的体积比为1%的血红素抽提液，有利于规模化生产。
【关键词】猪血；血红素；超声波溶血；提取探索酸性丙酮提取法制备血红素工艺中溶血方法、酸性丙酮及其与溶血液的比例对提取的影响，特别是超声波溶血与丙酮提取方法相结合，建立了快速、简便制备高产量和高纯度血红素的新工艺，为规模化生产提供依据。
1 材料与方法1.1 材料与仪器：原材料：新鲜猪血，南京肉联厂提供。
试剂：血红素标准品(Sigma公司)，其他试剂均为分析纯。
主要仪器与设备：UV-8500型分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)；超声波细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所）。
1.2 实验方法1.2.1 工艺流程：新鲜抗凝猪血→离心→红血球→洗涤→溶血→加酸性丙酮于溶血液→抽提得血红素溶解液→滤液→真空浓缩→氢氧化钠纯化→干燥得血红素。
工艺要点：新鲜猪血加8 g/L柠檬酸三钠为抗凝剂，5 000 r/min，离心15分钟，收集红细胞，再用0.9%氯化钠溶液洗涤红细胞1次。
抽提后的血红素溶液采用真空浓缩并回收丙酮。
浓缩物采用0.1 mol/L NaOH溶解，3 000 r/min，离心10分钟收集上清液。
以1 mol/L盐酸调解pH值至4～5，沉淀血红素，收集沉淀并水洗至中性，50 ℃真空干燥至恒重得血红素。
1.2.2 溶血方法的比较：（1）水溶胀法：取25 ml红细胞，按照去离子水与红细胞溶液体积之比为0.5∶1、1∶1、1.5∶1、2.0∶1、2.5∶1、3.0∶1，6个水平以400 r/min转速搅拌不同时间，用血球计数板计数红细胞破碎数量，比较溶血率。
非抗凝猪血提取血红素的工艺
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基研 础究
食品研究与并发
第１第月 ２０ ６ ０卷 ６ ３年 期
７ｌ ＝ ＝ Ｉ
非抗凝猪 血提取血红 素的工艺
许金鹏 ， 李朝 品 ， 张慧慧 赵金红 王少圣 ， ，
（． １ 安徽理工大学 医学院病原生物学教研 室 ， 安徽 淮南 ２ ２ ０ ；． ３ ０ １２ 芜湖市第二人 民医院检验科 ， 安徽 芜湖 ２ １０ ； ４ ００
３皖南 医学 院， ． 安徽 芜湖 ２ １０ ；． 台县计 划生育服务 中心检验科 ， ４０２４ 凤 安徽 淮 南 ２ ２０ ） ３ １ １
摘 要： 建立并优化非抗凝猪血提取血红素的工艺。以非抗凝猪血为原料 ， 匀浆、 经 超声波溶血 、 ％盐酸 丙酮分 离提 ｌ
猪血红蛋白的提取纯化与鉴定(实验教案)
猪血红蛋白的提取纯化与鉴定系别：生命科学与技术学院专业：生物科学班级：生物科学0701姓名：李嘉、潘婷婷血红蛋白(Hemoglobin , Hb)是动物血液中的一种由4个亚基组成的多亚基蛋白质。
作为体内氧运输的载体具有重要的生理功能。
在 Hb 与氧结合及释放过程中 ,体现了别构蛋白各亚基之间相互作用的正协同效应特征 ,具有很强的代表性 ,是研究别构蛋白特性的良好材料。
此外 ,Hb 的单亚基结构还与食用肉主要色素蛋白-肌红蛋白(Myoglobin , Mb)的结构非常相似 ,均为血红素蛋白质,具有一个血红素活性中心。
只是 Mb 是单亚基结构 ,而 Hb为4亚基结构,相当于Mb的4倍体。
Hb和Mb均具有3种天然诱导体构型 ,即氧合型 (Oxy-Hb ; Oxy-Mb) ,还原型(Red-Hb ; Red-Mb)和氧化型(Met-Hb; Met-Mb) 。
两种蛋白质的相同构型均具有相同的颜色及相似的光谱学特性。
为此 ,也有人用 Hb 作为成本昂贵的 Mb 的代用品来研究食用肉色调变化的规律性。
而目前市售的Hb多采用冷冻干燥法制备 ,多为Met-Hb 构型,其纯度较低 ,氧合活性较差 ,且该产品不能进行诱导体构型转化的调制 ,因而不能满足人们对食用肉色调变化进行研究的要求。
用丰富而廉价动物血液为原料，通过简便生产工艺制备Hb结晶（该结晶属氧化型）可进行多种诱导体形态的调制 ,调制出的各种诱导体具有类似于天然 Hb 的氧合功能特性 ,保持了别构蛋白与底物结合的正协同效应特点 ,同时 ,具有与天然诱导体形态相同的色调变化规律和光谱学特征。
因此 ,可以满足人们进行别构蛋白及食肉色调研究的需求。
此结晶具有稳定的理化性质 ,可长期保存。
一、教学目的通过血红蛋白的提取纯化与鉴定使学生学会生物大分子制备方案设计与实践研究，体验从复杂细胞混合物体系中提取生物大分子的基本原理、过程和方法。
整个实验过程学生独立完成，虽然操作难度较大，所需要的实间较长（64-80学时），但每一步单元操作的原理清晰，技术成熟，实验结果明显，能给学生较多的动手机会。
猪血中血红素提取新方法
第27卷第1期 辽宁石油化工大学学报 Vol.27 No.1 2007年3月 J OURNAL OF L IAON IN G UN IV ERSIT Y OF PETROL EUM&CH EMICAL TECHNOLO GY Mar.2007文章编号:1672-6952(2007)01-0034-03猪血中血红素提取新方法姜传福(渤海大学,辽宁锦州121013)摘 要: 提出了采用有机弱酸HA-有机弱碱BO H的混合溶液作为溶剂,以无机强碱调节p H呈弱酸性,p H 为5～6血红素析出。
经测试血红素产率为0.5%,血红素中铁的质量分数为1.0%。
该法工艺简单,生产周期短无污染,成本低,与文献相比降低了58.7%,经济效益明显。
不失为既经济又环保的新方法,拓宽了血红素提取的新思路,为血红素原料生产提供了依据。
关键词: 血红素; 提取; 环保中图分类号:Q592.1 文献标识码:ANew Met hod for Ext raction of Heme Fro m Pig BloodJ IAN G Chuan-f u(B ohai Universit y,J i nz hou L iaoning121013,P.R.China)Received4Se ptember2006;revised20N ovember2006;accepted15December2006Abstract: The heme was extracted f rom pig blood using the mixed solution of organic weak acid HA and organic weak base BO H.Inorganic strong base was used to adjust the p H value to5～6and the heme was separated out.The yield of heme is tested to be0.5%.The mass fraction of iron in the heme is1.0%.This method is simple,short in production period,low in cost and no pollution.The cost is reduced by58.7%compared to the similar reports by other documents.So there is an obvious advantage in economic profit.This new method for the extraction of heme from pig blood by using organic weak acid HA and organic weak base BO H is both economical and environmentally f riend.Thus the new way to extract heme is broadened and foundation is provided for the production of heme.K ey w ords: Heme;Extraction;Environment protectionCorresponding author.Tel.:+86-416-5189063;fax:+86-416-5189063;e-mail:jcf_1949@ 血红素是由原卟啉与一个铁原子构成的配位化合物。
酶法提取猪血中血红素的工艺研究
即可 ;酶解 10 h 以后 ,血红素得率保持稳定 ,所以为提 高生产效率 ,确定酶解时间为 10 h 即可 。在此条件 下 ,血红素的相对得率达到 771 2 %。
3 结论
采用酶法从猪血中提取血红素 ,根据各种蛋白酶 对血红蛋白的酶解能力强弱 ,选择中性蛋白酶进行酶 解工艺优化 ,确定最佳工艺条件为 :加酶量 2 %、底物 浓度 5 %、酶解温度 50 ℃、酶解时间 10 h ,在此条件下 , 血红素的相对得率达到 771 2 %。该法不但可以降低 成本 ,而且原料来源广 ,具有较好的经济效益和社会效 益 ,市场前景十分乐观 。
化 学 与 生 物 工 程 2009 ,Vol. 26 No. 8
6 1
Chemistry & Bioengineering
酶法提取猪血中血红素的工艺研究
吴保承1 ,2 ,沈国强1 ,2 ,杨春霞2 ,张 栋2 ,浦平南2 ,冯志强2 (1. 江南大学 ,江苏 无锡 214122 ;2. 江苏省生物活性制品加工工程技术研究中心 ,江苏 无锡 214028)
在底物浓度为 5 % (即红血球 25 g) 的条件下 ,分 别加入 1 %、2 %、3 %、4 %、5 %中性蛋白酶 ,放入酶反 应器 ,控制温度为 50 ℃,120 r ·min - 1 酶解 10 h ,离心 , 结晶 ,计算得率 ,结果见图 3 。
由图 3 可知 ,加酶量对血红素得率有较大影响 。 血红素得率随着加酶量的增加而增大 ,当加酶量达到 2 %后 , 血红素得率增长缓慢 。所以 , 选择加酶量为
血红素是制备抗癌特效药 ———血卟啉衍生物的主 要原料 ,临床上用于治疗缺铁性贫血 ,与 ED TA 结合 使用能治疗铅中毒 ,还可用作食品添加剂 。
由于血红素的重要价值 ,近年来 ,引起了研究者的 广泛关注 ,探索出许多新的提取方法 。酶法提取血红 素由于不使用有机溶剂 ,是最环保的一种提取方法 ,但 收率较低[7～11 ] 。作者在此对酶的选择及酶法提取工 艺条件进行了研究 。
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猪血中高纯度血红素的提取工艺【摘要】目的：确立最佳溶血方法，建立高产量、高纯度血红素提取工艺。
方法：新鲜抗凝猪血为原料，比较了水溶胀法、乙醇法以及超声波法对红细胞溶血效果，以盐酸丙酮配比，盐酸丙酮与溶血液体积比对猪血中血红素提取的影响。
结果：确立超声波法进行红细胞溶血，36.5%浓盐酸与丙酮的体积为1%的血红素抽提液，与溶血液的体积比为5∶1抽提10分钟，最终可从新鲜猪血中得到红素6.0 g/L，纯度达99.8%。
结论：用超声法溶血效果明显优于水溶胀法、乙醇法，溶血率达100%；36.5%浓盐酸与丙酮的体积比为1%的血红素抽提液，有利于规模化生产。
【关键词】猪血；血红素；超声波溶血；提取探索酸性丙酮提取法制备血红素工艺中溶血方法、酸性丙酮及其与溶血液的比例对提取的影响，特别是超声波溶血与丙酮提取方法相结合，建立了快速、简便制备高产量和高纯度血红素的新工艺，为规模化生产提供依据。
1 材料与方法1.1 材料与仪器：原材料：新鲜猪血，南京肉联厂提供。
试剂：血红素标准品(Sigma公司)，其他试剂均为分析纯。
主要仪器与设备：UV-8500型分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)；超声波细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所）。
1.2 实验方法1.2.1 工艺流程：新鲜抗凝猪血→离心→红血球→洗涤→溶血→加酸性丙酮于溶血液→抽提得血红素溶解液→滤液→真空浓缩→氢氧化钠纯化→干燥得血红素。
工艺要点：新鲜猪血加8 g/L柠檬酸三钠为抗凝剂，5 000 r/min，离心15分钟，收集红细胞，再用0.9%氯化钠溶液洗涤红细胞1次。
抽提后的血红素溶液采用真空浓缩并回收丙酮。
浓缩物采用0.1 mol/L NaOH溶解，3 000 r/min，离心10分钟收集上清液。
以1 mol/L盐酸调解pH值至4～5，沉淀血红素，收集沉淀并水洗至中性，50 ℃真空干燥至恒重得血红素。
1.2.2 溶血方法的比较：（1）水溶胀法：取25 ml红细胞，按照去离子水与红细胞溶液体积之比为0.5∶1、1∶1、1.5∶1、2.0∶1、2.5∶1、3.0∶1，6个水平以400 r/min转速搅拌不同时间，用血球计数板计数红细胞破碎数量，比较溶血率。
（2）乙醇溶血法：取25 ml红细胞，按照95%乙醇体积占红细胞溶液体积的10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%7个水平以400 r/min转，速搅拌30分钟，比较溶血率。
同1.2.2中（1）的方法。
（3）超声波溶血法：取25 ml 红细胞，加入0.5倍体积去离子水，用冰水浴在功率100W，200W，300W，400W，500W 5个水平下超声10分钟，比较溶血率。
同1.2.2中（1）的方法。
1.2.3 酸性丙酮溶液中浓盐酸与丙酮体积比的确定：（1）按照1.2.2中（3）的方法处理的红细胞溶血液，按酸性丙酮溶液与溶血液体积比4∶1的比例加入红细胞溶血液抽提10分钟，比较36.5％浓盐酸与丙酮体积比为0.5∶100、1∶100、2∶100、3∶100、4∶100、5∶100 5个水平的酸性丙酮溶液抽提效果。
抽提液经过滤、浓缩、纯化、干燥后计算每升猪血中血红素的提取量（g/L）。
1.2.4 抽提时间的确定：取按照1.2.2中（3）的方法处理的红细胞溶血液，按1.2.3方法确立的最佳条件加入4倍于溶血液体积的1％酸性丙酮（36.5％浓盐酸与丙酮的体积比），分别抽提4、6、8、10、12、14分钟。
过滤、浓缩、纯化、干燥后计算每升猪血中血红素的提取量（g/L）。
1.2.5 酸性丙酮与溶血液不同体积比对血红素抽提的影响：为了确定酸性丙酮与溶血液体积比，取按照1.2.2中（3）的方法处理的红细胞溶血液，按照酸性丙酮溶液与溶血液体积比为2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1比例混合，进行抽提，抽提时间按照1.2.4方法确立的最佳时间。
同1.2.3测定血红素提取量（g/L）。
1.2.6 血红素的纯化：将真空浓缩物用0.1 mol/L NaOH溶液溶解后离心，取上清液，以1 mol/L盐酸调解pH值至4～5，沉淀血红素，收集沉淀并水洗至中性，50 ℃真空干燥至恒重得血红素。
1.2.7 血红素含量与纯度测定：以0.1 mol/L NaOH溶解血红素标准样品和提取样品，调整至适宜浓度，参考文献[5]于波长385 nm处测定吸光度值，计算样品中血红素的含量及其纯度。
２结果2.1 溶血方法的比较2.1.1 水溶胀溶血法：在0～4℃下，加入不同体积的去离子水，比较水与红细胞不同比例（V/V）在搅拌不同时间的溶血效果，结果见表1。
2.1.2 乙醇溶血法：取洗净的红细胞加入不同体积倍数的无水乙醇，测定红细胞溶血效果。
结果无水乙醇的量越多，溶血效果越好；在无水乙醇量20％～30%之间，溶血率明显增加；当乙醇量为30％时，溶血率达95％以上；乙醇量在35％以上，细胞全部破碎。
这是因为一定浓度的乙醇可使红细胞细胞膜中蛋白质变性、溶解脂类成分而失去细胞膜结构，从而导致红细胞破碎。
2.1.3 超声波溶血法：取洗净的红细胞或加入0.5体积去离子水，在超声波不同功率下处理10分钟，观察溶血效果。
结果见图1。
综合三种溶血方法的优缺点，本研究确立采取超声波溶血法。
超声波溶血条件为取红血球加入等体积去离子水，以超声波400 W功率工用10分钟，溶血率达到100％。
2.2 酸性丙酮溶液中浓盐酸与丙酮体积比的确立：由于酸性丙酮的pH值不易测定，为了便于工业化大生产，因而比较加入36.5%浓盐酸与丙酮的不同体积比对提取血红素产量的影响。
结果见图2。
2.3 抽提时间的确立：取适量的溶血液，加入4倍于溶血液体积的1％酸性丙酮溶液（36.5％浓盐酸与丙酮的体积比）分别抽提4、6、8、10、12、14分钟，确立血红素提取的最适时间。
结果随着抽提时间增长，血红素产量不断升高，当抽提到10分钟时，血红素产量已经达6 g/L，但随着抽提时间的延长，血红素产量基本上不再增长。
从而确定最佳抽提时间为10分钟。
2.4 酸性丙酮与溶血液体积比对血红素产量的影响：取适量红细胞溶血液，按照酸性丙酮溶液与溶血液体积比为2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1五个水平加入1％酸性丙酮溶液（36.5％浓盐酸与丙酮的体积比）进行抽提10分钟，比较不同比例对血红素的提取量的影响。
结果见图3。
图3 酸性丙酮与溶血液不同比例对血红素提取量的影响提取工艺的验证：按照已建立的血红素提取工艺重复试验５次，每次血红素的提取量及纯度见表２。
3 讨论3.1 溶血方法：血细胞膜破裂或溶解后，就可分离出血红蛋白。
血细胞与适量水混合后，降低了细胞外渗透压，使血细胞吸水导致细胞膜胀裂，同时配以适量的机械作用，如搅拌等，可以提高破裂速度。
由于细胞膜中含有脂蛋白，故凡能使脂类溶解或改变脂类物理性状的物质如氯仿，乙醚等脂，脂溶剂皂盐，肥皂等乳化剂都能引起膜的脂双层破坏而溶血。
但加入有机溶剂，毒性大，特别是用了一定量氯仿，使细胞膜破裂和溶解同时进行，血红蛋白从血细胞中较完全地分离出来。
使用氯仿这种毒性溶剂，不但给血红素和副产品血红蛋白的后处理带来诸多不便，同时还损害操作者的身体健康。
并且可能造成环境污染。
此外，氯仿价格高，在很大程度上增加了生产成本。
本实验使用超声机械破壁，效果好，时间短，缩短了生产时间，降低了生产成本。
3.2 超声溶血时间对血红素产量的影响：血红素的收率和纯度并不是随着超声波溶血时间的增加而增加，而是在超声波溶血时间为10分钟时达到最大值.也就是说在0~10分钟范围内，氯化血红素的收率和纯度随着超声波溶血时间的增加而升高，在10分钟以后，血红素的收率和纯度随着超声波溶血时间的增加反而降低.这是因为超声波虽然有助于红细胞的破碎，但是超声波被吸收后还具有加热作用，有可能导致血红蛋白的部分变性凝聚，阻碍了血红素的释放，同样超声功率过高也有加热作用，进而影响了氯化血红素的纯度和收率。
综合考虑实际生产过程中的各种因素，如超声波产生的噪音，所消耗的电能和生产周期等因素，在以后的实验中，超声波溶血时间设定为10分钟。
3.3 pH对珠蛋白和血红素分离的关系：pH≤2.5时，亚铁血红素与珠蛋白的结合最疏松，而珠蛋白的pI≈3.0，为在血红素与珠蛋白分离的同时，使珠蛋白沉淀，pH值应控制在3.0左右[1]。
本实验考虑有机溶剂状态下，pH值不易测定，确定了在红血球溶液加等体积水，然后加入5倍体积1%（V/V）浓盐酸丙酮。
操作方便，实现容易。
3.4 本工艺提取血红素方法的特点：血红素制备方法有许多种，传统方法以冰醋酸提取血红素[2，3]，1 L血液只可得3～4 g血红素，而且冰醋酸难回收，成本高，收率低，废液处理不当会造成环境污染。
用单宁酸法制备血红素纯度可在90%以上，但是收率低，每升红细胞只能得3～4 g血红素，且单宁酸价格昂贵，不适宜工业生产。
本工艺从新鲜猪血中可以获得血红素 6.0 g/L，纯度为99.8%，生产周期大约3小时，与其它的生产工艺相比，不但可以缩短生产周期(单宁酸法在10小时以上)，且纯度已经达到了99.8%。
本工艺提取的血红素的生产成本仅为2～4元/g，低于单宁酸法（5～7元/g）；更为重要的是避免使用毒性较大、成本较高的氯仿和吡啶，减少了对生产人员健康的危害，避免了因使用氯仿和吡啶所造成的环境污染，同时也简化了提取步骤，为充分利用我国丰富的猪血资源提供了切实可行的技术路线，有利于大规模化生产。
确定红细胞的溶血方法为取红血球加入等体积去离子水，以超声波400 W功率作用10分钟，溶血率达到100％。
建立血红素的提取工艺为36.5％浓盐酸与丙酮的体积比为1%的抽提液，其与加入等体积水超声波溶血液的体积比为5∶1抽提10分钟，再采用NaOH溶解、盐酸沉淀并水洗至中性，50 ℃真空干燥，最终可从新鲜猪血中得到血红素6.0 g/L，纯度达99.8%。
所建立的工艺简单，成本低廉，高效。
参考文献：[1] 袁曦，洪清. 氯化血红素取工艺及质量标准研究[J]. 中国药学杂志，1997，32（6）：360.[2] 宋照军，刘玺.血红素提取纯化新技术研究[J]. 广州食品工业科技，2003，20（1）：6.[3] Hu W，Link H，Lang W. Preparation purification and characterization of Chlorohaemin [J]. Biol Chem Hoppe Seyler，1992，373(6):305.[4] 钟耀广.利用冰醋酸提取血红素的研究[J]. 食品科学，2004，25（4）：90.。