分光光度法测定阿霉素脂质体中的磷脂含量(精)

分光光度法测定阿霉素脂质体中的磷脂

含量

摘要目的：测定阿霉素脂质体中的磷脂含量。方法：用乙醇破坏阿霉素脂质体，再用氯仿萃取，在488nm处用硫氰铁铵分光光度法测定。结果：在5.0～50.0mg.L-1浓度范围内，吸光度与磷脂浓度呈良好的线性关系，平均回收率为99.3%。线性方程为A=3.846C－0.0057，r=0.999 8。结论：用硫氰铁铵分光光度法测定阿霉素脂质体中的磷脂含量，其方法简单、快速、灵敏，可用于阿霉素脂质体的质量控制。

关键词阿霉素脂质体；磷脂；分光光度法

中分类号R914.1

DETERMINATION OF PHOSPHOLIPIDS IN THE LIPOSOME OF ADRIAMYCIN WITH THE SPECTOTROPHOTOMETIC METHOD

Wu Daocheng

(Deparment of Pharmaceutical Chemistry, The Fourth Military Medical University,

Xi’an 710032)

Xi Xiaoli，Hu Jiahui

(School of Automation＆Information Engineering Xi'AN University of technology

Xi'an710048)

Abstract AIM To determine the concentration of phospholipids in the adriamycin liposome.METHODS The sample was broken by ethanol and then extracted by chloroform. The content of phospholipids was measured by Ammorium Ferrothiocyarate Spectrophometric at the wavelength 488nm.RESULTS The experiments showed that the average recoveris of phospholipids was 99.3%,The linear regression equation is A=3.846C-0.0057，r=0.999 8.CONCLUSION This method is simple convenient and sensitive which can be used as the standard of quality.

Key words adriamycin liposome;phospholipids;Spectrophometric

脂质体是一种天然脂类化合物悬浮在水中形成的具有双层封闭结构的泡囊，作为药物载体具有缓释、低毒及一定的组织靶向性等特点。阿霉素是一种临床广泛应用的抗肿瘤药物［1］，将其包封于脂质体中有利于降低急性心脏毒性，延长体内滞留时间，提高疗效［2］。国内外学者对此研究甚多，但大多数包裹率低于60%，本室制备的阿霉素脂质体包裹率可达96%，且粒径均匀，稳定性好。磷脂含量是衡量脂质体的一项重要指标，有关脂质体磷脂含量的测定各国药典均未收载。磷脂的经典测量方法为无机定磷法［3］，该法准确性高，但操作

繁锁，且仅能定磷的含量，对磷脂的氧化降解无法及时反映。本文运用参考文献［4］方法，用乙醇破坏新制备的阿霉素脂质体，再用氯仿萃取，在488nm处用硫氰铁铵分光光度法测定其磷脂含量，并将其值与无机定磷法相比较，结果基本一致。

1 仪器与试药

1.1仪器754型紫外-可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）；UV-2200型紫外可见分光光度计（日本岛津制作所）。

1.2试药蛋黄磷脂标准品（SIGMA公司，纯度99.0%）；阿霉素（浙江海门制药厂，批号 940708）；阿霉素脂质体（本室自制，粒径150±53nm）；硫氰酸铵（浙江温州化学用料厂）；三氯化铁（天津耀华化工厂）。

1.3显色剂的配置称取三氯化铁6.76g，硫氰酸铵5.76g，混合配成250ml 水溶液。

2 方法与结果

2.1 分析条件的选择

2.1.1 最大吸收波长的测定精密称取一定量的磷脂，以氯仿为溶剂配成

300mg.L-1的溶液。吸取该溶液6.0ml，置于50ml分液漏斗中，再加显色剂

6.0ml，摇匀，静置，分出氯仿层。同法以氯仿溶液为空白对照，于300.0～650.0nm波长处扫描该液在488nm波长处有最大吸收，见1。

1 磷脂硫氰铁铵络合物吸收曲线

2.1.2 稳定性实验测定24mg.L-1供试液在24h内吸收度值，结果基本无变化，说明磷脂络合物显色剂的稳定性良好，见表1。

表1 显色反应稳定性试验结果

2.2反应条件的选择影响阿霉素脂质体分光光度法吸收度的关键为脂质体是否完全打开，影响因素有pH值、乙醇用量、反应时间等。固定其中几个因素而考察另一个因素，结果见表2～4。

表2 pH值对阿霉素脂质体吸收度的影响

注：乙醇1.0ml,t 40min

表3 乙醇用量对阿霉素脂质体吸收度的影响

注：pH 9.0，t 40min

表4 反应时间对阿霉素脂质体吸收度的影响

注：pH 9.0，乙醇1.2ml

根据上述实验确定打开阿霉素脂质体脂质膜的最佳条件为：pH值9.0，乙醇1.20ml时间30min。

2.3标准曲线的绘制精密称取一定量的磷脂，以氯仿为溶剂配成1.2mg.L-1的溶液，分别精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、

3.0、3.5、

4.0、4.5、

5.0ml置于100ml容量瓶中，用氯仿溶液稀释至刻度，摇匀。以下操作与2.1.1相同。于488nm波长处测定吸收度(n=6)。磷脂回归方程为：

A=3.846 1C-0.005 8，r=0.999 8

浓度在5.0～50.0mg.ml-1范围内与吸收度呈良好的线性关系。

2.4回收率试验精确称取磷脂适量，制膜，按处方加入阿霉素适量，包裹。精密吸取适量，按2.2项下反应条件打开阿霉素脂质体。另精确称取磷脂适量，用氯仿溶解。以下操作同2.3。于488nm波长处测定吸收度，结果见表5。

表5 磷脂回收率实验结果

2.5样品含量测定精确吸取阿霉素脂质体一定量，按2.2项下条件打开脂质体膜，按2.3方法操作，通过标准曲线计算磷脂含量，与无机定磷法比较，结果见表6。

表6 阿霉素脂质体中磷脂含量测定