粪肠球菌检验操作规程

粪肠球菌检验操作规程

1、质量标准来源：Q/ZOK006-2012

2、名称：粪肠球菌

汉语拼音：Fenchang Qiujun

3、检验过程

3.1、感官：取本品适量，置于非太阳光直射条件下的明亮处，目视检测，本品色泽为灰白色至淡棕黄色，固体外观为粉状或颗粒状，略带腥味，无发霉变质、结块及异味、异臭。；液体外观为淡黄色至淡棕黄色，无悬浮物。

3.2、成品粒度：精密称取本品100g，置于1.19mm金属丝编制筛中，手动或机械振摇10分钟，本品应100％通过1.19mm孔径的筛网。

3.3、水分：取本品1g，精密称定，置于经105℃烘干至恒重的扁形称量瓶中，在105℃条件下干燥至恒重，减失重量应不得过9.0%。

3.5、粪肠球菌：

3.5.1、试剂和培养基

3.5.1.1、稀释液：0.85%生理盐水经121℃高压灭菌20分钟

3.5.1.2、MRS培养基：称取蛋白胨10.0g、牛肉粉5.0g、酵母粉

4.0g、葡萄糖20.0g、吐温80-1.0ml、七水磷酸氢二钾2.0g、三水醋酸钠

5.0g、柠檬酸三铵2.0g、七水硫酸镁0.2g、四水硫酸锰0.05g、琼脂粉15.0g，将上述各组分置于1000ml纯化水中，加热搅拌使溶解，调pH值为7.2，经121℃高压灭菌20分钟，在无菌条件下注入灭菌后的平皿中，每个平皿约注入15ml培养基。

3.5.2、检测方法：

在无菌条件取样25g，置于含225ml灭菌稀释液的锥形瓶中，其中置玻璃珠数颗，振摇使样品完全分散于溶液中，即为1:10的稀释液；用移液器或灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，置于含灭菌稀释剂9ml的离心管（或试管）中，密封，摇匀；按上述稀释次序递次稀释至适宜的稀释倍数；取2-3个适宜稀释倍数离心管，用移液器或灭菌吸管吸取0.1ml，接种至MRS培养基平皿上，每个浓度接种两个平皿，使用灭菌后的涂布棒小心涂布接种液于培养基表面，涂布好的平皿盖好后室温静置15分钟，密封并倒置平皿于37±1℃培养箱中培养48±2小时观察。

3.5.3、计数结果：

选择30-300个菌落，无蔓延菌落生长的培养皿进行计数，两个平板若其中一个有较大片状菌落生长时，不宜采用，若片状菌落不足平板的一半，另一半菌落生长分布均匀，可计算一半平板的菌落数乘2以代表整个平皿的菌落数。

以同浓度的两个培养皿菌落数平均值乘以样品稀释倍数计算粪肠球菌总数。